大腸桿菌實(shí)驗(yàn)診斷研究進(jìn)展ppt44-經(jīng)營(yíng)管理-資料下載頁(yè)
2025-08-06 12:18本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】現(xiàn)在腹瀉后數(shù)天或1-2周。病死率一般在10%，各別可。人，尤其老年人。病人主要表現(xiàn)為發(fā)熱、血小板減少、死率高，有時(shí)可出現(xiàn)70%的病人死亡。大腸桿菌O157:H7基本上是一種食源性病原菌，感染,也可通過(guò)人與人、人與動(dòng)物密切接觸傳播。在實(shí)驗(yàn)室，大腸桿菌O157:H7可以感染小鼠、雞、大腸桿菌O157:H7的感染已成為世界性的問(wèn)題。培養(yǎng)的對(duì)象首先是急性血性腹瀉患者，其次是HUS、TTP等住院。免疫磁珠分離法是將特異性抗體吸附于一種能。Chapman等共檢測(cè)大便標(biāo)本690份,免疫磁珠分離法檢出25。法分離的l2株大腸桿菌O157:H7中,直接培養(yǎng)陽(yáng)性?xún)H5株。Wright等將接種大腸桿菌O157:H7的碎牛肉標(biāo)本置加有萬(wàn)古霉素和頭孢。用前者檢測(cè)接種12株不同大腸桿菌O157:H7菌株的牛糞。培養(yǎng)和IMS均陽(yáng)性20份,另13份僅IMS陽(yáng)性。IMS和其它檢測(cè)的研究表明,對(duì)快速檢。源下觀察結(jié)果,產(chǎn)生藍(lán)色熒光者為陽(yáng)性。為排除交叉反應(yīng)引起的凝集造成假陽(yáng)性,至今，在免疫測(cè)定中，金標(biāo)記常與膜
【正文】 22 166bp。 嚴(yán)笠選用針對(duì)大腸桿菌 O157: H7志賀樣毒素 Ⅰ 、 Ⅱ （ SLT－ Ⅰ 、SLT－ Ⅱ ） 和溶血素 （ Hly） 基因的三對(duì)引物 ,在同一擴(kuò)增體系中進(jìn)行 PCR,檢測(cè) 12株不同來(lái)源的 O157: H7大腸桿菌及其它致病性大腸桿菌及沙門(mén)菌 、 志賀菌 15株 。 結(jié)果復(fù)合PCR方法較單一 PCR方法具有較高的特異性 ， 12株 O157: H7取得了穩(wěn)定 、 可靠的陽(yáng)性結(jié)果 。 能迅速 、 有效地與其它致病性大腸桿菌及沙門(mén)氏菌 、 志賀菌相鑒別 。 PCR技術(shù)在 大腸桿菌 O157: H7檢測(cè)中的應(yīng)用 （ 3）原位 PCR: kurokawa等不用培養(yǎng)過(guò)程 ,直接用原位 PCR技術(shù)結(jié)合落射顯微鏡 ,在單細(xì)胞水平快速檢測(cè) O157: H7 。 大腸桿菌 O157: H7分型、檢測(cè)中的應(yīng)用 ? 傳統(tǒng)的細(xì)菌分類(lèi)方法主要依賴(lài)于細(xì)菌的形態(tài)學(xué)、代謝產(chǎn)物、酶活性和表面抗原等特征。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展，微生物檢測(cè)進(jìn)入了基因時(shí)代，以核糖體核糖核酸序列為基礎(chǔ)的分類(lèi)方法為微生物的鑒別提供了新的分子生物學(xué)方法。如 16srRNA、 23srRNA、 1623srRNA區(qū)間序列分析等等，它完全不同于傳統(tǒng)方法，具有快速、簡(jiǎn)便、敏感和特異等優(yōu)點(diǎn)。 ? 23SrRNA基因特征： ? 原核生物的核糖體有三種大?。ǚ謩e為 23S、 16S、 5S） 的 rRNA。目前已知 23SrRNA基因全長(zhǎng)序列的菌種數(shù)目已達(dá) 250種。長(zhǎng)度大約為 3000pb。 對(duì)許多細(xì)菌的 23SrRNA基因序列分析發(fā)現(xiàn)，其序列的可變性比 16SrRNA基因要明顯，特別是親源關(guān)系近的種系。