hplc理論試題庫及答案-資料下載頁
2025-04-01 22:30本頁面
【正文】 而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線；（9）循環(huán)使用流動相，未調(diào)整檢測器；（10）檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處。相應(yīng)解決方法：（1）控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器（2）使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，檢驗過程中使用在線脫氣或氦氣脫氣；（3）用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸，但不要用鹽酸；（4）取出阻塞物或更換管子，更換流通池窗；（5）更改配比或流速，并定期檢查流動相組成及流速；（6）用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用1020倍體積的新流動相對柱子進行沖洗；使用離子對試劑、緩沖鹽更應(yīng)注意平衡柱；（7）檢查流動相的組成，使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑；（8）改變分析條件；使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子；（9）重新設(shè)定基線；使用新的流動相；（10）將波長調(diào)整至最大吸收波長處；重選檢測波長。4．規(guī)則的基線噪音產(chǎn)生的原因和解決辦法？答：主要原因有：（1）在流動相、檢測器或泵中有空氣（尖銳峰）；（2）漏液；（3）流動相混合不完全；（4）溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）；（5）在同一條線上有其他電子設(shè)備（偶然噪聲）；（6）泵振動；解決方法有：（1）流動相脫氣；沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣；（2）檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音；如有必要，更換泵密封；（3）用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑；（4）減少差異或加上熱交換器；（5）斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正；采用精密級穩(wěn)壓電源；（6）在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。5．不規(guī)則的基線噪音產(chǎn)生原因和解決辦法答：可能原因：（1）漏液；（2）流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成；（3）流動相各溶劑不相溶；（4）檢測器/記錄儀電子元件的問題；（5）系統(tǒng)內(nèi)有氣泡；（6）檢測器內(nèi)有氣泡；（7）流通池污染（即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音。）；（8）檢測器燈能量不足；（9）色譜柱填料流失或阻塞；（10）流動相混合不均勻或混合器工作不正常；解決方法：（1） 檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音；如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液； （2）檢查流動相的組成；（3）選擇互溶的流動相；（4）斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正；（5）用強極性溶液清洗系統(tǒng)；（6）清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器；（7）用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池；（8）更換燈；（9）更換色譜柱；（10）維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置。6．為何出現(xiàn)肩峰或分叉？答：（1）樣品體積過大－－用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% ；（2）樣品溶劑過強－－采用較弱的樣品溶劑；（3）柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；（4）柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品；（5）進樣器損壞－－更換進樣器轉(zhuǎn)子。7．為何出現(xiàn)鬼峰？ 答：（1）進樣閥殘余峰－－每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗；（2）樣品中未知物－－處理樣品；（3）柱未平衡－－重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑（尤其是離子對色譜）；（4）三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化劑 ； （5）水污染（反相）－－通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水。8．液相色譜峰為何出現(xiàn)拖尾？答：（1）柱超載－－降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相；（2）峰干擾－－清潔樣品,調(diào)整流動相；（3）硅羥基作用－－加三乙胺,用堿致鈍化柱,增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,純化樣品；（4）柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效－－更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品；（5）柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；（6）死體積或柱外體積過大－－連接點降至最低,對所有連接點作合適調(diào)整,盡可能采用細內(nèi)徑的連接管；（7）柱效下降－－用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱。9．除了流速外，還有哪些因素能引起壓力改變？答：改變流動相組成和溫度；改變柱長、柱內(nèi)徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。10．除了在線脫氣，常用的實驗室脫氣方式還有哪些？ 答：加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。11．為何出現(xiàn)峰展寬？答：（1）樣品體積過大－－用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%；（2）在進樣閥中造成峰擴展－－進樣前后排出氣泡以降低擴散；（3）數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢－－設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點；（4）檢測器時間常數(shù)過大－－設(shè)定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%；（5）流動相粘度過高－－提高柱溫,或采用低粘度流動相；（6）檢測池體積過大－－用小體積池,卸下熱交換器；（7）保留時間過長－－等度洗脫時增加強溶劑含量,也可用梯度洗脫；（8）柱外體積過大－－將連接管徑和連接管長度降至最?。唬?）樣品過載－－進小濃度小體積樣品 。12．為何會出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰？怎樣避免？答： 用比流動相強度大的大體積樣品進樣，通常會損害色譜圖的質(zhì)量，而出現(xiàn)“胖”峰和平頭峰。應(yīng)遵循下列規(guī)則選用溶劑溶解樣品：（1）最好用流動相溶解樣品進樣；（2）用大體積弱溶劑溶解樣品，如反相色譜中用水溶解樣品進樣，主要缺點是每次進樣后在色譜圖的開頭出現(xiàn)大的負峰，有時還波及到樣品峰。（3）需要時用強溶劑溶解進樣。
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