【文章內(nèi)容簡介】 般 2~8周才能得到肉眼可見菌落。 ? 結(jié)果受標(biāo)本保存運(yùn)送時間，培養(yǎng)基成分和質(zhì)量，前處理方法等影響，操作較直接涂片法復(fù)雜，需經(jīng)嚴(yán)格培訓(xùn)。 ? 需培養(yǎng)基凝固滅菌器，離心機(jī)，渦旋振蕩器，恒溫培養(yǎng)箱等設(shè)備。 ? 成本是直接涂片法的 7~8倍。 分枝桿菌快速培養(yǎng)檢查 ? 分枝桿菌快速培養(yǎng)檢查是使用分枝桿菌快速培養(yǎng)分枝桿菌儀，通過測定細(xì)菌生長代謝而間接檢測分枝桿菌生長情況的方法。由于應(yīng)用營養(yǎng)豐富的液體培養(yǎng)基，并且檢測儀能連續(xù)檢測，故提高了從標(biāo)本中分離分枝桿菌的敏感性進(jìn)而縮短報告結(jié)果的時間。為保證檢查方法的可靠性，目前快速培養(yǎng)檢查系統(tǒng)除提供相應(yīng)儀器，試劑以外，均根據(jù)不同系統(tǒng)制定了相應(yīng)的臨床標(biāo)本前處理、接種、檢測和報告結(jié)果的規(guī)程 ,故在進(jìn)行相應(yīng)的檢查時，結(jié)果的可重復(fù)性和可比性均能得到認(rèn)可。 分枝桿菌快速培養(yǎng)檢查 ? 在進(jìn)行分枝桿菌快速培養(yǎng)檢查時，標(biāo)本接種前的去污染處理，必須嚴(yán)格按照系統(tǒng)說明書中規(guī)定的方法進(jìn)行。孵育檢測過程中系統(tǒng)報告陽性時，相應(yīng)標(biāo)本的培養(yǎng)液必須首先進(jìn)行抗酸染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌后方可發(fā)出陽性報告。 幾種常見分枝桿菌快速培養(yǎng)儀 ? Bectec TB640全自動分枝桿菌培養(yǎng)儀在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)液中加入放射性 14C標(biāo)記的棕閭酸作為底物，分枝桿菌生長過程中分解 14C棕閭酸，產(chǎn)生 CO2， 儀器通過檢測 CO2含量換算成生長指數(shù)。培養(yǎng)時間通常需要 4~25天。 ? 優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速，可進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及初步菌種鑒定。 ? 缺點(diǎn)：價格昂貴，需進(jìn)口專利液體培養(yǎng)基，且有放射性污染，正逐漸被非放射性的培養(yǎng)方法所替代。 幾種常見分枝桿菌快速培養(yǎng)儀 ? Bectectb960全自動快速細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)是將熒光物質(zhì)包埋在 7H9液體培養(yǎng)管的底部，分枝桿菌生長過程中， O被消耗，底物產(chǎn)生熒光，儀器通過測定熒光強(qiáng)度，用生長指數(shù)來表示測定結(jié)果，培養(yǎng)時間通常需要 7~42天。 ? 特點(diǎn)：簡便、快速，可進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及初步菌種鑒定。連續(xù)測定熒光強(qiáng)度，每 60分鐘自動測一次，無放射性污染。 幾種常見分枝桿菌快速培養(yǎng)儀 ? Bect/alert 3D全自動快速細(xì)菌培養(yǎng)儀，分枝桿菌生長過程中代謝產(chǎn)生 CO2， CO2的產(chǎn)生使瓶底顏色感受器產(chǎn)生不同的顏色變化。通過比色傳感器來測定， CO2產(chǎn)生的速率和總量與細(xì)菌生長的速率和總量一致。 ? 簡便、快速，可進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及初步菌種鑒定。既能進(jìn)行分枝桿菌培養(yǎng)，又能進(jìn)行普通菌培養(yǎng)，每 10分鐘自動測一次，無放射性污染。 藥物敏感性測定的重要意義 ? 臨床治療的重要參考 ? 流行病學(xué)的重要指標(biāo) 分枝桿菌藥敏試驗(yàn) 在條件具備和有一定經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室方可進(jìn)行此項(xiàng)試驗(yàn)。 