【正文】 熱導(dǎo)池檢測器、 10 微升注射器 3支、色譜柱：不銹鋼色譜柱（長 2 米，內(nèi)徑 4毫米） 15%聚乙二醇 — 1000： 6201 擔(dān)體（ 60— 80 目）、苯、甲苯、己烷、環(huán)己烷（都為分析純）、混合物樣品 三、實驗步驟 ： 柱溫 80186。C；載氣，氮氣或氫氣 15— 20 毫升 /分鐘（柱后），檢測器溫度 100℃，汽化室溫度 120— 150℃，橋電流 130 毫安。 對重量校正因子 在分析天平上，于 5 毫升中，按重量比大約 2:1 的比例，稱取己烷和苯配制二元混合物。待色譜儀基線穩(wěn)定后，進樣分析二元混合物，重復(fù) 3— 5 次。量取己烷和苯的峰面積，按公式求出己烷對苯的相對重量校正因子。以此為例，測定并求出環(huán)己烷對甲苯的相對重量校正因子。 （ 1）歸一化法 如果被測樣品中只含有己烷、環(huán)己烷和甲苯，并且三者相對重量校正因子均已求出，即可進被測樣品進行色譜分析，按歸一化法求出各組分的含量。（ 2）外標(biāo)法 如果被測試樣中含有微量苯，預(yù)測定其含量， 則可以甲苯為溶劑，配制已知濃度的苯標(biāo)準(zhǔn)溶液，用外標(biāo)法測定試樣中苯的含量，具體方法如下：準(zhǔn)確量取 10 毫升苯于 100 毫升容量瓶中，用甲苯稀至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備液（體積百分?jǐn)?shù)， v/V）。準(zhǔn)確分別量取 1， 2， 3，4， 5， 6 毫升儲備液于 5個 10 毫升容量瓶中，用甲苯稀釋定容，搖勻，作為系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。 將六個標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進樣，每次 1 微升，測量各自的峰高（或峰面積）。以峰高（或峰面積）對苯濃度繪制工作曲線。取 1微升被測樣品注入色譜分析，重復(fù) 3 次，取峰高（或峰面積）平均值，由工作曲線查出被測樣品中苯的濃度。 四、問題討論 ，峰面積為什么要用校正因子校正？ 2.試說明歸一化法定量的適用范圍。 10 苯 甲 酸 吸 收 曲 線 (10ug/mL) 吸 光 度250255260265270275280285290295300305310315320325330335340345350 波長 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確吸取苯 甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液若干體積，稀釋成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 0～ 16ug/mL），于最大吸收波長分別測出其吸光度。然后以濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。 樣品測定 由步驟 ，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品的濃度。 五、結(jié)果計算 根據(jù)未知液的稀釋倍數(shù)，可求出未知溶液的濃度。 12 三、儀器與試劑 930 型熒光光度計（附液槽一對，漏光片一盒）容量瓶 50 毫升 6個吸量管 5 毫升 l支 棕色試劑瓶（ 500mL）洗瓶（ 500mL）冰箱 （ 1） L1－維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)貯備液準(zhǔn)確稱取 維生素 B2,將其溶解于少量的 1%乙酸中，轉(zhuǎn)移至 1L 容量瓶中，用 1%乙酸稀釋至刻度，搖勻。（ 2） L－ 1 －維生素 B2工作標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確移取 L1 維生素 B2 標(biāo)準(zhǔn)貯備液于 1L 容量瓶中，用 1%乙酸稀釋至刻度，搖勻。 （ 3）待測液取市售維生素 B2 一片，用 1%乙酸溶液溶解，在 1L容量瓶中定容。以上溶液均應(yīng)裝于棕色試劑瓶中，置于冰箱冷藏保存溶液應(yīng) 保存在棕色瓶中，置于陰涼處。 四、實驗步驟 1．標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制 在五個干凈的 50mL容量瓶中，分別加入 ， ， ， 和 L－ 1 維生素 B2 工作標(biāo)準(zhǔn)溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。 