【導(dǎo)讀】畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點(diǎn)等，均已明確注明出處。經(jīng)革蘭氏碘液染色，，，其中，菌株BL5-95的透明圈與菌落半徑比值最大，。本試驗(yàn)分別從50°C和30℃培養(yǎng)篩選條件下選取7株和6株，對這些菌株進(jìn)行纖維素酶活及其他各項(xiàng)指標(biāo)的測定。通過纖維素酶活力鑒定，菌株BL5-106的酶活力最高，U/mL，表明該菌株最具研究價(jià)值，該探究也為下一階段的堆肥試驗(yàn)提供了前期準(zhǔn)備及研究用菌。對纖維素酶產(chǎn)生菌的研究過去多集中于真菌的研究和應(yīng)用，鑒于細(xì)菌繁殖和產(chǎn)酶速度快、發(fā)酵周期短，有利于工業(yè)生產(chǎn)，故近年來對細(xì)菌產(chǎn)纖維素酶日益引起重視。據(jù)估計(jì)，纖維素水解成葡萄糖所需的酶蛋白要比淀粉相應(yīng)水解所需的酶蛋白多100倍，這是影響纖維素酶實(shí)際應(yīng)用的重要原因之一[5]。因而，篩選纖維素酶比活力高的菌株無疑具有重要的意義。

　　

【正文】 過濾紙的崩解試驗(yàn)找到重點(diǎn)目標(biāo)，最后，CMC酶活和FPA酶活研究結(jié)果表明，這13株菌在分泌纖維素酶活力及降解濾紙能力方面，BL5106，不管是從其一開始的生長速度（生長曲線），對環(huán)境的適應(yīng)能力（濾紙崩解），還是對CMC的分解能力都顯得尤為凸出。 U/ mL。通過各細(xì)菌生長曲線可以看出，在條件適宜的情況下，前期（1d）細(xì)菌群落生長便已趨于穩(wěn)定，隨著時(shí)間的推移，有小幅變化，在培養(yǎng)的中期（4d），便有部分菌株進(jìn)入了衰落期，菌懸液的OD出現(xiàn)下滑趨勢，但總體趨勢并沒有變化。在30 176。C和50 176。C培養(yǎng)條件下，前期，高溫培養(yǎng)的細(xì)菌生長快于低溫培養(yǎng)，但3d之后，二者趨向平衡；后期，30 176。C條件下篩選的部分菌株（BL5106）性能優(yōu)于50 176。C條件下篩選得到的菌株。在震蕩條件下培養(yǎng)，菌體懸浮液面生長，并連接成團(tuán)，沒有均勻散開，所以雖然在培養(yǎng)后期（2d），以肉眼可見大量聚集成團(tuán)的菌落，但吸光度變同時(shí)間沒有相關(guān)性。而在30176。C靜置條件下培養(yǎng)，菌懸液散步較均勻，長期培養(yǎng)下（4d）除BL599和BL5106外，其余菌液管液面上均有稀薄的一層菌落。兩種培養(yǎng)方式均有氣體產(chǎn)生。另外，同一菌種分小批分別接種培養(yǎng)的方式最后得出的數(shù)值存在較大誤差，若同一菌接種到250 mL的三角瓶中，在不同時(shí)間段取液保存測定可能更為直觀，因?yàn)橹昃纳L環(huán)境變化不大，也沒有隔離。從試驗(yàn)中可以看出，單菌株濾紙條崩解實(shí)驗(yàn)證明單株細(xì)菌對濾紙條纖維素的分解能力比較弱， 通過查閱有關(guān)文獻(xiàn)，知道有通過多菌種混合培養(yǎng)，利用不同菌種分泌的多種酶之間的協(xié)同作用，得到對濾紙條纖維素具有較強(qiáng)分解能力的菌株組合。這說明纖維素的有效分解需要多菌種分泌多種酶的協(xié)同參與。人們對纖維素酶活力測定方法進(jìn)行了大量的研究，自20 世紀(jì)60 年代以來，提出了許多不同的測定方法。1984 年，國際理論和應(yīng)用化學(xué)協(xié)會的發(fā)酵委員會確認(rèn)濾紙酶活力測定法為標(biāo)準(zhǔn)方法。濾紙酶活力法測定總酶活力雖然是一種通用的、公認(rèn)的、經(jīng)典的方法，但由于其底物為濾紙是不溶性的，結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，不同廠家生產(chǎn)的濾紙也不同，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響，因此，對濾紙品種的要求也十分嚴(yán)格。