【導讀】度科研績效考核以及職稱評聘等工作中認定為“校級”科研項目立項?？蒲许椖可陥筮^程中不予優(yōu)先考慮。科研條件，保障能在該中心完成大部分研究工作。研的支出科目自行填寫。明是提高抗腫瘤免疫療法的關鍵。髓樣抑制性細胞是一群引起腫瘤免疫逃逸的。重要細胞，以之為靶點的抗腫瘤策略是腫瘤研究的熱點之一，但是目前調控MDSCs募集，增殖，分化發(fā)育的分子機制還未得以詳細闡明。的調控，相關研究尚未見報道。本項目擬通過流式細胞術，免疫組化，體外細胞實驗和。的1900萬人，到2035年將達到2400萬人。2020年全球共新增癌癥病例1400萬并有。其中，中國新增病例和死亡病例均居世界第一位[1]，形勢更為嚴峻。術后的高復發(fā)性仍是當前腫瘤治療的主要難題。瘤免疫逃逸現(xiàn)象的存在常常導致腫瘤免疫療法的失敗。多個研究小組的研究結果表明荷瘤宿主體內(nèi)MDSCs的大量蓄

　　

【正文】 express 的細胞，經(jīng)過篩選獲得穩(wěn)定轉染的細胞。 7）構建荷瘤小鼠 將步驟 6 中的重組細胞以及他們對應的對照細胞（未進行轉 染的細胞）以 1X106背部皮下接種于 BABL/c 小鼠，構建荷瘤小鼠模型。 8）檢測 MMP28 對荷瘤小鼠體內(nèi) MDSCs 的影響 ① 分別分離荷瘤小鼠的骨髓，脾臟，淋巴結和腫瘤組織中的淋巴細胞，進行 Gr1+CD11b+雙陽性細胞的 FCM 分析，研究 MMP28 表達的變化是否會影響小鼠體內(nèi) MDSCs 的數(shù)量或百分比。 ② 免疫組化檢測腫瘤組織中的 MDSCs。 9） 測定荷瘤小鼠的腫瘤體積，重量以及生存期 每隔 5 天用游標卡尺對荷瘤小鼠的腫瘤大小，小鼠的體重進行測量和記錄，同時記錄不同組別荷瘤小鼠的死亡時間及小鼠的平均生存天數(shù) 。 3. 可可 行行 性性 分分 析析 腫瘤免疫逃逸的存在是制約腫瘤免疫療法成功的限速因素之一， MDSCs 在腫瘤免疫逃逸中的作用 已被得到廣泛的接受。 MMP28 作為基質金屬蛋白酶家族中的成員之一 ， 其在炎癥反應，免疫反應和腫瘤轉移中發(fā)揮著重要的作用 這一點也已得到了多個研究小組的支持 。 特別是 已有的研究表明 MMP28 的在胃癌，結直腸癌 ,胰腺癌等多種腫瘤組織的高表達，并 且 可促進巨噬細胞向 M2 型巨噬細胞的方向極化 。 MMP28 在腫瘤微環(huán)境中表達升高又具有潛在的免疫抑制作用的這 兩個 特點 是 我們推測 MMP28 可能不僅參與了巨噬細胞向 M2 的極化過程 ，而且很可能也參與了對 MDSCs 的調控 這一設想的科學依據(jù)，也是我們這一課題具有可行性的理論基礎 。 同時我們的課題小組的成員既有長期工作在臨床的腫瘤內(nèi)科醫(yī)生，又有熟悉分子生物學和免疫學的博士碩士，這為課題的實際可行提供了技術上的保證。 六六 、 項項 目目 創(chuàng)創(chuàng) 新新 點點 MDSCs 在腫瘤免疫逃逸中的作用是近年來腫瘤基礎研究和臨床研究領域中的熱點，但是關于 MDSCs 是如何從骨髓遷移至腫瘤微環(huán)境中，又是如何在腫瘤微環(huán)境中增殖，發(fā)育，分化的，這些問題尚未得以闡明。 