【正文】 面，江龍法等[12]從白酒糟采集的樣品中初篩得到產(chǎn)纖維素酶酶活較高的5株菌。對(duì)酒糟發(fā)酵減重最高達(dá)18%。在纖維素利用的研究中，研究的對(duì)象多偏重于厭氧高溫纖維素分解菌，好氧高溫纖維素分解菌涉及較少；研究?jī)?nèi)容多偏重于分類學(xué)方面以及菌株在厭氧發(fā)酵纖維素類物質(zhì)方面的應(yīng)用。C，年日照時(shí)數(shù)1400 h，無(wú)霜期311 d，年降雨量800—1000 mL。C條件下保存。C及50176。進(jìn)行一定的不同碳氮源、溫度、pH條件下的初略比較，為下階段研究做準(zhǔn)備；酒糟、酒曲、酒醅、廢舊稻草、土壤樣品的采集制備保存樣品30℃下細(xì)菌分離培養(yǎng)50℃下細(xì)菌分離培養(yǎng)相關(guān)準(zhǔn)備工作30℃、50℃下預(yù)備試驗(yàn)從樣品中分離、純化細(xì)菌通過(guò)透明圈大小、濾紙潰爛度初篩出具有分解纖維素的細(xì)菌菌株對(duì)篩選出的菌株進(jìn)行生長(zhǎng)曲線測(cè)定進(jìn)行濾紙、羧甲基纖維素鈉酶活測(cè)定鑒定命名保存篩選出的目標(biāo)菌落1．牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基[14]： g、 g、~ g、NaCl g、 mL，調(diào)pH 。3．LB培養(yǎng)基[14]： g、NaCl g、 g、 ml、調(diào)pH 。3H2O g、MgSO43H2O g、KH2PO4 g、NH4NO3 g、FeCl31．DNS 試劑甲液：溶解6. 9 g結(jié)晶酚于15. 2 mL、10 % NaOH 溶液中， 并用水稀釋至69 mL， 在此溶液中加6. 9 g NaHSO3. 乙液： 稱取255 g mL、1 0 % NaOH 溶液中， mL、1 % 3，、乙二液相混合即得黃色試劑， 貯存于綜色冰箱低溫保藏1周后使用。3．醋酸緩沖液(pH )： mL蒸餾水中，（約用l2 mL）， mL。6．濾紙紙1 %醋酸浸泡24 h，用碘液檢驗(yàn)確定無(wú)淀粉后。C及50176。將純化的菌株接種到纖維素鈉(CMCNa)為唯一碳源的固體培養(yǎng)基的上，每個(gè)培養(yǎng)基點(diǎn)2 個(gè)樣，不同處理均作3個(gè)重復(fù)。根據(jù)透明水解圈半徑和菌落半徑的比值大小初步判斷菌株產(chǎn)纖維素酶的能力，選取比值大的菌株繼續(xù)進(jìn)行研究。每4 h取樣一次通過(guò)分光光度法測(cè)定菌體濃度。 1．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取7支10 mL試管，編號(hào)，（500 mg/L）溶液與蒸餾水混勻，既得各種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液的制備管號(hào)制備標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液的濃度（μg/mL）加500ug/ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄液（mL）加蒸餾水量（mL）00010140280312041605200466240加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水， mL DNS試劑，于沸水浴中加熱5 min進(jìn)行顯色，取出后用流動(dòng)水迅速冷卻， mL，搖勻，用721G可見(jiàn)分光光度計(jì)，在520 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。2．粗酶液制備將初篩選取的菌株環(huán)取一環(huán)接種到纖維素羧甲基鈉活化培養(yǎng)液中，30176。CMC酶活力的測(cè)定：取CMC mL于比色皿中， mL 稀釋10 倍的酶液，50176。C、50176。若濾紙不到2 4 h 全部分解，則記下達(dá)到全部被分解的時(shí)間，拍照記錄。對(duì)每個(gè)樣品都設(shè)一個(gè)參照樣， mL蒸餾水， mL相應(yīng)樣品的粗酶液。C恒溫水浴加熱，充分反應(yīng)30 min。定義每分鐘催化纖維素水解生成1 μg葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位，即在50176。細(xì)菌的純化一般采用二區(qū)劃線法，通過(guò)這種方式，進(jìn)一步分離所篩選的菌種。透明圈與菌落半徑比值超過(guò)10的有12株，透明圈與菌落半徑比值超過(guò)5的有103株。共選取13株菌進(jìn)行纖維素酶活力等測(cè)定。C3dBH314 50176。C3dBH536 50176。C3dBL5581 30176。C3d，以牛肉膏蛋白胨作為保存培養(yǎng)基。C低溫保存。C靜置培養(yǎng)下的菌懸液，其沉淀量少、液面無(wú)菌苔或菌苔量微小、液體中顆粒物分布均勻、液體昏暗渾濁、細(xì)菌生長(zhǎng)規(guī)律；而50176。最后通過(guò)721G可見(jiàn)分光光度計(jì)的測(cè)定證實(shí)以上推斷。因?yàn)闇y(cè)定的菌株比較多，每一個(gè)菌株對(duì)應(yīng)一個(gè)生長(zhǎng)曲線，且50176。