在近來的總酶活力測定過程中發(fā)現(xiàn)，國產(chǎn)濾紙的質(zhì)量有所變化，其本底值過高，給測定帶來較大的誤差，而且作為底物的濾紙需要裁成一定重量的小條，比較麻煩。對于活力較低的樣品來說，其靈敏度較差。更為主要的是這種方法的反應(yīng)時(shí)間比較長，不利于快速測定，這在生產(chǎn)中是很不方便的[18]。因纖維素空間結(jié)構(gòu)和纖維素酶酶系組成對纖維素分解效果影響顯著。經(jīng)高溫蒸餾的酒糟中纖維素的晶狀結(jié)構(gòu)被部分破壞，有利于纖維素酶的作用。還有如梁如玉等對含纖維素底物進(jìn)行化學(xué)的或物理的預(yù)處理，可大大提高底物對酶的敏感性，減少底物的抗性，提高纖維素轉(zhuǎn)化率。在通常情況下，影響酶活力的因素較多，如酶的濃度、底物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)、pH 值、反應(yīng)溫度等。另外纖維素酶活力的測定方法也很多，至今沒有統(tǒng)一， 這就造成了相互之間無法比較活力的情況。還有纖維素酶酶系組成和纖維素的結(jié)構(gòu)對分解纖維素的效果有明顯的影響。酒糟中的纖維素部分被木質(zhì)素和半纖維素包裹，對纖維素酶有鈍化作用；而在白酒蒸餾過程中，酒糟中纖維素的晶狀結(jié)構(gòu)被部分破壞，有利于纖維素酶的作用。產(chǎn)纖維素酶酶活和濾紙酶活高的菌株分解酒糟的效率不一定好。又由于纖維素酶是一種誘導(dǎo)型復(fù)合酶系，單一菌株降解纖維素的能力有限，需要多菌種協(xié)同才有可能最大化地降解纖維素，所以本試驗(yàn)所獲菌株單獨(dú)降解纖維素能力可能有所不足。通過以上試驗(yàn)，對所篩選的細(xì)菌有做了進(jìn)一步的淘汰，在得到1株較為高效的纖維素分解菌的同時(shí)，也建立了初步的探究模式，這為下一步的工作創(chuàng)造了便利。參考文獻(xiàn)[1] 李新社, 陸步詩．大曲酒糟代替米糠生產(chǎn)小曲的效果研究［J］．釀酒科技, 2006(7):65 －66．[2] 張禮星, 王華．里氏木霉纖維素酶在大曲酒酒糟中的應(yīng)用[J]．釀酒科技, 2000, （3）：5253．[3] 江龍法．分解酒糟生物質(zhì)的纖維素酶生產(chǎn)菌的篩選研究［J］．自然科學(xué)版, 2006, 15(4):51 －54．[4] 熊世勤, 彭謙. 耐熱纖維素酶產(chǎn)生菌及產(chǎn)酶條件[ J ]. 云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 1998, 20 ( 2 ) : 91 94.[5 ] Bayer EA , Chanzy H , Lamed R , et al . Cellulose , cellulases and cellulosomes [J ] . Current Opinion in Structural Biology , 1998 , 8( 5) : 548 557.[6] 史央. 秸稈降解的微生物學(xué)機(jī)理研究及應(yīng)用發(fā)展[J ] .微生物學(xué)雜志, 2002, 22 (1) : 47 50.[7] 張影. 一株生孢噬纖維菌的分離純化、鑒定及降解纖維素濾紙過程的研究[D]. 長春：東北師范大學(xué), 2003.[8] 郭愛蓮, 楊琳, 劉梅, 等. 產(chǎn)黃纖維單胞菌纖維素酶的培養(yǎng)條件[J]. 西北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版, 1999(6) ：575577.[9] 謝菊蘭，肖兵南，周望平. 一株產(chǎn)黃纖維單胞菌的選育及產(chǎn)酶特性研究[J]. 