利用這些可變區(qū)序列的差異可對(duì)相同菌種不同菌株進(jìn)行分類(lèi)鑒定。同時(shí)對(duì)已知 23SrRNA基因序列分析也發(fā)現(xiàn)，在最初的 520pb中有 6個(gè)保守區(qū)域（ 510區(qū)域），并發(fā)現(xiàn)，這 6個(gè)保守區(qū)域中 6區(qū)段和 10區(qū)段最保守，該序列在 14個(gè)菌種中完全一致。 ? 應(yīng)用： ? 檢測(cè)臨床感染性疾病的病原菌 首先，將兩條引物設(shè)計(jì)在保守區(qū)，成為通用引物，而在變異區(qū)中選擇序列作為特異性探針，先用通用引物作 PCR擴(kuò)增，可篩選出含有病原菌的樣本，再用特異性探針與擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交，對(duì)目的細(xì)菌作出鑒定，達(dá)到診斷病原體及分型的目的。 ? 鑒定特定細(xì)菌種屬 目前認(rèn)為，已發(fā)現(xiàn)的 23SrRNA基因的 IVSs具有種屬特異性，可利用 IVSs（ 插入序列）進(jìn)行 PCR擴(kuò)增達(dá)到對(duì)某一種屬細(xì)菌的診斷。 ? 在流行病學(xué)方面的應(yīng)用 利用可變區(qū)序列的差異可對(duì)相同菌種不同菌株進(jìn)行分析。為流行病提供依據(jù)。 ? 除以上介紹的各方法外 ,常用的有效檢測(cè)方法還有脈沖場(chǎng)電泳、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA指紋分析、細(xì)胞毒試驗(yàn)等 ,在此不一一贅述。 ? 大腸桿菌 O157: H7的檢驗(yàn)程序 ? 樣品 增菌 6小時(shí) 磁珠濃縮 ? ? 可疑菌落 山梨醇麥康凱瓊脂 ? ? ? ? G染色 生化反應(yīng) 血清學(xué) 毒力基因 ? 大腸桿菌 O157: H7實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù) 有下列情況之一具有實(shí)驗(yàn)室確診意義： ? 1) 從腹瀉病患者的糞便標(biāo)本中分離出大腸桿菌 O157: H7 ； ? 2) 經(jīng) PCR或 DNA雜交試驗(yàn)證實(shí)具有溶血素基因 及志賀樣毒素基因； ? 3) 腹瀉病患者恢復(fù)期血清抗 O157LPS IgG抗體呈 4倍升高； ? 4) 具有血性便的腹瀉患者的急性期血清或恢復(fù)期血清，蛋白印記試驗(yàn)證實(shí)含有和 O157LPS、EHEC溶 血素或志賀毒素的特異性抗體． 小結(jié) ? 自從 O157: H7被認(rèn)識(shí)以來(lái) ,對(duì)其基因的研究越來(lái)越細(xì) ,已經(jīng)探明了許多結(jié)構(gòu)與功能基因 ,對(duì)其病因?qū)W 、 病理學(xué)及臨床治療方面均有很大促進(jìn)作用 。 由于引起感染所需的 O157: H7劑量很低 ,有必要發(fā)展一些靈敏度高的方法 ,用于快速有效地檢測(cè) 。 另外 ,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)存在許多變異株 ,單用一種方法來(lái)檢測(cè)往往是不夠的 。 如發(fā)酵山梨醇的變異株用 SMAC即不能檢測(cè)到 。由于許多非 EHEC(EPEC、 霍亂弧菌 、 志賀菌等 )也可產(chǎn)生 SLT,故單純檢測(cè) SLT也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果 。因此對(duì)一個(gè)樣品的檢測(cè)需結(jié)合使用多種方法才能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果 。
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