C振蕩，轉(zhuǎn)速為120 r/ min培養(yǎng)6 d， 將培養(yǎng)液于4176。 BL5106DNS顯色圖 μg。渾濁度高的菌懸液，其細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖速度快，繁殖能力較強(qiáng)。 接種細(xì)菌下的培養(yǎng)液與濾紙通過(guò)觀察發(fā)現(xiàn)，具有較強(qiáng)的纖維素酶活性的13株細(xì)菌，原先能在CMCNa培養(yǎng)基上產(chǎn)生大而清亮的透明圈，但在濾紙條崩解試驗(yàn)中卻沒(méi)有明顯的效果，只是顯得渾濁。C條件的6株，對(duì)其進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定，主要偏重于其纖維素酶活的測(cè)定。在30 176。C條件下篩選得到的菌株。兩種培養(yǎng)方式均有氣體產(chǎn)生。人們對(duì)纖維素酶活力測(cè)定方法進(jìn)行了大量的研究，自20 世紀(jì)60 年代以來(lái)，提出了許多不同的測(cè)定方法。對(duì)于活力較低的樣品來(lái)說(shuō)，其靈敏度較差。還有如梁如玉等對(duì)含纖維素底物進(jìn)行化學(xué)的或物理的預(yù)處理，可大大提高底物對(duì)酶的敏感性，減少底物的抗性，提高纖維素轉(zhuǎn)化率。酒糟中的纖維素部分被木質(zhì)素和半纖維素包裹，對(duì)纖維素酶有鈍化作用；而在白酒蒸餾過(guò)程中，酒糟中纖維素的晶狀結(jié)構(gòu)被部分破壞，有利于纖維素酶的作用。參考文獻(xiàn)[1] 李新社, 陸步詩(shī)．大曲酒糟代替米糠生產(chǎn)小曲的效果研究［J］．釀酒科技, 2006(7):65 －66．[2] 張禮星, 王華．里氏木霉纖維素酶在大曲酒酒糟中的應(yīng)用[J]．釀酒科技, 2000, （3）：5253．[3] 江龍法．分解酒糟生物質(zhì)的纖維素酶生產(chǎn)菌的篩選研究［J］．自然科學(xué)版, 2006, 15(4):51 －54．[4] 熊世勤, 彭謙. 耐熱纖維素酶產(chǎn)生菌及產(chǎn)酶條件[ J ]. 云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 1998, 20 ( 2 ) : 91 94.[5 ] Bayer EA , Chanzy H , Lamed R , et al . Cellulose , cellulases and cellulosomes [J ] . Current Opinion in Structural Biology , 1998 , 8( 5) : 548 557.[6] 史央. 秸稈降解的微生物學(xué)機(jī)理研究及應(yīng)用發(fā)展[J ] .微生物學(xué)雜志, 2002, 22 (1) : 47 50.[7] 張影. 一株生孢噬纖維菌的分離純化、鑒定及降解纖維素濾紙過(guò)程的研究[D]. 長(zhǎng)春：東北師范大學(xué), 2003.[8] 郭愛(ài)蓮, 楊琳, 劉梅, 等. 產(chǎn)黃纖維單胞菌纖維素酶的培養(yǎng)條件[J]. 西北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版, 1999(6) ：575577.[9] 謝菊蘭，肖兵南，周望平. 一株產(chǎn)黃纖維單胞菌的選育及產(chǎn)酶特性研究[J]. 微生物學(xué)雜志, 2008(1)：4144.[10] W. Schwarz. The cellulosome and cellulose degradation byanaerobic bacteria[J]. Applied Microbiology and Biotechnology，2001，56(56) .[11] 吳斌, 胡肄珍. 產(chǎn)纖維素酶放線菌的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)釀造, 2008(1)：58.[12] 李日強(qiáng)．纖維素類廢棄物的綜合利用．中國(guó)環(huán)境科學(xué), 2002, 22(1)：2427．[13] 秦廣利．纖維素酶對(duì)白酒酒糟資源化利用研究．釀酒科技,2009(4) :2225[14] 沈萍．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)［M］．4 版．高等教育出版社, 2007:85120．[15] 王淑軍, 楊從發(fā), 陳靜. 固態(tài)降解農(nóng)作物秸稈纖維素菌株分離篩選方法的研究. 淮海工學(xué)院學(xué)報(bào), 1999 , 1 (3) :42～45[16] 管斌, 丁友昉, 謝來(lái)蘇, 等. 還原糖測(cè)定方法的規(guī)范[J]. 無(wú)錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào), 1999, 18(3): 74?79.[17] 胡丹, 劉霞, [J].現(xiàn)代食品科技, 2009, 23(3):1417[18] 李亮亮．纖維素酶活力測(cè)定方法的比較研究[ J] .