【正文】 纖維素空間結(jié)構(gòu)和纖維素酶酶系組成對纖維素分解效果影響顯著。從試驗(yàn)中可以看出，單菌株濾紙條崩解實(shí)驗(yàn)證明單株細(xì)菌對濾紙條纖維素的分解能力比較弱， 通過查閱有關(guān)文獻(xiàn)，知道有通過多菌種混合培養(yǎng)，利用不同菌種分泌的多種酶之間的協(xié)同作用，得到對濾紙條纖維素具有較強(qiáng)分解能力的菌株組合。C培養(yǎng)條件下，前期，高溫培養(yǎng)的細(xì)菌生長快于低溫培養(yǎng)，但3d之后，二者趨向平衡；后期，30 176。在這103株菌中，最具研究價(jià)值的有近20株，本試驗(yàn)著重選取了其中13株，分別是50 176。 葡萄糖DNS顯色反應(yīng) 濾紙崩解試驗(yàn)情況菌株編號培養(yǎng)液沉淀情況顆粒物分布狀況菌落顏色培養(yǎng)液液面有無菌落層濾紙崩解狀況培養(yǎng)液渾濁度BH19無稀薄極低BH314絮狀均勻少量+低BH331無少量極低BH520微量下層較多大量極低BH526無均勻少量極低BH536無少量極低BH634少量稀薄極低BL345中量上層較多黃色無+低BL465少量上層較多灰色少量極低BL5581大量上層較多黃紅色無++中度BL595中量均勻紅白交替無++中度BL599中量均勻無++中度BL5106微量均勻無+++高度，除了2株細(xì)菌BL5106一具有一定降解濾紙條的能力外，其他單菌株在連續(xù)8d的恒溫振蕩培養(yǎng)過程中不能使濾紙條崩解，這也可能是培養(yǎng)時(shí)間不夠長，或是濾紙成分構(gòu)成的原因。 對具有纖維素分解功能的菌株分別進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，測定酶活力，其中菌株BL5106產(chǎn)纖維素酶活力最高， U/mL。 通過肉眼的觀察判斷，50176。C條件下，待到用時(shí)再取出，但要注意保存時(shí)間不宜過長，通常為7 d。C3dBL345 30176。 其中BL5581是在純化BL558時(shí)被發(fā)現(xiàn)的，后來發(fā)現(xiàn)透明圈半徑比: BL558更大，就一直以此命名。通過對近千個(gè)菌株的初篩，用羧甲基纖維素鈉鑒定培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，滴加革蘭氏碘液有透明圈的244株。迅速冷卻試管， mL。還原糖的測定：取刻度試管26只， mL，CMC緩沖液（檸檬酸緩沖液） mL。在520 nm 處測OD 值，測得OD 值后查閱葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出酶解所得葡萄糖含量，換算成酶活力值。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。用721G可見分光光度計(jì)，在660 nm波長處測定吸光度。C、50176。 7．革蘭氏碘液： g、 g、 mL，將碘與碘化鉀先行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解后， mL。量取0. 1 mol / L 檸檬溶液89. 5 mL，0. 1 mol/ L檸檬酸三鈉溶液110. 5 mL，混勻，即得pH 4. 80. 1 mo l/ L的檸檬酸緩沖液。7．纖維素分解細(xì)菌產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液：、MgSO43H2O g、MgSO4因?yàn)槲⑸镌囼?yàn)的主要對象是微生物，其中空格部分的理化性質(zhì)是無需檢測的指標(biāo)，理化性質(zhì)只是作為最后結(jié)果的一個(gè)比較參考。2材料與方法樣品來源地茅臺(tái)鎮(zhèn)位于仁懷市赤水河畔，是茅臺(tái)酒、文臺(tái)酒的故鄉(xiāng)。最適產(chǎn)酶條件為：發(fā)酵時(shí)間72~ 96 h，發(fā)酵溫度25~ 30176。研究最多的是纖維單胞菌（Cellulomonas）[89]和熱纖梭菌（Clostridium thermocellum）。酒糟生物質(zhì)主要由纖維素和木質(zhì)素構(gòu)成，同時(shí)含有一定的殘余糖分、淀粉、粗脂肪和蛋白質(zhì)[3]，因此，可利用具有降解纖維素的菌種對其進(jìn)行分解，把其中部分纖維素轉(zhuǎn)化為有機(jī)質(zhì)等，從而提高酒糟的綜合利用效率[4]。本試驗(yàn)分別從50176。畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點(diǎn)等，均已明確注明出處。通過不同溫度分離篩選條件下得到的菌株分別在其對應(yīng)溫度下的生長曲線可以看出，高溫振蕩培養(yǎng)的菌株會(huì)在試管表面長出菌苔，菌液澄清，試管底部有沉淀；中溫靜置培養(yǎng)條件下的菌株菌液整體渾濁，分布均勻。