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正文內(nèi)容

灰霉aur1基因的必需性分析-資料下載頁(yè)

2025-05-10 03:15本頁(yè)面
  

【正文】 染色體 DNA為模板,使用上述兩對(duì)引物分別 PCR擴(kuò)增 AUR1基因中的上游 ( 以后簡(jiǎn)稱為 P端 ) 序列與下游 ( 以后簡(jiǎn)稱為 T端 ) 序列。 其中 Kpn I和 Cla I為質(zhì)粒 pTFCM上的單一酶切位點(diǎn),而在灰霉 AUR1中也含有這兩個(gè)酶切位點(diǎn)。 將擴(kuò)增片段插入到質(zhì)粒 pTFCM的潮霉素抗性表達(dá)框的兩端,即構(gòu)建出 AUR1基因的缺失載體。 同源重組轉(zhuǎn)化子的檢測(cè) 以轉(zhuǎn)化子基因組 D N A為模板,用引物 Phyg : PTout : 進(jìn)行 PCR檢測(cè)。如果發(fā)生同源重組,則可以擴(kuò)增出包括 HYG的一部分序列和 T端的全部序列以及至 PTout的序列,如果沒(méi)有發(fā)生同源重組則不能擴(kuò)增出條帶。 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化灰葡萄孢菌
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