MMP28在腫瘤組織中高表達并具有潛在的免 疫抑制作用使得它成為調控 MDSCs 的一個極具潛力的分子，但是相關研究尚未見報導，本課題的創(chuàng)新點即在于首次闡明 MMP28 在調控 MDSCs 中的作用。 七七 、 項項 目目 研研 究究 基基 礎礎 及及 條條 件件 （包括 申請人的前期工作基礎、研究 技術積累、 主要儀器 設備 等 條件） 圍繞本項目，課題組已熟練掌握了利用免疫磁珠從 BALB/c 小鼠骨髓中分離獲得CD11b+Gr1+的 MDSCs 細胞的技術，流式細胞術分析顯示分離獲得的 MDSCs 純度可達 95%以上 (圖 1)。在此基礎上我們已開始進行 MMP28 對 MDSCs 體外增殖實驗的預實驗。用于檢測 iNOS,ROS,JAKSTAT3 的 qRTPCR 的引物已經(jīng)設計好并交由公司進行合成。 同時課題組成員均為受過系統(tǒng)科研訓練并且具有扎實的免疫學或分子生物學知識的博士，這為項目的開展提供了技術上的支持。本院所在實驗室是由湖北省“百人計劃”入選者美國加州大學 Davis 分校的鄧文斌博士牽頭建立的分子醫(yī)學中心，擁有分子生物學實驗和細胞實驗所需 基本設備，如 ABI 7500 熒光定量 PCR 儀， Beckman 流式細胞儀，熒光顯微鏡， 80冰箱，高速冷凍離心機，切片機等， 儀器設備先進，軟、硬件齊全，實力雄厚，完全具備本 課題所涉及的研究條件， 為科研項目的順利開展提供良好的保證。 八八 、 項項 目目 進進 度度 安安 排排 （ ） 1）完成體外實驗，即完成對 MMP28 是否影響 MDSCSs 的體外增殖（ MDSCs 細胞的分離和體外培養(yǎng)，細胞計數(shù)）， MMP28 是否影響 MDSCs 的體外分化（ MMP28 刺激后MDSCs 細胞的的成分是否發(fā)生了變化）， MMP28是否影響 MDSCs 對 T 細胞的抑制作用（混合淋巴細胞實驗）； MMP28 通過怎樣的分子機制來實現(xiàn)對 MDSCs 調控的研究（實時定量 PCR， ELISA， WB 等對 iNOS， ROS， AGR1 等分子的檢測）； 2）構建 MMP28 高表達和 MMP28 表達被干涉的重組腫瘤細胞（根據(jù)文獻，確定高表達和低表達 MMP28 的腫瘤細胞，分別構建編碼小鼠 MMP28 的載體和編碼針對MMP28的 shRNA 的載體，分別包裝病毒，轉染相應腫瘤細胞，篩選獲得穩(wěn)定轉染 的腫瘤細胞）。 2. 第二年度（ ） 1）完成荷瘤小鼠的構建工作； 2）分別分離荷瘤小鼠的骨髓，脾臟，淋巴結和腫瘤組織中的淋巴細胞，進行 Gr1+CD11b+ 陽性細胞的 FCM 分析，完成 MMP28 對小 鼠體內(nèi) MDSCs 影響的研究工作； 3）完成對荷瘤小鼠腫瘤體積，小鼠重量以及生存期的測定工作。 4）整理實驗結果，撰寫文章，投稿，并根據(jù)評審意見進行文章的修改，如有需要進行試驗補充。 九九 、 項項 目目 經(jīng)經(jīng) 費費 預預 算算 支出科目 金 額（萬元） 計算依據(jù)及理由 實驗試劑 抗體，淋巴細胞分離液， 免疫 磁珠，細胞培養(yǎng)液等 實驗動物 BALB/c 小鼠 文章發(fā)表 SCI 論文的審稿費和版面費 常規(guī)耗材 文獻打印等 合計