組織培養(yǎng)育苗技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-15 07:45本頁(yè)面
【正文】 體胚培養(yǎng)成無(wú)菌苗 ，取其子葉 、 葉 、 莖 、 胚軸等作為培養(yǎng)材料 ， 更易分化出苗而獲得植株 。 2)保藏 隨采隨用最好 ， 如需遠(yuǎn)運(yùn) ， 要注意保濕 、 通氣和保持適宜的溫度 ， 如貯藏 ， 應(yīng)置于低溫冰箱內(nèi) 。 （ 二 ） 材料的切取 植物材料可先切取約 3㎝ 長(zhǎng) ， 把帶泥土和雜菌多 、 易污染的部位削掉 ， 以便進(jìn)一步?jīng)_洗消毒 ， 然后根據(jù)組織培養(yǎng)的目的和要求 ， 進(jìn)一步切取所需的部位 。 1． 莖尖的切取 ：芽先端生長(zhǎng)點(diǎn)附近的形態(tài) ， 依植物種類其形態(tài)大小各不相同 ， 有的比較大 ， 容易分離；有的則比較小或葉原基著生直到生長(zhǎng)點(diǎn)附近或莖隨生長(zhǎng)點(diǎn)進(jìn)入先端漸次凹陷 ， 致使生長(zhǎng)點(diǎn)被包埋起來(lái) ， 就不容易分離 。 消毒后的材料 ， 在解剖鏡下操作 。 左手拿解剖針 ， 將材料由莖的切口處刺在上面 ， 保持于空中 ， 在解剖鏡下觀察 ， 用右手拿解剖刀 ， 將幼葉或葉原基一一切除 ， 使生長(zhǎng)點(diǎn)部分露出 。 為了防止病毒污染 ， 需換用消毒過(guò)的工具 ， 按順序大小切取分離生長(zhǎng)點(diǎn)附近組織 。 還有一個(gè)方法以是將材料放在滅過(guò)菌的載玻片或?yàn)V紙上 ， 兩手持解剖針 、 小刀 、 鑷子等照上述方法除掉葉原基 。 分離的生長(zhǎng)點(diǎn)組織 ， 切口朝下接種在培養(yǎng)基上 ， 分離時(shí)注意不要使莖尖受傷 ， 操作要快 ， 組織過(guò)小成活率低 ， 生長(zhǎng)慢 ， 很難得到植株 。 2． 較大材料的切取 ；組織培養(yǎng)中較大材料的切取比較簡(jiǎn)便 ， 用肉眼就可進(jìn)行 。 材料消毒后濾紙吸干 ， 在無(wú)菌條件下 ， 用解剖刀切取所需大小的葉片 、 莖等 。 注意工具用一次要消毒一次 ， 濾紙也要及時(shí)更換 ， 防止交叉感染 。 植物體表面帶菌較多 ， 而內(nèi)部是無(wú)菌的 。 有的材料很大 ， 則可用打孔器從中取一部分就比較安全 。 3． 樹(shù)木形成層的切?。?粗的樹(shù)枝和樹(shù)干表面進(jìn)行滅菌是不可能的 ， 可剝?nèi)?shù)皮露出內(nèi)部組織 。 再用消毒過(guò)的小刀削一下 ， 留下一些韌皮部 ，就達(dá)到形成層處了 。 用尖刀或尖頭鑷子在上面劃 1～ 2㎝ 間隔的棋盤格 ，再用鑷子把它一塊塊取下來(lái) ， 然后把這種帶韌皮部和形成層的組織接種在培養(yǎng)基上 。 4． 從無(wú)菌種子發(fā)芽得到的材料 ：對(duì)種子進(jìn)行消毒處理 ， 播種在消過(guò)毒的沙子等基質(zhì)上 ， 這樣從長(zhǎng)出的幼苗切取材料被污染的機(jī)會(huì)少 ， 有利于進(jìn)行培養(yǎng) 。 根 、 子葉 、 幼芽 、 上胚軸等部分皆可切取培養(yǎng) 。 5． 外植體的大?。?組織培養(yǎng)所用外植體的大小 ， 大多由植物材料的形狀所決定 ， 小到數(shù)毫克 ， 通常在 10～ 100毫克 （ 三 ） 材料的消毒 1． 消毒的目的和作用 ：植物組織培養(yǎng)用的材料大部分取自田間 ， 有的是地上部 ， 而有的是地下部 ， 埋藏于土中 ， 帶有大量的細(xì)菌和霉菌 ， 這是無(wú)菌組織培養(yǎng)的一大障礙 ， 因?yàn)榻M織培養(yǎng)要求絕對(duì)的無(wú)菌 ， 否則就無(wú)法確立最基本的工作 。 雜菌的發(fā)生與培養(yǎng)用的組織大小 、 植物種類 、 分離季節(jié)及操作者的技術(shù)有關(guān) 。 消毒是為了消滅雜菌 ， 保證無(wú)菌組織培養(yǎng)的順利進(jìn)行 。