下列情況可進(jìn)行分枝桿菌藥物敏感性試驗(yàn)： ? 初始結(jié)核病人觀察起始耐藥菌感染 ? 復(fù)發(fā)結(jié)核病人 ? 痰菌陰轉(zhuǎn)后復(fù)陽者 ? 化療 3~6個月痰菌持續(xù)陽性者 ? 痰菌減少后又持續(xù)增加者 ? 細(xì)菌流行病學(xué)檢查 ? 非結(jié)核分枝桿菌病等 藥物敏感性試驗(yàn)常用標(biāo)準(zhǔn)方法 ? 絕對濃度法 是由 G. Meissner (德國 ) 于 1964年首先提出的 ,是我國 30 多年來一直沿用的藥敏試驗(yàn)方法。 ? 比例法 是由法國的 G. Cati 和 1963 年首先提出 ,是 WHO 全球耐藥監(jiān)測項(xiàng)目中推薦的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)方法。二者在臨界藥物濃度接種菌量、結(jié)果判讀方法等方面都有一定差別 . ? 抗性比濁法 是英國科學(xué)家 提出 ,由于方法比較煩瑣 ,現(xiàn)已不多用 . 比例法和絕對濃度法的一致性 ? 比例法和絕對濃度法是測定分支桿菌藥物敏感性的二種常規(guī)方法 ,前者是世界衛(wèi)生組織 (WHO) 在“全球結(jié)核病耐藥監(jiān)測項(xiàng)目”中推薦的統(tǒng)一方法 ,后者是我國各級實(shí)驗(yàn)室 30 多年來普遍沿用的方法。近年來 ,隨著我國部分省陸續(xù)加入 WHO 耐藥監(jiān)測項(xiàng)目 ,二種方法的一致性問題以及藥敏試驗(yàn)是否向比例法轉(zhuǎn)軌已成為國內(nèi)爭議的熱點(diǎn)。 比例法和絕對濃度法的一致性 ? 綜合以往國內(nèi)有關(guān)比例法和絕對濃度法的試驗(yàn)報道，對 2種方法研究結(jié)果顯示 ,比例法和絕對濃度法檢測結(jié)果的一致率 4 藥均高達(dá) 96 %以上 ,對于結(jié)核分支桿菌 ,二種方法測試 H、 S、 R 和 E 的耐藥率均無顯著性差異。絕對濃度法向比例法轉(zhuǎn)軌，將會使我們的藥敏試驗(yàn)結(jié)果與國際接軌 ，與國際具有可比性，而不會影響到與我國既往資料的連續(xù)性和可比性。 比例法和絕對濃度法的區(qū)別 ? 從試驗(yàn)技術(shù)角度講 ,比例法與絕對濃度法的主要區(qū)別是 : (1) 絕對濃度法對接種量（ 103mg） 要求十分嚴(yán)格 ,既要避免由于過量接種產(chǎn)生自然突變的可能 ,又要保證對照培養(yǎng)基上菌落生長旺盛 ,相比之下 ,比例法由于設(shè)定了高、低 2 個（ 104mg 和 106mg） 接種量的參考系統(tǒng) ,且試驗(yàn)結(jié)果的判定是通過計算活性單位的比值獲得 ,因此對接種量這一藥敏試驗(yàn)的重要變異因素進(jìn)行了一定程度的校正． 比例法和絕對濃度法的區(qū)別 ? (2) 比例法定義 1 %為“敏感”和“耐藥”的臨界點(diǎn) ,而絕對濃度法規(guī)定低濃度含藥培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)多于 20 個判斷為耐藥 ,按接種菌量的活菌單位計算與比例法的 1 %耐藥有相同的理論 基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上 ,由于絕對濃度法每種藥物設(shè)定高、低 2 個藥物濃度 ,所以絕對濃度法在一定程度上反映了耐藥的程度和水平。如果說比例法是定性的藥敏試驗(yàn) ,絕對濃度法則包含有“半定量試驗(yàn)”之意。 （ 3）比例法操作較為繁瑣，且需定量技術(shù)。 藥敏試驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ? 為無淀粉改良羅氏培養(yǎng)基，配方與酸性羅氏培養(yǎng)基相比，只有磷酸二氫鉀(KH2PO4)的量不同，其他成分完全相同。 抗結(jié)核藥物溶液的配制和稀釋 ? ，并確認(rèn)純度和效價，在有效期內(nèi)使用。 ? (INH)、 利福平 (RFP)、 氨硫脲 (TB1)、乙硫異煙胺 (TH1321)、 環(huán)絲氨酸 (SC)的生物效價按其重量單位計算，計算用藥量時只需考慮其純度 .鏈霉素硫酸鹽（ SMSO4)、 乙胺丁