大腸桿菌實驗診斷研究進展ppt44-經(jīng)營管理-資料下載頁
2025-08-06 12:18本頁面
【導(dǎo)讀】現(xiàn)在腹瀉后數(shù)天或1-2周。病死率一般在10%，各別可。人，尤其老年人。病人主要表現(xiàn)為發(fā)熱、血小板減少、死率高，有時可出現(xiàn)70%的病人死亡。大腸桿菌O157:H7基本上是一種食源性病原菌，感染,也可通過人與人、人與動物密切接觸傳播。在實驗室，大腸桿菌O157:H7可以感染小鼠、雞、大腸桿菌O157:H7的感染已成為世界性的問題。培養(yǎng)的對象首先是急性血性腹瀉患者，其次是HUS、TTP等住院。免疫磁珠分離法是將特異性抗體吸附于一種能。Chapman等共檢測大便標本690份,免疫磁珠分離法檢出25。法分離的l2株大腸桿菌O157:H7中,直接培養(yǎng)陽性僅5株。Wright等將接種大腸桿菌O157:H7的碎牛肉標本置加有萬古霉素和頭孢。用前者檢測接種12株不同大腸桿菌O157:H7菌株的牛糞。培養(yǎng)和IMS均陽性20份,另13份僅IMS陽性。IMS和其它檢測的研究表明,對快速檢。源下觀察結(jié)果,產(chǎn)生藍色熒光者為陽性。為排除交叉反應(yīng)引起的凝集造成假陽性,至今，在免疫測定中，金標記常與膜
【正文】 22 166bp。 嚴笠選用針對大腸桿菌 O157: H7志賀樣毒素 Ⅰ 、 Ⅱ （ SLT－ Ⅰ 、SLT－ Ⅱ ） 和溶血素 （ Hly） 基因的三對引物 ,在同一擴增體系中進行 PCR,檢測 12株不同來源的 O157: H7大腸桿菌及其它致病性大腸桿菌及沙門菌 、 志賀菌 15株 。 結(jié)果復(fù)合PCR方法較單一 PCR方法具有較高的特異性 ， 12株 O157: H7取得了穩(wěn)定 、 可靠的陽性結(jié)果 。 能迅速 、 有效地與其它致病性大腸桿菌及沙門氏菌 、 志賀菌相鑒別 。 PCR技術(shù)在 大腸桿菌 O157: H7檢測中的應(yīng)用 （ 3）原位 PCR: kurokawa等不用培養(yǎng)過程 ,直接用原位 PCR技術(shù)結(jié)合落射顯微鏡 ,在單細胞水平快速檢測 O157: H7 。 大腸桿菌 O157: H7分型、檢測中的應(yīng)用 ? 傳統(tǒng)的細菌分類方法主要依賴于細菌的形態(tài)學(xué)、代謝產(chǎn)物、酶活性和表面抗原等特征。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅速發(fā)展，微生物檢測進入了基因時代，以核糖體核糖核酸序列為基礎(chǔ)的分類方法為微生物的鑒別提供了新的分子生物學(xué)方法。如 16srRNA、 23srRNA、 1623srRNA區(qū)間序列分析等等，它完全不同于傳統(tǒng)方法，具有快速、簡便、敏感和特異等優(yōu)點。 ? 23SrRNA基因特征： ? 原核生物的核糖體有三種大?。ǚ謩e為 23S、 16S、 5S） 的 rRNA。目前已知 23SrRNA基因全長序列的菌種數(shù)目已達 250種。長度大約為 3000pb。 對許多細菌的 23SrRNA基因序列分析發(fā)現(xiàn)，其序列的可變性比 16SrRNA基因要明顯，特別是親源關(guān)系近的種系。利用這些可變區(qū)序列的差異可對相同菌種不同菌株進行分類鑒定。同時對已知 23SrRNA基因序列分析也發(fā)現(xiàn)，在最初的 520pb中有 6個保守區(qū)域（ 510區(qū)域），并發(fā)現(xiàn)，這 6個保守區(qū)域中 6區(qū)段和 10區(qū)段最保守，該序列在 14個菌種中完全一致。 ? 應(yīng)用： ? 檢測臨床感染性疾病的病原菌 首先，將兩條引物設(shè)計在保守區(qū)，成為通用引物，而在變異區(qū)中選擇序列作為特異性探針，先用通用引物作 PCR擴增，可篩選出含有病原菌的樣本，再用特異性探針與擴增產(chǎn)物進行雜交，對目的細菌作出鑒定，達到診斷病原體及分型的目的。 ? 鑒定特定細菌種屬 目前認為，已發(fā)現(xiàn)的 23SrRNA基因的 IVSs具有種屬特異性，可利用 IVSs（ 插入序列）進行 PCR擴增達到對某一種屬細菌的診斷。 ? 在流行病學(xué)方面的應(yīng)用 利用可變區(qū)序列的差異可對相同菌種不同菌株進行分析。為流行病提供依據(jù)。 ? 除以上介紹的各方法外 ,常用的有效檢測方法還有脈沖場電泳、隨機擴增多態(tài)性 DNA指紋分析、細胞毒試驗等 ,在此不一一贅述。 ? 大腸桿菌 O157: H7的檢驗程序 ? 樣品 增菌 6小時 磁珠濃縮 ? ? 可疑菌落 山梨醇麥康凱瓊脂 ? ? ? ? G染色 生化反應(yīng) 血清學(xué) 毒力基因 ? 大腸桿菌 O157: H7實驗室診斷依據(jù) 有下列情況之一具有實驗室確診意義： ? 1) 從腹瀉病患者的糞便標本中分離出大腸桿菌 O157: H7 ； ? 2) 經(jīng) PCR或 DNA雜交試驗證實具有溶血素基因 及志賀樣毒素基因； ? 3) 腹瀉病患者恢復(fù)期血清抗 O157LPS IgG抗體呈 4倍升高； ? 4) 具有血性便的腹瀉患者的急性期血清或恢復(fù)期血清，蛋白印記試驗證實含有和 O157LPS、EHEC溶 血素或志賀毒素的特異性抗體． 小結(jié) ? 自從 O157: H7被認識以來 ,對其基因的研究越來越細 ,已經(jīng)探明了許多結(jié)構(gòu)與功能基因 ,對其病因?qū)W 、 病理學(xué)及臨床治療方面均有很大促進作用 。 由于引起感染所需的 O157: H7劑量很低 ,有必要發(fā)展一些靈敏度高的方法 ,用于快速有效地檢測 。 另外 ,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)存在許多變異株 ,單用一種方法來檢測往往是不夠的 。 如發(fā)酵山梨醇的變異株用 SMAC即不能檢測到 。由于許多非 EHEC(EPEC、 霍亂弧菌 、 志賀菌等 )也可產(chǎn)生 SLT,故單純檢測 SLT也會產(chǎn)生假陽性結(jié)果 。因此對一個樣品的檢測需結(jié)合使用多種方法才能獲得準確的結(jié)果 。
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