但不同植物及不同部位的組織有其不同的特點(diǎn) ， 所以開(kāi)始都要進(jìn)行摸索試驗(yàn) ， 以達(dá)到最佳的消毒效果 ， 即消滅培養(yǎng)材料上的病菌 ， 而不損傷或只輕微損傷組織材料 ，不影響其生長(zhǎng) 。 2． 幾種常用的消毒劑： 消毒劑既要有良好的作用 ， 又要易被蒸餾水沖洗掉或自行分解的物質(zhì) ， 而且不會(huì)損傷材料 ， 影響生長(zhǎng) 。 常用的消毒劑的使用效果 。 次氯酸鈉能分解產(chǎn)生具有殺菌能力的氯氣而揮發(fā)掉 。 過(guò)氧化氫也會(huì)分解成無(wú)害的化合物 。 硝酸銀在加入氯化鈉后就成不活潑物質(zhì) 。 氯化汞消毒效果很好 ， 只是難以除去 。 開(kāi)始消毒時(shí) ， 材料先放入 70%酒精中數(shù)秒鐘 ， 酒精有很好的滅菌作用 ， 又利于材料的濕潤(rùn) ， 從而易使消毒劑滲入 ， 以殺死病菌 。 3． 消毒的方法： 消毒前材料先要用自來(lái)水沖洗 10分鐘 ，有的材料較臟要用洗衣粉等洗滌 ， 把泥土等洗凈 。 有的地下部等組織 ， 帶須杈多的還要用小刀削光滑 ， 以利于徹底滅菌 。 有的材料表面著生較多的茸毛 ， 阻止了消毒劑的沾著 ， 影響消毒效果 ， 則可采用濕潤(rùn)劑 ， 如加入洗衣粉等 ， 這樣可大大提高消毒劉的消毒效果 ， 植物不同器官的消毒順序 。 四 、 接種 材料的接種必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行 。 經(jīng)過(guò)切取消毒的材料 ， 用消過(guò)毒的器械放置在消過(guò)毒的制備好的培養(yǎng)基上 。接種材料于培養(yǎng)基上不能過(guò)分密集 ， 以免雜菌感染時(shí)互相影響 。 五 、 培養(yǎng) 接種好的材料通常放置于溫度 26177。 2℃ 的恒溫培養(yǎng)室中培養(yǎng) 。 對(duì)木本植物來(lái)說(shuō) ， 接種 10～ 15天左右可形成肉眼可見(jiàn)的愈傷組織 ，之后轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基 。 分化芽和根所需的時(shí)間 ， 各樹(shù)種有差異 ，一般需半個(gè)月到一個(gè)月 ， 基至更長(zhǎng)時(shí)間 。 在培養(yǎng)過(guò)程中 ， 如發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基不適宜于愈傷組織的生長(zhǎng)和分化 ，則把愈傷組織切成小塊 ， 轉(zhuǎn)到新鮮的培養(yǎng)基中 ， 或放到各種不同成分 、 不同濃度激素組合培養(yǎng)基上篩選試驗(yàn) 。 一般需要 20～ 30天轉(zhuǎn)移培養(yǎng)一次 。 愈傷組織如先分化芽 ， 則容易誘導(dǎo)根而形成完整植株；如先誘導(dǎo)出根 ， 則很難誘導(dǎo)出芽 。 但在有的樹(shù)種中 （ 如楊樹(shù) ） ， 也可先誘導(dǎo)出根 ， 然后根出芽形成苗木 。 一般樹(shù)木接種長(zhǎng)出愈傷組織后，先轉(zhuǎn)接到發(fā)芽培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出無(wú)根苗，當(dāng)無(wú)根試管苗木長(zhǎng)到 3～ 5㎝ 時(shí)，就可在無(wú)菌條件下，從苗的基部切下，進(jìn)行芽體轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)接到發(fā)根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)根的發(fā)生，一般需加強(qiáng)光照（ 1500～ 2022勒克斯）或放于自然光下，經(jīng) 3周左右可以長(zhǎng)出根而逐步形成完整的根系。
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