【導(dǎo)讀】當(dāng)溶劑加到中草藥原料中時，溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸通過細(xì)胞壁透。入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。中草藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。溶劑可分為水、親本性有機溶劑及親脂。性有機溶劑，被溶解物質(zhì)也有親水性及親脂性的不同。有機化合物分子結(jié)構(gòu)中親水性基團(tuán)多，其極性大而疏于油；有的親水性基團(tuán)少，其。這種親水性、親脂性及其程度的大小，是和化合物的分子結(jié)構(gòu)直接相關(guān)。蛋白質(zhì)和氨基酸都。較強的親水性，而皂甙元則屬于親脂性強的化合物。多數(shù)游離的生物堿是親脂性化合物，與酸結(jié)。合成鹽后，能夠離子化，加強了極性，就變?yōu)橛H水的注質(zhì)，這些生物堿可稱為半極性化合物。溶于親脂性溶劑，一般以在氯仿中溶解度最大。在大量生產(chǎn)中常將收集的稀滲淮液作為另一批新原料的溶劑之

　　

【正文】 分離水溶性成分，如氨基酸、糖類及某些甙?；钚蕴康挠袨槲阶饔?，在水溶液中最強，在有機溶劑中則較低弱。故水的洗脫能力最弱，而有機溶劑則較強。例如以醇 水進(jìn)行洗脫時，則隨乙醇濃度的遞增而洗脫力增加?；钚蕴繉Ψ枷阕寤衔锏奈搅Υ笥谥咀寤衔?，對大分子化合物的吸附力大于小分子化合物。利用這些吸附性的差別，可將水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)分開，單糖與多糖分開，氨基酸與多肽分開。 2．溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對組分分離關(guān)系極大。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮在用極性吸附劑進(jìn) 行層析時，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。 中國最大的管理資源中心 第 13 頁 共 15 頁 在柱層操作時，被分離樣品在加樣時可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以被吸附。然后漸增大溶劑的極性。這種極性的增大是一個十分緩慢的過程，稱為“梯度洗脫”，使吸附在層析柱上的各個成分逐個被洗脫。如果極性增大過訣（梯度太大），就不能獲 得滿意的分離。溶劑的洗脫能力，有時可以用溶劑的介電常數(shù)（ε）來表示。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。以上的洗脫順序僅適用于極性吸附劑，如硅膠、氧化鋁。對非極性吸附劑，如活性炭，則正好與上述順序相反，在水或親水住溶劑中所形成的吸附作用，較在脂溶性溶劑中為強。 3．被分離物質(zhì)的性質(zhì)：被分離的物質(zhì)與吸附劑，洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析中的三個要素，彼此緊密相連。在指定的吸附劑與洗脫劑的條件下，各個成分的分離情況，直接與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有關(guān)。對極性吸附劑而言，成分的極性大，吸附住強。 當(dāng)然，中草藥成分的整體分 子觀是重要的，例如極性基團(tuán)的數(shù)目愈多，被吸附的住能就會更大些，在同系物中碳原子數(shù)目少些，被吸附也會強些?？傊?，只要兩個成分在結(jié)構(gòu)上存在差別，就有可能分離，關(guān)鍵在于條件的選擇。要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強度，與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來考慮。首先要考慮被分離物質(zhì)的極性。如被分離物質(zhì)極性很小為不含氧的萜烯，或雖含氧但非極性基團(tuán)，則需選用吸附性較強的吸附劑，并用弱極性溶劑如石油醚或苯進(jìn)行洗脫。但多數(shù)中藥成分的極性較大，則需要選擇吸附性能較弱的吸附劑（一般Ⅲ～Ⅳ級）。采用的洗脫劑極性應(yīng)由小到大按某一梯度 遞增，或可應(yīng)用薄層層析以判斷被分離物在某種溶劑系統(tǒng)中的分離情況。此外，能否獲得滿意的分離，還與選擇的溶劑梯度有很大關(guān)系?，F(xiàn)以實例說明吸附層析中吸附劑、洗脫劑與樣品極性之間的關(guān)系。如有多組分的混合物，象植物油脂系由烷烴、烯烴、舀醇酯類、甘油三酸醋和脂肪酸等組份。當(dāng)以硅膠為吸附劑時，使油脂被吸附后選用一系列混合溶劑進(jìn)行洗脫，油脂中各單一成分即可按其極性大小的不同依次被洗脫。 又如對于 C27 甾體皂甙元類成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分離：將混合皂甙元溶于含有 5％氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采 用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫。如改用吸附性較弱的硅酸鎂以替代氧化鋁，由于硅酸鎂的吸附性較弱，洗脫劑的極牲需相應(yīng)降低，亦即采用苯或含 5％氯仿的苯，即可將一元羥基皂甙元從吸附劑上洗脫下來。