醫(yī)學(xué)院科研基金項(xiàng)目申請(qǐng)書-預(yù)覽頁
【正文】 列第一 ), Zhao Y, Fast L, Zhuang S, Liu P, Cheng G, Zhao TC. Inhibition of histone deacetylases preserves myocardial performance and prevents cardiac remodeling through stimulation of endogenous angiomyogenesis. J Pharmacol Exp Ther. 2020。 基質(zhì)金屬蛋白酶 28（ Matrix metalloproteinase 28， MMP28）是 MMPs 家族的成員之一， 研究表明 MMP28 在腫瘤微環(huán)境中表達(dá)升高 并 具有潛在的免疫抑制作用 ，我們推 測 MMP28 可能參與了對(duì) MDSCs的調(diào)控，相關(guān)研究尚未見報(bào)道。其中，中國新增病例和死亡病例均居世界第一位 [1]，形勢更為嚴(yán)峻。因此對(duì)腫瘤免疫逃逸機(jī)制的闡明是提高抗腫瘤免疫療法的 關(guān)鍵。多個(gè)研究小組的研究結(jié)果表明荷瘤宿主體內(nèi) MDSCs 的大量蓄積是造成腫瘤免疫無應(yīng)答的主要原因之 一 [78]。 但是目前關(guān)于 MDSCs 增殖、分化以及遷移的具體分子機(jī)制還未得以詳細(xì)闡明。 MMP28 在腫瘤微環(huán)境中表達(dá)升高又具有潛在的免疫抑制作用的這些特點(diǎn)引起了我們的興趣，我們推測 MMP28 可能不僅參與了巨噬細(xì)胞向 M2 的極化過程，而且很可能也參與了對(duì) MDSCs 的調(diào)控。腫瘤免疫逃逸的方式有多種 ,一方面腫瘤可通過自身突變和修飾等手段，隱藏或缺失宿主識(shí)別的靶點(diǎn)，逃避宿主免疫系統(tǒng)的監(jiān)視；另一方面，腫瘤可以釋放一系列具有免疫抑制性的因子引起免疫細(xì)胞的耐受或誘導(dǎo)免疫細(xì)胞向具有免疫抑制性細(xì)胞的方向分化，如腫瘤細(xì) 胞分泌的轉(zhuǎn)化生長因子β（ TGFβ）可誘導(dǎo)成熟的樹突狀細(xì)胞分化為具有免疫抑制功能的調(diào)節(jié)性 DCs(regulatory dendritic cells， DCreg)；而腫瘤細(xì)胞分泌的白介素 10（ IL10）可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞成為具有免疫抑制作用的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 (tumorassociated macrophage， TAM)。但在荷瘤小鼠和腫瘤患者體內(nèi) MDSCs 會(huì)大量擴(kuò)增。所以以 MDSCs 為靶點(diǎn)針對(duì)性地發(fā)展相應(yīng)的腫瘤治療策略具有十分誘人的前景。主要研究內(nèi)容如下： ① MMP28 是否影響 MDSCs 的體外增殖； ② MMP28 是否影響 MDSCs 的體外分化； ③ MMP28 是否影響 MDSCs 的功能，即對(duì) T 細(xì)胞的抑制作用； ④ MMP28 通過怎樣的分子機(jī)制來實(shí)現(xiàn)對(duì) MDSCs 調(diào)控的； ⑤ MMP28 是否能通過影響荷瘤小鼠體內(nèi)的 MDSCs 進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)的生長。 五五 、 研研 究究 方方 法法 、 技技 術(shù)術(shù) 路路 線線 及及 可可 行行 性性 分分 析析 1．技術(shù)路線 2. 研究方法 1)分離小鼠的 MDSCs ① 取 810 周齡 BALB/c 小鼠的脛骨和股骨，去除肌肉組織。 ⑤ PBS 洗滌 1 次后，用磁珠 分離獲得其中的 Gr1+CD11b+的細(xì)胞（ Miltenyi Biotec, Germany），此即為小鼠的 MDSCs。按（ MDSCs:T 細(xì)胞） 1:20, 1:40,1:80 和 1:160 的比例分別加入 MDSCs 進(jìn)行共培養(yǎng)。D Systems)。在高表達(dá) MMP28 的腫瘤細(xì)胞中用 siRNA 的方法進(jìn)行干涉構(gòu)建 MMP28 knockdown 的細(xì)胞；在低表達(dá) MMP28 的腫瘤細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá) MMP28基因的轉(zhuǎn)染，構(gòu)建 MMP28 overexpress 的細(xì)胞，經(jīng)過篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。 9） 測定荷瘤小鼠的腫瘤體積，重量以及生存期 每隔 5 天用游標(biāo)卡尺對(duì)荷瘤小鼠的腫瘤大小，小鼠的體重進(jìn)行測量和記錄，同時(shí)記錄不同組別荷瘤小鼠的死亡時(shí)間及小鼠的平均生存天數(shù) 。 MMP28 在腫瘤微環(huán)境中表達(dá)升高又具有潛在的免疫抑制作用的這 兩個(gè) 特點(diǎn) 是 我們推測 MMP28 可能不僅參與了巨噬細(xì)胞向 M2 的極化過程 ，而且很可能也參與了對(duì) MDSCs 的調(diào)控 這一設(shè)想的科學(xué)依據(jù)，也是我們這一課題具有可行性的理論基礎(chǔ) 。 七七 、 項(xiàng)項(xiàng) 目目 研研 究究 基基 礎(chǔ)礎(chǔ) 及及 條條 件件 （包括 申請(qǐng)人的前期工作基礎(chǔ)、研究 技術(shù)積累、 主要儀器 設(shè)備 等 條件） 圍繞本項(xiàng)目，課題組已熟練掌握了利用免疫磁珠從 BALB/c 小鼠骨髓中分離獲得CD11b+Gr1+的 MDSCs 細(xì)胞的技術(shù)，流式細(xì)胞術(shù)分析顯示分離獲得的 MDSCs 純度可達(dá) 95%以上 (圖 1)。本院所在實(shí)驗(yàn)室是由湖北省“百人計(jì)劃”入選者美國加州大學(xué) Davis 分校的鄧文斌博士牽頭建立的分子醫(yī)學(xué)中心，擁有分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)所需 基本設(shè)備，如 ABI 7500 熒光定量 PCR 儀， Beckman 流式細(xì)胞儀，熒光顯微鏡， 80冰箱，高速冷凍離心機(jī)，切片機(jī)等， 儀器設(shè)備先進(jìn)，軟、硬件齊全，實(shí)力雄厚，完全具備本 課題所涉及的研究條件， 為科研項(xiàng)目的順利開展提供良好的保證。 九九 、 項(xiàng)項(xiàng) 目目 經(jīng)經(jīng) 費(fèi)費(fèi) 預(yù)預(yù) 算算 支出科目 金 額（萬元） 計(jì)算依據(jù)及理由 實(shí)驗(yàn)試劑 抗體，淋巴細(xì)胞分離液， 免疫 磁珠，細(xì)胞培養(yǎng)液等 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 BALB/c 小鼠 文章發(fā)表 SCI 論文的審稿費(fèi)和版面費(fèi) 常規(guī)耗材 文獻(xiàn)打印等 合計(jì)
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