微生物學(xué)雜志, 2008(1)：4144.[10] W. Schwarz. The cellulosome and cellulose degradation byanaerobic bacteria[J]. Applied Microbiology and Biotechnology，2001，56(56) .[11] 吳斌, 胡肄珍. 產(chǎn)纖維素酶放線菌的研究進(jìn)展[J]. 中國釀造, 2008(1)：58.[12] 李日強(qiáng)．纖維素類廢棄物的綜合利用．中國環(huán)境科學(xué), 2002, 22(1)：2427．[13] 秦廣利．纖維素酶對白酒酒糟資源化利用研究．釀酒科技,2009(4) :2225[14] 沈萍．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)［M］．4 版．高等教育出版社, 2007:85120．[15] 王淑軍, 楊從發(fā), 陳靜. 固態(tài)降解農(nóng)作物秸稈纖維素菌株分離篩選方法的研究. 淮海工學(xué)院學(xué)報(bào), 1999 , 1 (3) :42～45[16] 管斌, 丁友昉, 謝來蘇, 等. 還原糖測定方法的規(guī)范[J]. 無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào), 1999, 18(3): 74?79.[17] 胡丹, 劉霞, [J].現(xiàn)代食品科技, 2009, 23(3):1417[18] 李亮亮．纖維素酶活力測定方法的比較研究[ J] . 遼寧農(nóng)業(yè)科技, 2001, ( 4) : 1618．致 謝有的事，在做的時(shí)候沒有顯出有什么意義，但回過頭才發(fā)現(xiàn)意義所在。從確定指導(dǎo)老師的那一刻開始，我和平京很是興奮了一陣，因?yàn)槲磥淼闹笇?dǎo)老師，是剛來我們學(xué)院的易維潔博士，易老師的學(xué)識及為人是我們激勵(lì)我們的源頭。 選題之初，易老師就告訴了我們接下來將要面對的重重困難，沒有實(shí)驗(yàn)室、沒有設(shè)備、工作量大且試驗(yàn)有極大可能達(dá)不到理想的效果，但一切聽在我們耳中，則變成證明自己的有利條件而已，并沒有放在心上。接下來，抱著極大熱情與期待投入到了試驗(yàn)之中，我們整理實(shí)驗(yàn)室，將每一件物品擺設(shè)好，當(dāng)看到起初凌亂不堪的實(shí)驗(yàn)室為之煥然一新時(shí)，很是給我們加了把勁，即使我們還缺少設(shè)備，但至少我們擁有了南區(qū)最好的實(shí)驗(yàn)室。在我們的迎接下，設(shè)備一件件加入到了我們奮斗的大業(yè)中，隨我們一起沖殺在試驗(yàn)前線，感覺前途一片光明，隨著設(shè)備增添，試驗(yàn)也逐漸展開了。我們設(shè)計(jì)思路，制定方案，清洗儀器，準(zhǔn)備器材，同時(shí)實(shí)驗(yàn)室也迎來了第一批客人，茅臺酒廠派來的“監(jiān)工”，我們一起開始了菌種的分離。此時(shí)，誰也不會想到，最后我們會在這里留下那么多遺憾，此時(shí)的我們只會想到成功會屬于我們，也只可以屬于我們，因?yàn)槲覀冇凶詈玫膶?dǎo)師。而事實(shí)證明，沒有足夠的努力，就不會有最好的結(jié)果。最后，試驗(yàn)結(jié)果是出來了，但沒有讓我們滿意，一點(diǎn)也不滿意，雖然我們在其中投入了大量的時(shí)間，但試驗(yàn)的成敗從來不是與投入的時(shí)間成正比的。也許是一開始的期待太大，所以會對結(jié)果失望吧！在本論文完成之際，我要向所有幫助過我的老師、同學(xué)表示衷心的感謝！但我最想感謝的是我的導(dǎo)師，您的嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)心，負(fù)責(zé)溫和感染了我，這份影響很珍貴！謝謝您！易老師！