20xx年醫(yī)學(xué)專題—卵母細(xì)胞和胚胎玻璃化冷凍方法(編輯修改稿)
2024-11-19 04:55 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 分鐘）調(diào)整秒表（有計(jì)算功能），為以下步驟檢查并設(shè)定好秒表。胚胎于30秒內(nèi)自由脫落，它會自發(fā)地開始收縮，在ES滲透后，胚胎就會逐漸恢復(fù)到原來的大小，此時平衡步驟就完成了。注意：胚泡平衡要等待卵黃周隙消失。胚泡玻璃化解凍最好的時候是胚胎直徑達(dá)到140180ul的時候。胚胎平衡的時間取決于胚胎的大小和質(zhì)量，好的胚胎和小的胚胎所需時間就比較少。舉例來說，一個好的胚胎8分鐘完全恢復(fù)，平衡步驟已經(jīng)完成。如果不能確定胚胎是否完全恢復(fù)，則停止平衡，12分鐘進(jìn)行原核細(xì)胞分裂， 15分鐘進(jìn)入桑椹胚和囊胚階段，這樣就足夠了。第四部分 玻璃化這個部分對于卵母細(xì)胞和胚胎都是一樣的，以下1到7步驟應(yīng)在6090秒內(nèi)完成。玻璃化 1從ES溶液中用巴斯德管頂吸出卵母細(xì)胞（胚胎），看右圖。然后將胚胎（胚胎）放到VS1中頂部,盡量減少攜帶ES溶液。僅將卵母細(xì)胞（胚胎）帶進(jìn)VS1，為了避免將ES帶進(jìn)VS1，首先將ES吹到孔的外邊，將新鮮的VS1吹到孔的外面，用VS1吸入巴斯德管內(nèi)。玻璃化2—1分鐘內(nèi)用巴斯德管吸入卵母細(xì)胞（胚胎）并放入VS1，在卵母細(xì)胞（胚胎）周圍快速地?cái)嚢?次。重新吸入卵母細(xì)胞（胚胎），在另外的位置放下VS1，在其周圍快速地?cái)嚢?次。改變卵母細(xì)胞（胚胎）周圍的VS1溶液，直到ES溶液視覺上消失了。玻璃化3—將巴斯德管內(nèi)的VS1溶液吹到孔外，將VS2溶液吸入巴斯德管，然后從VS1溶液中將卵母細(xì)胞（胚胎）吸入巴斯德管。將其放入VS2中，盡量減少帶入VS1。在卵母細(xì)胞（胚胎）周圍快速地?cái)噭?，變換2次位置，請看上圖。當(dāng)卵母細(xì)胞（胚胎）周圍全被VS溶液包圍并能觀察到卵母細(xì)胞（胚胎）表面因脫水而萎縮時，此步驟即完成。玻璃化4將載體放在顯微鏡下觀察（標(biāo)簽要朝上），調(diào)整將重點(diǎn)放在載體黑色標(biāo)志上面?？聪聢D。玻璃化4將載體放在顯微鏡下觀察（標(biāo)簽要朝上），調(diào)整將重點(diǎn)放在載體黑色標(biāo)志上面。看下圖。玻璃化5用巴斯德管從VS2吸取收縮了的卵母細(xì)胞（胚胎），將卵母細(xì)胞（胚胎）放在載體的黑體位置，盡量減少帶入VS2(少于1ul), 如果超過2個卵母細(xì)胞（胚胎），每個卵母細(xì)
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