據(jù)估計(jì)，纖維素水解成葡萄糖所需的酶蛋白要比淀粉相應(yīng)水解所需的酶蛋白多100倍，這是影響纖維素酶實(shí)際應(yīng)用的重要原因之一[5]。第 21 頁 貴 貴州大學(xué)本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 厭氧細(xì)菌將3 種纖維素酶以特定方式聯(lián)合組裝成一個(gè)大復(fù)合體— 纖維小體(cenulosome)[10]，具有多種功能的超分子結(jié)構(gòu)。李日強(qiáng)等[12]通過對發(fā)酵處理后的玉米秸稈和白酒糟的分析，玉米秸稈經(jīng)發(fā)酵處理后粗蛋白、 %， % %；白酒糟經(jīng)發(fā)酵處理后粗蛋白、 %， % %，而且都具有較高的半纖維素酶和纖維素酶活性，可對秸稈和白酒糟進(jìn)行持續(xù)降解，進(jìn)一步提高了消化率。茅臺(tái)鎮(zhèn)地處河谷，風(fēng)速小，冬暖、夏熱、少雨、少風(fēng)的特殊小氣候十分有利于釀造茅臺(tái)酒微生物的棲息和繁殖。C培養(yǎng)條件下，從茅臺(tái)酒丟糟、301車間丟糟、酒曲、酒醅、茅臺(tái)有機(jī)高粱基地土壤、廢舊稻草樣品中分離細(xì)菌；2．對分離得到的菌株分別于30176。4．斜面保存培養(yǎng)基： g、 g、NaCl g、 mL，調(diào)pH 。6H2O g、 mL、調(diào)pH 。4．CMCNa溶液： g CMCNa（羧甲基纖維素鈉） mL醋酸緩沖液（pH ），加熱使之溶解，保存于冰箱中，以待使用。C恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)2 d，不同處理均作3個(gè)重復(fù)。最后保存菌落半徑與透明圈比值大于2：4的菌株于牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)基上，其活性與透明圈半徑/菌落半徑（R/r）在冰箱中4176。另取試管7支，編號， mL，對好加入各試管， mL，搖勻，置于沸水中煮沸5 min。C通過靜置培養(yǎng)、50176。C恒溫?fù)u床，120 r /min下振蕩培養(yǎng)，每天檢查記錄各菌株對濾紙的作用情況[17]。在容積為10 mL的試管管中，加入1 mL 適當(dāng)稀釋的酶液于50176。C下，每1 g纖維素酶曲在1 min內(nèi)水解CMC，生成1 ug葡萄糖的酶活性稱作纖維素酶活力單位，記作U。50176。C3dBH331 50176。C3dBL595 30176。 短期平板保存培養(yǎng)基測定生長曲線所用到的波段沒有固定的要求，經(jīng)過具體的測定發(fā)現(xiàn)，在波長較小的情況下（440nm）所測定的值會(huì)大于較高的值（660nm），這要求根據(jù)菌懸液的濁度調(diào)整相對較佳的值，當(dāng)菌懸液濁度教小時(shí)用低波段測定，反之用高波段測定。，50176。C、3500 r / min 離心15 min， 取上清液作為粗酶液，測其對濾紙分解度，CMC 酶活力( CMCase )。濾紙這種非天然纖維素底物化學(xué)組成均一、試驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好，是普遍選用的篩菌底物，但用其進(jìn)行的纖維素酶活性檢測不能真實(shí)地反映菌株對酒糟這類復(fù)雜組分的纖維素的降解能力。通過濾紙的崩解試驗(yàn)找到重點(diǎn)目標(biāo)，最后，CMC酶活和FPA酶活研究結(jié)果表明，這13株菌在分泌纖維素酶活力及降解濾紙能力方面，BL5106，不管是從其一開始的生長速度（生長曲線），對環(huán)境的適應(yīng)能力（濾紙崩解），還是對CMC的分解能力都顯得尤為凸出。在震蕩條件下培養(yǎng)，菌體懸浮液面生長，并連接成團(tuán)，沒有均勻散開，所以雖然在培養(yǎng)后期（2d），以肉眼可見大量聚集成團(tuán)的菌落，但吸光度變同時(shí)間沒有相關(guān)性。1984 年，國際理論和應(yīng)用化學(xué)協(xié)會(huì)的發(fā)酵委員會(huì)確認(rèn)濾紙酶活力測定法為標(biāo)準(zhǔn)方法。在通常情況下，影響酶活力的因素較多，如酶的濃度、底物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)、pH 值、反應(yīng)溫度等。從確定指導(dǎo)老師的那一刻開始，我和平京很是興奮了一陣，因?yàn)槲磥淼闹笇?dǎo)老師，是剛來我們學(xué)院的易維潔博士，易老師的學(xué)識及為人是我們激勵(lì)我們的源頭。也許是一開始的期待太大，所以會(huì)對結(jié)果失望吧！在本論文完成之際，我要向所有幫助過我的老師、同學(xué)表示衷心的感謝！但我最想感謝的是我的導(dǎo)師，您的嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)心，負(fù)責(zé)溫和感染了我，這份影響很珍貴！謝謝您！易老師！