降解酒糟生物質(zhì)的纖維素分解細菌的篩選及產(chǎn)酶研究_大學本科畢業(yè)論文-wenkub.com
2024-08-25 22:12 本頁面
【正文】 而事實證明，沒有足夠的努力，就不會有最好的結(jié)果。接下來，抱著極大熱情與期待投入到了試驗之中，我們整理實驗室，將每一件物品擺設(shè)好，當看到起初凌亂不堪的實驗室為之煥然一新時，很是給我們加了把勁，即使我們還缺少設(shè)備，但至少我們擁有了南區(qū)最好的實驗室。通過以上試驗，對所篩選的細菌有做了進一步的淘汰，在得到1株較為高效的纖維素分解菌的同時，也建立了初步的探究模式，這為下一步的工作創(chuàng)造了便利。還有纖維素酶酶系組成和纖維素的結(jié)構(gòu)對分解纖維素的效果有明顯的影響。經(jīng)高溫蒸餾的酒糟中纖維素的晶狀結(jié)構(gòu)被部分破壞，有利于纖維素酶的作用。在近來的總酶活力測定過程中發(fā)現(xiàn)，國產(chǎn)濾紙的質(zhì)量有所變化，其本底值過高，給測定帶來較大的誤差，而且作為底物的濾紙需要裁成一定重量的小條，比較麻煩。這說明纖維素的有效分解需要多菌種分泌多種酶的協(xié)同參與。C靜置條件下培養(yǎng)，菌懸液散步較均勻，長期培養(yǎng)下（4d）除BL599和BL5106外，其余菌液管液面上均有稀薄的一層菌落。C條件下篩選的部分菌株（BL5106）性能優(yōu)于50 176。通過各細菌生長曲線可以看出，在條件適宜的情況下，前期（1d）細菌群落生長便已趨于穩(wěn)定，隨著時間的推移，有小幅變化，在培養(yǎng)的中期（4d），便有部分菌株進入了衰落期，菌懸液的OD出現(xiàn)下滑趨勢，但總體趨勢并沒有變化。C條件篩選的7株和30 176。，添加濾紙作為唯一碳源，接種一環(huán)連續(xù)培養(yǎng)5d后，培養(yǎng)液及濾紙的出現(xiàn)的一些直觀情況，以此可作為挑選菌株的參考依據(jù)。結(jié)合生長曲線測定的OD可以推斷，液體渾濁度高的相對的OD就大，對濾紙的分解能力相應也會較強。，圖中顏色最深的是編號為BL5106的菌株。將分離到的13 mL 液體培養(yǎng)基的三角瓶中， 30 176。 LB菌懸液OD測定菌株編號0（h）OD660nm4（h）OD660nm8（h）OD660nm12（h）OD660nm16（h）OD660nm20（h）OD660nm24（h）OD660nm28（h）OD660nm32（h）OD660nm36（h）OD660nm40（h）OD660nmBH19 BH314 BH331 BH520 BH526 BH536 BH634 BL345 BL465 BL5581 BL595 BL599 BL5106 注：生長曲線的繪制時以細菌懸液的吸光度（）為縱坐標，培養(yǎng)時間為橫坐標繪出。C、120 r /min振蕩培養(yǎng)下的菌種，其吸光度因顆粒分布不均，必然無法準確測定。30176。做長期保存則是將菌種接種到斜邊保存基上，4176。C3dBL5106 30176。C3dBL465 30176。C3dBH526 50176。 初篩中13株細菌透明圈與菌落半徑比值樣品編號菌落半徑（cm）透明圈半徑（cm）透明圈與菌落半徑比值培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間BH19 50176。C培養(yǎng)條件下的， cm，透明圈與菌落半徑比值大于5的6株菌。其中， cm，BL595透明圈與菌落半徑比值最大的，達到15。3結(jié)果與分析、純化結(jié)果利用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，分101010105四個不同稀釋梯度，2至3組平行，從茅臺酒丟糟、301車間丟糟、酒曲、酒醅、茅臺有機高粱基地土壤、廢舊稻草樣品中初步分離到近千個菌株，在觀察菌落生長狀況、菌落形態(tài)特征的同時。