2．標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的測定 開啟儀器電源，預(yù)熱約 10min。用蒸餾水作空白，從稀到濃測量標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強度。 3．未知試樣的測定 取 待測液置于 50mL 容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。用測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶液時相同的條件，測量其熒光強度。 五、數(shù)據(jù)及處理 1．用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2．根據(jù)待測液的熒光強度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其濃度。 3．計算藥片中維生素 B2 的含量，用 mg/片表示。 六、思考題 ，為什么激發(fā)光的入射與熒光的接收不在一直線上，而呈一定角度？ ，其選擇的根據(jù)是什么？ 參考資料 [1],《 InstrumentalMethodsofAnalysis 》，5thed.,Nostrand,NewYork,1974。 [2]廈門大學(xué)化學(xué)系分祈化學(xué)教研室編，陳國珍主編，《螢光分析法》，第 248頁，科學(xué)出版社， 1975。 鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液 I，含鈉 ／ L：吸取鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液 () 于 100mL 容量瓶中，加 2mL 硝酸溶液 ()，以水稀釋至際線，搖 勻。此溶液可保存 3 個月。 鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液Ⅱ，含鈉 ／ L：吸取鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液Ⅰ () 100mL 容量瓶中，加 2mL 硝酸溶液 ()，以水稀釋至標(biāo)線，搖勻。此溶液可保存一個月。 4 儀器 原子吸收分光光度計：儀器操作參數(shù)可參照廠家說明書進行選擇。 鉀和鈉空心陰極燈：靈敏吸收線為鉀 ，鈉 ；次靈敏吸收線為鉀 ，鈉 。 乙炔的供氣裝置：使用乙炔鋼瓶或發(fā)生器均可，但乙炔氣必須經(jīng)水 和濃硫酸洗滌后，方可使用。 空氣壓縮機：均應(yīng)附有過濾裝置，由此得到無油無水凈化空氣。 ：所用玻璃器皿均應(yīng)經(jīng)硝酸溶液 ()浸泡，用時以去離子水洗凈。 5 采樣和樣品 水樣在采集后，應(yīng)立即以 m 濾膜 (或中速定量濾紙 )過濾，其濾液用硝酸 ()調(diào)至 pH1～ 2，于聚乙烯瓶中保存。 6 分析步驟 試料的制備 如果對樣品中鉀鈉濃度大體已知時，可直接取樣，或者采用次靈敏線測定先求得其濃度范圍。然后再分取一定量 (一般為 2～ 10mL)的實驗室樣品于 50mL 容量瓶中，加 硝酸艷溶液 ()，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。此溶液應(yīng)在當(dāng)天完成測定。 鉀校準(zhǔn)溶液 取 6 只 50mL 容量瓶，分別加入鉀標(biāo)準(zhǔn)使用溶液 ()0， ， ， ， ，加硝酸艷溶液 ()，加硝酸溶液()，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。其各點的濃度分別為： 0， ， ， ， ／ L。本校準(zhǔn)溶液應(yīng)在當(dāng)天使用。 鈉校準(zhǔn)溶液 取 6只 50mL容量瓶，分別加入納標(biāo)準(zhǔn)使用溶液Ⅱ ()0， ， ， ， ，加 硝酸銫溶液 ()，加 1mL 硝酸溶液 ()，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。其各點的濃度分別為 0， ， ， ／ L。本校準(zhǔn)溶液應(yīng)在當(dāng)天使用。 儀器的準(zhǔn)備 將待測元素?zé)粞b在燈架上，經(jīng)預(yù)熱穩(wěn)定后，按選定的波長，燈電流，狹縫，觀測高度，空氣及乙炔流量等各項參數(shù)進行點火測量。 