【文章內容簡介】 可。因為當附貼切片時，從室溫中取出的溫差，當溫度較高的載片附貼上溫度低的切片時，由于兩種物質溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子間的彼此轉移而產(chǎn)生了一種吸附力。使切片與載片牢固地附貼在一起。如果用冷藏的載片附貼切片，就沒有這種現(xiàn)象發(fā)生。（8）應視不同的組織選擇不同冰凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根椐不同的組織而定，不能一概而論，例如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝臟組織和淋巴結組織等，冷凍箱的溫度可調在10℃～15℃左右。切甲狀腺，脾、腎、肌肉等組織,則應調在15℃ ～20℃左右。切帶有脂肪的組織如乳腺組織，應調在25℃左右，如為大量的脂肪組織時，應調至30℃。四、冰凍切片時的注意事項防卷板和切片及持刀架上的地方應保持干凈經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余及用柔軟的紙張擦。因為包埋劑常常貼在上述的地方。如果不把它們去除掉，就會影響切片。使切片不能完整切出。應用于冰凍切片的組織不能過大過厚，過大難以切出好片過厚冰凍費時，最好的取材應在24 24 2cm。冰凍組織前組織放于組織支承器上應視組織的走勢來給予放置，然后四周加上包埋劑，保持周邊的整齊，如出現(xiàn)凹凸不平的地方，可用刀子將其修平，才不致于影響切片。組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液在未能達到固定前更不能使用。臨床快速冰凍切片不須要預先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織反而增加了切片的難度。如果使用了未完全固定的組織做冰凍切片，就會出現(xiàn)冰晶，這是因為含水溶液的固定液在組織未經(jīng)固定前，其中的水份也會滲入到組織當中去，當冰凍發(fā)生時，這些水份就存留于組織中形成了冰晶。當切片時，如果發(fā)現(xiàn)組織冰凍過度時，可將冰凍的組織取出來，于室溫中停留片刻，以利于軟化組織，使其不致于過度冰凍。五、冰凍切片的快速染色用普通染色進行染色（HE染色）（1）固定、切片用電吹風吹干后于10%的福爾馬林鹽或純丙酮中固定2分鐘后自來水沖洗。（2）滴少許蘇木素染液于切片上于酒精燈上加熱染色，當見有蒸汽時即可中止染色，快速水洗、分化、用熱水促其藍化、伊紅對比染色、酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。超聲波快速染色法（1）固定：切片的固定與上同。（2）把水洗后的切片插入裝有蘇木素的玻璃瓶中超聲波處理30sec或1min,水洗、分化、放于裝有熱水的玻璃瓶中、超聲波處理30sec,酒精脫水，二甲苯透明封固。結果：經(jīng)上述各種方法處理后所制作的切片。細胞核呈藍色，軟骨基質鈣鹽深藍色，胞漿呈深度不同的粉紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，膠原纖維量粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，切片完整，未見有冰晶出現(xiàn)。第六章 切片染色與封固一、染色：利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細胞內的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細結構能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細胞的各種成分。一、染色 ?目的:將組織切片浸入染色劑內,使組織或細胞等成分染上不同的顏色 產(chǎn)生不同的折射 ,以便在光學顯微鏡下觀察.?方法:蘇木素伊紅染色稱常規(guī)染色,(特染).染色原理化學反應：利用組織細胞內酸堿性的不同，其與陰陽離子結合力的不同，染色也不同。如：細胞核呈酸性＋堿性染料(氧化蘇木素)→深藍色細胞漿呈堿性﹢酸性染料(伊紅染料)→不同深淺的紅色物理作用：①毛細管作用及滲透作用②吸收和溶液作用：如復紅溶液為紅色，所染組織也為紅色，但干燥復紅為綠色③吸附作用 染色術語?