這一例子說明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時，需用不同的溶劑才能達(dá)到相同的分離效果，從而說明吸附劑、溶劑和欲分離成分三者的相互關(guān)系。 （二）簿層層析：薄層層析是一種簡便、快速、微量的層析方法。一般將柱層析用的吸附劑撒布到平面如玻璃片上，形成一薄層進(jìn)行層析時一即稱薄層層析。其原理與柱層析基本相似。 1．薄層層析的 特點：薄層層析在應(yīng)用與操作方面的特點與柱層析的比較。 中國最大的管理資源中心 第 14 頁 共 15 頁 2．吸附劑的選擇：薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細(xì)，一般應(yīng)小于 250 目，并要求粒度均勻。用于薄層層析的吸附劑或預(yù)制薄層一般活度不宜過高，以Ⅱ～Ⅲ級為宜。而展開距離則隨薄層的粒度粗細(xì)而定，薄層粒度越細(xì)，展開距離相應(yīng)縮短，一般不超過 10 厘米，否則可引起色譜擴(kuò)散影響分離效果。 3．展開劑的選擇：薄層層析，當(dāng)吸附劑活度為一定值時（如Ⅱ或Ⅲ級），對多組分的樣品能否獲得滿意的分離，決定于展開劑 的選擇。中草藥化學(xué)成分在脂溶性成分中，大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。但在實際工作中，經(jīng)常需要利用溶劑的極性大小，對展開劑的極性予以調(diào)整。 4特殊薄層：針對某些性質(zhì)特殊的化合物的分離與檢出，有時需采用一些特殊薄層。 ① 熒光薄層：有些化合物本身無色，在紫外燈下也不顯熒光，又無適當(dāng)?shù)娘@色劑時，則可在吸附劑中加入熒光物質(zhì)制成熒光薄層進(jìn)行層析。展層后置于紫外光下照射，薄層板本身顯熒光，而樣品斑點處不顯熒光，即可檢出樣品的層析位置。常用的熒光物質(zhì)多為無機物。其一是在 254nm紫 外光激發(fā)下顯出熒光的，如錳激潔的硅酸鋅。另一種為在 365nm 紫外光激發(fā)下發(fā)出熒光的，如銀激化的硫化鋅硫化鎬 ② 絡(luò)合薄層：常用的有硝酸銀薄層，用來分離碳原子數(shù)相等而其中 C 一 C 雙鍵數(shù)目不等的一系列化合物，如不飽和醇、酸等。其主要機理是由于 C 一 C鍵能與硝酸銀形成絡(luò)合物，而飽和的 C 一 C 鍵則不與硝酸銀絡(luò)合。因此在硝酸銀薄層上，化臺物可由于飽和程度不同而獲得分離。層析時飽和化合物由于吸附最弱而 Rf 最高，含一個雙鍵的較含兩個雙鍵的 Rf 值高，含一個三鍵的較含一個雙鍵的 Rf 值高。此外，在一個雙鍵化臺物中，順式的與硝酸 銀絡(luò)合較反式的易于進(jìn)行。因此，還可用來分離順反異構(gòu)體。 ③ 酸堿薄層和 PH 緩沖薄層：為了改變吸附劑原來的酸堿性，可在鋪制薄層時采用稀酸或稀堿以代替水調(diào)制薄層。例如硅膠帶微酸性，有時對堿性物質(zhì)如生物堿的分離不好，如不能展層或拖尾，則可在鋪薄層時，用稀堿溶液 ～ 0． 5NNa0H 溶液制成堿性硅膠薄層。例如豬屎豆堿在以硅膠為吸附劑時，以氯仿 丙酮一甲醇（ 8： 2： 1）為展開劑 Rf＜ 0． 1，采用堿性硅膠薄層用上述相同展開劑， Rf 值增至 0． 4 左右。說明豬屎豆堿為 堿性生物堿。 ：薄層層析法在中草 藥化學(xué)成分的研究中，主要應(yīng)用于化學(xué)成分的預(yù)試、化學(xué)成分的鑒定及探索柱層分離的條件。 用薄層層析法進(jìn)行中草藥化學(xué)成分預(yù)試，可依據(jù)各類成分性質(zhì)及熟知的條件，有針對性地進(jìn)行。由于在薄層上展層后，可將一些雜質(zhì)分離，選擇性高，可使預(yù)試結(jié)果更為可靠。 以薄層層析法進(jìn)中草藥化學(xué)成分鑒定，最好要有標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行共薄層層析。如用數(shù)種溶劑展 中國最大的管理資源中心 第 15 頁 共 15 頁 層后，標(biāo)準(zhǔn)品和鑒定品的 Rf 值、斑點形狀顏色都完全相同，則可作初步結(jié)論是同一化合物。但一般需進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)或紅外光譜等一種儀器分析方法加以核對。 用薄層層析法探索柱層分離條件，是 實驗室的常規(guī)方法。在進(jìn)行柱層分離時，首先考慮選用何種吸附劑與洗脫劑。在洗脫過程中各個成分將按何種順序被洗脫，每一洗脫液中是否為單一成分或混合體，均可由薄層的分離得到判斷與檢驗。通過薄層的預(yù)分離，還可以了解多組分樣品的組成與相對含量。如在薄層上摸索到比較滿意的分離條件，即可將此條件用于干柱層析。但亦可以將薄層分離條件經(jīng)適當(dāng)改變，轉(zhuǎn)至一般往層所采用洗脫的方式進(jìn)行制備柱分離。利用薄層的預(yù)分離尋找柱層的洗脫條件時 ,假定在薄層上所測得的 Rf 值一樣品在柱層中的比移率（ R）。這是由于在薄層展開時，薄層固定相中所含的溶劑經(jīng) 過不斷的蒸發(fā)，而使薄層上各點位置所含的溶劑量是不等的，靠近起始線的含量高于薄層的前沿部分。但若嚴(yán)格控制層析操作條件，則可得到接近真實的 Rf值。用薄層進(jìn)行某一組分的分離，其 Rf 值范圍，一般情形下為 0． 85＞ Rf＞ 0． 05。此外，薄層層析法亦應(yīng)用于中草藥品種、藥材及其制劑真?zhèn)蔚臋z查、質(zhì)量控制和資源調(diào)查，對控制化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)程，反應(yīng)副產(chǎn)品產(chǎn)物的檢查，中間體分析，化學(xué)藥品及制劑雜質(zhì)的檢查，臨床和生化檢驗以及毒物分析等，都是有效的手段。