全面組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室及操作技術(shù)-資料下載頁
2025-05-10 00:26本頁面
【正文】 量元素 含量 鐵鹽 含量 有機(jī)物 含量 其他 含量 KNO3 80 H3BO3 Fe2(SO4)3 肌醇 100 蔗糖 30000 Ca(NO3)2 4H2O 300 MnSO4 4H2O 煙酸 瓊脂 8000 MgSO4 7H2O 720 ZnSO4 7H2O 鹽酸硫胺素 NaH2PO4 4H2O MoO3 01 鹽酸吡哆辛 KCl 65 CuSO4 5H2O 1 甘氨酸 3 Na2SO4 200 附表： White培養(yǎng)基 B5培養(yǎng)基 ◆ 1968年由 Gamb等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì) ◆ 含有較低的銨鹽 ◆ 較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素 組成成分 數(shù)量 (mg/l） 組成成分 數(shù)量 (mg/l) KNO3 2500 FeSO47H2O CaCl22H2O 150 CuSO45H2O MgSO47H2O 250 蔗糖 40 (NH4)2SO4 134 pH KI 肌醇 100 H3BO4 煙酸 MnSO44H2O 10 鹽酸吡哆醇 ZnSO47H2O 激動(dòng)素 Na2MoO42H2O 2,4－ D － CoCl26H2O 鹽酸硫銨 10 Na2EDTA B5培養(yǎng)基的組成和配方 N6培養(yǎng)基 ◆ 1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)設(shè)計(jì) ◆ KNO3和（ NH4） SO4含量高，不含鉬 組成成分 數(shù)量 (mg/l) 組成成分 (mg/l) KNO3 Na2－ EDTA CaCl22H2O 166 FeSO47H2O MgSO47H2O 185 蔗糖 50 KH2PO4 400 pH (NH4)2SO4 463 煙酸 KI 鹽酸吡哆醇 H3BO3 甘氨酸 MnSO44H2O 鹽酸硫銨 ZnSO47H2O N6培養(yǎng)基組成及配方 配制培養(yǎng)基應(yīng)做好幾點(diǎn)工作： 實(shí)驗(yàn)用具的準(zhǔn)備。包括配制過程中所需電爐、酸度計(jì)、高壓滅菌鍋等設(shè)備及其他玻璃器皿的清洗和準(zhǔn)備 試劑、藥品的準(zhǔn)備 根據(jù)培養(yǎng)基的配方、母液擴(kuò)大倍數(shù)及需要配制的培養(yǎng)基體積計(jì)算所需各種母液及其他附加物的量 三、培養(yǎng)基的配制 具體操作如下： 取規(guī)定數(shù)量的糖源和凝固劑置于燒杯或搪瓷鍋內(nèi)，加蒸餾水加熱使之溶解，并不斷攪拌； 根據(jù)計(jì)算所需量依次加入大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)母液及其他特殊的附加物，攪拌均勻； 加水定容至規(guī)定體積，攪拌均勻； 調(diào)整培養(yǎng)基的 pH值； 分裝； 封口。 組織培養(yǎng)必須在無菌環(huán)境中進(jìn)行，因此培養(yǎng)基的滅菌操作非常重要。 培養(yǎng)基分裝封口后立刻進(jìn)行滅菌，至少在 24h內(nèi)完成滅菌程序。 一般采用的是 高壓蒸汽滅菌 。 四、培養(yǎng)基的滅菌 滅菌鍋有很多種，實(shí)驗(yàn)室中常用手提式高壓蒸汽滅菌鍋，使用時(shí)要注意一下幾點(diǎn)： 鍋中應(yīng)放足量的水，以免造成空燒或干燒； 裝鍋時(shí)不要過度傾斜，可保持內(nèi)部有一定的空 間，利于蒸汽流動(dòng)； 增壓前高壓鍋內(nèi)的空氣必須排凈，否則易影響 滅菌效果； 滅菌過程中，應(yīng)盡量保持壓力恒定，嚴(yán)格遵守滅菌時(shí)間； 排氣降壓時(shí)應(yīng)緩慢進(jìn)行； 只有待高壓鍋內(nèi)壓力表指針恢復(fù)到零后，才能開啟壓力鍋； 高壓鍋工作時(shí)，應(yīng)有專人看守。 ◆ 滅菌后的培養(yǎng)基經(jīng)冷卻和凝固后即可使用檢驗(yàn)滅菌效果。 檢驗(yàn)方法： 將培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室中 3天，若沒有污染現(xiàn)象，說明滅菌可靠，可以使用。 ◆ 保存在低溫條件下。常溫下保存時(shí)要進(jìn)行防塵和避光處理。 ◆ 保存時(shí)間不可過長(zhǎng)。 五、培養(yǎng)基的保存
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