注意：在打開氣路時，必須先開空氣，再開乙炔；當(dāng)關(guān)閉氣路時，必須先關(guān)乙炔，后關(guān)空氣，以免回火爆炸。 當(dāng)點火后，在測量前，先以硝酸溶液 ()噴霧 5min，以清洗霧化系統(tǒng)。 16 對于鉀和鈉濃度較高的樣品，在使用本標(biāo)準(zhǔn)時會因稀釋倍數(shù)過大，降低測定的精密度、同時也給操作帶來麻煩。因一般的地表水中鉀和鈉的濃度都比較高，可使用次靈敏線鉀 、鈉 測定，濃度范圍可擴大到鉀為 200mg／ L以內(nèi)，鈉為 100mg／ L以內(nèi)。 附加說明： 本標(biāo)準(zhǔn)由國家環(huán)境保護局規(guī)劃 標(biāo)準(zhǔn)處提出。本標(biāo)準(zhǔn)由黃河水資源保擴監(jiān)測中心站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人馮榮周。 本標(biāo)準(zhǔn)委托中國環(huán)境監(jiān)測總站負(fù)責(zé)解釋。 18 濃鹽酸優(yōu)級純，稀鹽酸溶液 1mol L 純水去離子水或蒸餾水 1 四、實驗步驟 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液系列 （ 1）標(biāo)準(zhǔn)溶液系列準(zhǔn)確吸取 、 、 、 、 上述鈣標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于 5 只 25mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻備用。該標(biāo)準(zhǔn)溶液系列鈣的濃度分別為 、 、 、 、 g L1。 （ 2）鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液系列準(zhǔn)確吸取 、 、 、 、 上述鎂標(biāo)準(zhǔn)使用液，分別置于 5 只 25mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻備用。該標(biāo)準(zhǔn)溶液系列鎂地濃度分別為 、 、 、 、 μ g L1。 配制自來水樣溶液準(zhǔn)確吸取適量（視未知鈣、鎂的濃度而定）自來水置于 25mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。 根據(jù)實驗條件，將原子吸收分光光度計按儀器操作步驟（見本章 節(jié)）進行調(diào)節(jié)，待儀器電路和氣路系統(tǒng)達到 穩(wěn)定，記錄儀基線平直時，即可進樣。測定各標(biāo)準(zhǔn)溶液系列溶液的吸光度。 在相同的實驗條件下，分別測定自來水樣溶液中鈣、鎂的吸光度。 五、思考題 簡述原子吸收分光光度分析的基本原理。 原子吸收分光光度分析為何要用待測元素的空心陰極燈作光源？能否用氫燈或鎢燈代替，為什么？ 如何選擇最佳的實驗條件？ 原子化器有何作用？ 樣品預(yù)處理的目的是什么？ 20－ 1－ 1 四、操作步驟 1．測定條件的選擇 （ 1）色譜柱長 250mm，內(nèi)徑 ，裝填 C18 烷基鍵合相，顆粒度 10μ m 的固定相 （ 2）流動相甲醇 :水（ 83:17），流量 min1 －（ 3）紫外光度檢測器測定波長 254nm（ 4）進樣量 20μ L2．儀器操作 （ 1）將配置好的流動相于超聲波發(fā)生器上，脫氣 15min。 （ 2）將儀器按照儀器的操作步驟調(diào)節(jié)至進樣狀態(tài)，待儀器液路和電路系統(tǒng)達到平衡，基線平直時，吸取 60181。L 標(biāo)準(zhǔn)工作液，進樣 20181。L，記錄色譜圖，重復(fù)進樣兩次。 （ 3）吸取 60181。L 樣品，進樣 20181。L，記錄色譜圖，重復(fù)進樣兩次。 五、數(shù)據(jù)處理 1．記錄實驗測定條件 （ 1）色譜柱與固定相 （ 2）流動相及其流量 （ 3）檢測器 （ 4）進樣量 2．測量各色譜圖中苯、萘、聯(lián)苯等的保留時間 tR 及相應(yīng)色譜峰的半峰寬 Y1/2，計算各對應(yīng)理論塔板 n，并將數(shù)據(jù)列表。已知組分的出峰順序為苯、萘、聯(lián)苯。 3．求樣品中各組分的含量。 六、思考題 1．由計算得到的各組分理論塔板數(shù)說明了什么？ 2．高效 液相色譜采用 5~10μ m 粒度的固定相有何優(yōu)點？為什么？ 22