在560 nm 波長處測吸光度并做好記錄。C 恒溫水浴中預熱5 min后，搖勻，將試管置于水浴鍋中，50176。每次測酶活時均設(shè)一個總的空白樣，即在試管中不加底物和酶液， mL，用作測量吸光度時的參比。具體表示：+濾紙邊緣膨脹；+ + 濾紙整齊膨脹并下彎； + + + 濾紙不定形；+ + + + 全成糊狀。3．濾紙崩解的測定分別用接種環(huán)取一環(huán)初篩得到的菌種，將其接種到裝有10 mL濾紙培養(yǎng)液的10mL試管中，置于30176。每24 h 取一次菌液，3500 r/min 下離心5 min，收集上清液用于測定酶活。根據(jù)DNS (3，5二硝基水楊酸)比色法測定原理繪制葡萄糖標準曲線[16]。選用520 nm波長。然后以時間為橫坐標，以O(shè)D值為縱坐標，繪制菌體生長曲線。從斜面保存培養(yǎng)基挑取菌株單菌落， mL LB 液體培養(yǎng)基的試管中，振蕩培養(yǎng)12 h，然后取100 μL 菌懸液置入另外盛有10 mL LB 液體培養(yǎng)液的試管中振蕩培養(yǎng)。C下倒置培養(yǎng)2 d，每天檢測觀察各菌株的菌落狀況，最后通過滴加革蘭氏碘液，靜置10 min，傾去染液，將平板置于白色背景下，觀察透明圈產(chǎn)生的清晰度，測量菌落及淺色透明圈半徑（R，mm），并拍照記錄。觀察牛肉膏蛋白胨各培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)特征，拍照并作好詳細記錄。儀器名稱型號生產(chǎn)廠商冰箱BCD215KALM青島海爾股份有限公司電熱恒溫培養(yǎng)箱DH6000BH天津市泰斯特儀器有限公司電子天平ALB224賽多利斯科學儀器有限公司單人單面凈化工作臺SW—CJ—1FD蘇州凈化設(shè)備有限公司恒溫振蕩器ZD—85A常州澳華儀器有限公司型電熱鼓風干燥箱101—2AB天津市泰斯特儀器有限公司型電熱恒溫鼓風干燥箱DHG—9240上海一恒科技有限公司紫外可見分光光度計721GG上海儀電分析儀器有限公司高速臺式離心機TGL—16B上海安亭科學儀器廠、純化將從貴州茅臺酒廠取樣到的樣品搗碎后， mL無菌水中制備成1%的菌懸液，震蕩培養(yǎng)30 min用無菌蒸餾水稀釋101010105四個梯度，然后再用無菌吸管吸取100 μL菌懸液滴入牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上涂布均勻，分別在30 176。C烘箱中烘2 h至恒重， g烘好的葡糖糖， mL。量取0. 1 mo l/ L檸檬酸溶液57 mL，0. 1 mol / L mL， mL蒸餾水 混勻，配成pH4. 0. 05 mol / L 的檸檬酸緩沖液。C下，滅菌30 min后使用。7H2O g、CaCl2 g、K2HPO46．纖維素分解細菌活化培養(yǎng)液： g、 g、 g、K2HPO47H2O g、NaNO3 g、KCl g、 g、調(diào)pH 。C下，采用羧甲基纖維素鈉鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)基進行初篩；3．對初篩得到的菌株進行生長曲線的測繪，以及濾紙酶活力（FPA）、羧甲基纖維素鈉酶活力（CMC）的測定，篩選出纖維素酶酶活性最高的菌株保存。 樣品基本理化性質(zhì)樣品名稱含水率有機C有機質(zhì)pH全K速效K全P全N堿解N%g/kgg/kgmg/kgmg/kg%g/kgmg/km茅臺酒糟301車間酒糟茅臺大曲茅臺酒醅1茅臺有機高粱基地土壤廢舊稻草小麥粉
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