20xx年醫(yī)學(xué)專題—第二十講病原性真菌(編輯修改稿)
2024-11-16 00:32 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 2)抗原檢測(cè)：取病人血清作ELISA、免疫印跡法等檢測(cè)白假絲酵母菌抗原。 3)核酸檢測(cè)：用PCR法將白假絲酵母菌DNA分子擴(kuò)增后以分子探針檢測(cè)，具有較好的敏性和特異性。,第三十二頁(yè)，共八十頁(yè)。,4)分離(fēnl237。)培養(yǎng),將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上，25℃或37℃ 培養(yǎng)1～４d后，可出現(xiàn)(chūxi224。n)奶油色類酵母型菌 落。鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。,第三十三頁(yè)，共八十頁(yè)。,鑒定(ji224。nd236。ng),1)芽管形成試驗(yàn)：將假絲酵母菌接種于0.2～0.5m|血清中，37℃孵育1.5～４h觀察(guānch225。)有無(wú)芽管形成。白假絲酵母菌可形成芽管，其他假絲酵母菌不形成芽管。 2)厚膜孢子形成試驗(yàn)：將假絲酵母菌接種于玉米粉培養(yǎng)基25℃孵育12d后，白假絲酵母菌在菌絲頂端、側(cè)緣或中間形成厚膜孢子。,第三十四頁(yè)，共八十頁(yè)。,3)糖同化(t243。nghu224。)或發(fā)酵試驗(yàn),凡發(fā)酵某種糖一定能同化該糖，故只需做 那些不發(fā)酵糖的同化試驗(yàn)。將假絲酵母菌 接種糖發(fā)酵管，25℃孵育，一般觀察2～3d， 對(duì)不發(fā)酵或弱發(fā)酵管可延長(zhǎng)至10d或2—4周。 觀察有無(wú)酵母生長(zhǎng)或液體培養(yǎng)基是否變混 濁。現(xiàn)在(xi224。nz224。i)商品化的產(chǎn)色培養(yǎng)基可快速鑒定 白假絲酵母菌和其他假絲酵母菌。,第三十五頁(yè)，共八十頁(yè)。,(3)藥物敏感試驗(yàn)：對(duì)二性霉素B、5FC等藥 物敏感，但對(duì)5FC極易產(chǎn)生耐藥性。 (4)抗體檢測(cè)：早期診斷可用ELlSA夾心法、 免疫(miǎny236。)酶斑點(diǎn)試驗(yàn)，方法簡(jiǎn)便。也可用乳膠 凝集試驗(yàn)和對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)等檢測(cè)血清 中抗白假絲酵母菌抗體。 (5)動(dòng)物試驗(yàn)：將假絲酵母菌懸液注射1ml于家 兔耳靜脈或注射0.2ml于小白鼠尾靜脈，假 絲酵母菌對(duì)動(dòng)物無(wú)致病性。,第三十六頁(yè)，共八十頁(yè)。,(二)熱帶(r232。d224。i)假絲酵母菌,廣泛分布于自然界，在人體表和外界相通的腔道中也存在。熱帶假絲酵母菌可引起皮膚、粘膜和內(nèi)臟(n232。iz224。ng)假絲酵母菌病。它除可在粘膜細(xì)胞上增殖引起感染外，其產(chǎn)生的毒素可引起過(guò)敏反應(yīng)及產(chǎn)生的水解酶類引起組織損傷。,第三十七頁(yè)，共八十頁(yè)。,微生物檢驗(yàn)(jiǎny224。n),(1)直接顯微鏡檢查：將標(biāo)本作涂片革蘭 染色后鏡檢，觀察Ｇ+假絲酵母菌。 (2)分離培養(yǎng)與鑒定(ji224。nd236。ng)：將標(biāo)本接種在沙氏 培養(yǎng)基上形成色暗而干燥的菌落, 取 菌落作TZC反應(yīng)。,第三十八頁(yè)，共八十頁(yè)。,TZC反應(yīng)(fǎny236。ng),即在葡萄糖蛋白胨瓊脂內(nèi)加入0．05g／L氯化 三苯基四氮唑(TZC)，熱帶(r232。d224。i)假絲酵母菌在此培 養(yǎng)基上生長(zhǎng)后使培養(yǎng)基變?yōu)樯罴t色或紫色， 而白假絲酵母菌不使培養(yǎng)基變色(淡紅)，其 他假絲酵母菌使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。