20xx年醫(yī)學(xué)專題—畢業(yè)論文：雞大腸桿菌病病原的分離與鑒定及藥敏試驗(yàn)(編輯修改稿)
2024-11-19 05:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 液，復(fù)染1min，水洗、待干、鏡檢。結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色[6]，觀察記錄菌體形態(tài)和染色特征?！∩b定a、糖發(fā)酵試驗(yàn) 取可疑菌分別接種葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和蔗糖發(fā)酵管，37℃培養(yǎng)2～3d，觀察結(jié)果。 b、MR（甲基紅）試驗(yàn)和VP（乙酰甲基甲醇試驗(yàn)）試驗(yàn) 取可疑菌接種葡萄糖蛋白胨水，37℃培養(yǎng)2～3d，分別加入MR和VP指示劑，觀察結(jié)果。c、吲哚試驗(yàn) 取蛋白胨水培養(yǎng)管先加少量乙醚，塞緊棉塞振搖試管，使蛋白胨水培養(yǎng)液與乙醚充分混勻，放于試管架上靜置片刻，待乙醚漂浮于液面上層時(shí)，沿管壁滴加吲哚試劑2～3滴，觀察其顏色變化[7]?！≈虏⌒栽囼?yàn)動(dòng)物試驗(yàn)將分離菌接種于營養(yǎng)肉湯，于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。取健康小白鼠6只，分為A、B兩組， A組3只，腹腔接種營養(yǎng)肉湯菌液，；B組3只，腹腔接種等量的滅菌生理鹽水作對照組，分別隔離飼養(yǎng)觀察。取6只7日齡雛雞，健康，也隨機(jī)分為C、D兩組，與小白鼠同樣的方法，C組皮下接種營養(yǎng)肉湯菌液，；D組接種等量的滅菌生理鹽水，隔離飼養(yǎng)?！∷幟粼囼?yàn)藥敏紙片購于南陽市唐河縣畜牧獸醫(yī)站(上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所試劑廠生產(chǎn))，選取不同地區(qū)的分離株6株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。在無菌條件下將培養(yǎng)24h的肉湯培養(yǎng)物，用滅菌生理鹽水作10倍稀釋，用滅菌棒涂勻，平板置室溫下干燥3～5min，用無菌鑷子將卡那霉素、新霉素、慶大霉素、呋喃妥因、 四環(huán)素、鏈霉素6種藥物的含藥紙片緊貼于瓊脂表面，各紙片中心相距大于20mm，紙片距平板內(nèi)緣大于15mm[8]；置35℃恒溫箱內(nèi)16～18h后，觀察結(jié)果。2 結(jié)果與分析 病理剖檢剖檢時(shí)可聞到特殊臭味，見病雞胸腔、腹腔內(nèi)有大量黃色干酪樣滲出物腹腔內(nèi)大塊黃色塊狀滲出物；肝臟腫大，表面瘀血，有散在的白色小壞死灶；纖維性心包炎，心包渾濁增厚，心包腔內(nèi)充滿大量淡黃色液體，心包膜及心外膜上有白色纖維蛋白附著，嚴(yán)重者可見心包膜與心外膜粘連；肺臟瘀血，表面的纖維性滲出物明顯；腸黏膜彌漫性出血，整個(gè)腸管呈紫紅色；腎臟體積腫大，呈紫紅色，腎臟出血，水腫，質(zhì)脆，一觸即爛?！〈竽c桿菌的分離培養(yǎng)麥康凱瓊脂上形成紅色、圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊、～（見圖1）；在伊紅美藍(lán)瓊脂上形成紫黑色、具有金屬光澤的小菌落（見圖2）；在普通瓊脂斜面上形成灰白色的菌落；在普通肉湯中呈現(xiàn)均勻渾濁，管底形成灰白色沉淀，并有糞臭味。圖1 麥康凱瓊脂圖2 伊紅美藍(lán)瓊脂 形態(tài)學(xué)觀察經(jīng)鏡檢可見到革蘭氏陰性菌，兩端鈍圓，～，偶有2～3個(gè)菌體相連，無芽孢。（見圖3）圖3 鏡檢結(jié)果 生化鑒定將分離到的菌株，經(jīng)生化試驗(yàn)鑒定，分解葡萄糖、麥芽糖、甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不分解蔗糖,MR試驗(yàn)呈陽性，VP試驗(yàn)為陰性，吲哚試驗(yàn)陽性,硝酸鹽試驗(yàn)陽性，枸櫞酸鹽試驗(yàn)陰性，硫化氰試驗(yàn)陰性。此結(jié)果符合大腸桿菌的特征，見表1。表1 分離菌生化試驗(yàn)結(jié)果生化試劑生化試劑乳糖⊕枸櫞酸鹽—葡萄糖⊕VP試驗(yàn)—甘露醇⊕靛基質(zhì)+麥芽糖⊕MR試驗(yàn)+蔗糖—硫化氫—阿拉伯糖—尿素酶—山梨醇—吲哚+硝酸鹽+注：+表示陽性；一表示陰性； 表示陽性并產(chǎn)氣[9]。 致病性試驗(yàn)小白鼠試驗(yàn)結(jié)果：接種36h內(nèi)A組小白鼠全部死亡，解剖可見肝臟腫大、出血和灰白色壞死灶，脾臟瘀血腫脹等明顯病理變化，從死亡小白鼠的肝、心、脾等病料中均能回收到接種菌；B組小白鼠飼養(yǎng)1周后全部存活，剖檢無病理變化。雛雞試驗(yàn)結(jié)果：接種1周后，C組雛雞全部死亡，取死雞的肝、脾接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后，有菌落生長，生化鑒定及革蘭氏染色表明：該
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