再取菌落 做糖發(fā)酵或同化試驗(yàn)、芽管形成較遲(血清中 6h以上)，不形成厚膜孢子、動(dòng)物試驗(yàn)陰性。,第三十九頁(yè)，共八十頁(yè)。,二、隱球菌(qijūn)屬,包括17個(gè)種和7個(gè)變種，廣泛分布于自然界，人體體表、口腔和腸道中。外源性感染, 經(jīng)呼吸道侵入，由肺經(jīng)血行播散,可侵犯肺、腦及腦膜、皮膚、骨和關(guān)節(jié)。好發(fā)于細(xì)胞免疫功能(gōngn233。ng)低下者，如AIDS、惡性腫瘤、糖尿病、器官移植及大劑量使用糖皮質(zhì)激素者?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)新生隱球菌、淺白隱球菌和羅倫隱球菌有致病性。,第四十頁(yè)，共八十頁(yè)。,(１)微生物特性(t232。x236。ng),在組織中呈圓形或卵圓形，直徑一般在4～6μm，外周有寬厚莢膜，莢膜較菌大1～3倍，折光性強(qiáng)，一般染色法不易著色而難以(n225。nyǐ)發(fā)現(xiàn)而得名。常采用墨汁負(fù)染色法，在黑色景下可鏡檢到透亮菌體和寬厚莢膜。非致病性隱球菌無(wú)莢膜。,第四十一頁(yè)，共八十頁(yè)。,（２）生物學(xué)多態(tài)性,有A、B、C、D等4個(gè)血清型，歸入兩個(gè)變種組：①新生隱球菌(qijūn)新生變種，有性階段為新生線黑粉菌，血清型為A、D；②新生隱球菌格特變種，有性階段為棒桿孢線黑粉菌，血清型為B、C。 用含刀豆氨酸、甘氨酸、溴麝香草酚藍(lán)培養(yǎng)基可區(qū)分兩個(gè)種，B、C型可使培養(yǎng)基由黃色變藍(lán)色，而A、D型則無(wú)此作用。在沙氏培養(yǎng)基上形成白色粘稠菌落。,第四十二頁(yè)，共八十頁(yè)。,(３)微生物檢驗(yàn)(jiǎny224。n),(1) 標(biāo)本直接鏡檢：用病人腦脊液作墨汁負(fù)染色檢查是診斷隱球菌(qijūn)腦膜炎最簡(jiǎn)便、快速方法。常規(guī)細(xì)胞染色可發(fā)現(xiàn)隱球菌(qijūn)，但易誤診和漏診。如用PAS染色后新生隱球菌呈紅色。,第四十三頁(yè)，共八十頁(yè)。,(2)抗原(k224。ngyu225。n)檢測(cè),用乳膠凝集試驗(yàn)、ELISA、和單克隆抗體法等免疫學(xué)方法檢測(cè)隱球菌莢膜多糖特異性抗原，已成為臨床上的常規(guī)診斷(zhěndu224。n)方法，其中以乳膠凝集試驗(yàn)最為常用，此法簡(jiǎn)便、快速。特別對(duì)直接鏡檢和分離鑒定陰性者更有診斷(zhěndu224。n)價(jià)值。ELISA敏感性和特異性都較高。單克隆抗體法除有較高敏感性和特異性外，標(biāo)本無(wú)須稀釋和預(yù)先處理的優(yōu)點(diǎn)。,第四十四頁(yè)，共八十頁(yè)。,(3)核酸(h233。 suān)檢測(cè),可用痰液、支氣管吸出物等標(biāo)本核酸檢測(cè)(jiǎn c232。)方法有DNA探針法、PCR探針法等，用于檢測(cè)的探針、引物主要選自保守區(qū)的重復(fù)序列。 可檢出新生隱球菌，并可區(qū)別類型，是新生變種還是格特變種。非致病性隱球菌不被檢出。 此方法不受藥物治療的影響，還能正確評(píng)價(jià)臨床療效和預(yù)后等。,第四十五頁(yè)，共八十頁(yè)。,（４）分離(fēnl237。)培養(yǎng),將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上，病原性隱球菌在25℃和37℃生長(zhǎng)，而非病原性隱球菌在37℃時(shí)不生長(zhǎng)。培養(yǎng)2—5d后觀察菌落形態(tài)(x237。ngt224。i)特點(diǎn)，并取菌落作印度墨汁負(fù)染色鏡檢。,第四十六
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