⒈媒染劑：與染料或組織發(fā)生結合作用，促進染色能力的物質，如鐵明礬、鉀明礬等。?⒉促染劑：能使組織易于著色的物質，它與媒染劑不同，不直接參與染色反應，如醋酸、碳酸等。?⒊分化劑：如酸堿類分化劑，又稱退色劑；氧化退色劑，主要用于漂白作用。染色步驟: 脫蠟（1）二甲苯I5分鐘（2）二甲苯II（應完全透明）5分鐘逐級降濃度酒精水化脫二甲苯（3）無水酒精I（變?yōu)椴煌该鳎?－2分鐘（4）無水酒精II1－2分鐘（5）95% 酒精1－2分鐘（6）80% 酒精1－2分鐘（7）自來水洗片刻染色步驟（8）蒸餾水片刻（9）蘇木素液染核10—15分鐘（10）自來水沖洗片刻（11）1%鹽酸酒精分化—1分鐘（12）流水沖洗片刻（13）碳酸鋰飽和水溶液反藍1分鐘（14）流水沖洗510分鐘（15）復染 0．5％伊紅水溶液（對比染色）2—5分鐘 染色步驟: ?逐級升濃度酒精脫水（若為醇溶伊紅可直接人90％酒精）（16）自來水洗（分化伊紅）片刻（17）95％酒精I1－2分鐘（18）95%酒精 III—2分鐘（I9）無水酒精 I1—2分鐘（20）無水酒精IIl－2分鐘 ?透明（21）二甲苯I5—10分鐘（22）二甲苯II5—10分鐘（23）蓋玻片下封固?染色結果: 細胞核：藍色，軟骨基質鈣鹽等深藍色；細胞漿深淺不同的粉紅色，嗜酸性顆粒鮮紅色；膠原纖維呈粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，紅血球為桔紅色，蛋白基質為粉紅色。? HE（Hematoxin Eosin,HE〕染色 ?1〕蘇木素染色配方： ?蘇木素1g ?純酒精10ml ?鉀明礬20g ?蒸餾水200ml ?氯化汞 ?2〕伊紅染色配方：伊紅 ?蒸餾水99ml 伊紅染液 ?配方：伊紅Y（水溶）—lg蒸餾水99ml若取用伊紅Y（醇溶性）應溶于99ml75％或95％的乙醇中。，可加速其染色過程，并使胞漿的色澤更為艷麗 HE染色過程中的要點： ?切片脫蠟務必干凈徹底?脫苯和酒精要徹底?蘇木素染色液配制及鹽酸酒精分化較為重要?各級水洗應充分及伊紅染色要適當?切片固封樹膠要適當染色時的注意事項（1）切片烘烤以切片附貼牢固為原則，否則容易掉片。（2）切片脫蠟一定要徹底，不然會導致染色深淺不一。（3）切片染蘇木素前可令其無水化，這樣可延長蘇木素的壽命。因為每次染色前，切片水洗，然后進入染液雖然每次帶入的水分很少，但隨著次數(shù)的增加，所帶入的水分足可以稀釋染液影響染色的質量。（4）切片在蘇木素的染色時間應充分寧過勿不足。對于初學者來說更應過染，否則分化會過度導致染色過淺。（5）切片分化時，要根椐不同的組織來確定分化時間，并不斷積累經(jīng)驗。（6）伊紅染色時間也要充分，經(jīng)低濃度灑精時應仔細觀察，必要時快速通過，以免過于褪色。（7）切片致無水酒精后，不要在控干無水酒精時讓切片干涸，可以不經(jīng)控干直接地進入碳酸二甲苯（也可以進入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有較強的吸水性透明也好很適合南方地區(qū)。（8）切片從二甲苯中取出封固時，切不能讓其干涸，因南方地區(qū)空氣潮濕干涸的切片與空氣接觸，可吸收其水份。這樣的切片很容易裉色。切片不干涸，表面被著二甲苯，由于它不溶于水起到與水隔絕的作用。（9）滴中性樹膠封蓋切片，膠不能太濃，太濃膠難以均勻鋪開，且易產(chǎn)生氣泡，又不能太稀過稀的膠由于二甲苯含量較多，當切片干燥時，二甲苯揮發(fā)掉，膠封的切片收縮，即可導致一半切片沒有被膠封固的結果。最合適的膠應是滴下成珠。（10）封固切片時，盛膠的瓶子及瓶蓋四周不要留有余膠，否則瓶蓋難以打開。因此每次用完后都必須將其擦干凈。當打不開瓶蓋時應放入烤箱中烘烤，即可打開。（11）標簽附貼要認真，不要貼得歪歪斜斜，、切片機的使用，應如何注意保養(yǎng)？切片機座應注意平穩(wěn)，切片時應注意搖轉速度的快慢要盡量保持均勻一致?；瑒用嬉?jīng)常滴上機油，以利于滑動及旋轉自如和防銹，切片完后除去殘蠟，取下切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機，以防灰塵落于機上，影響機器的運轉?；瘜W試劑使用時的注意事項（1）已打開的藥品或染色時的玻璃瓶染色液，每次用后即隨手蓋緊，以免揮發(fā)，易揮發(fā)易吸潮的藥品用后蠟封。（2）易燃的試劑要遠離火種，謹防火災，因病理科有較多的易燃化學試劑。（3）強酸，強堿試劑或有腐蝕性的廢染液，不要直接倒入下水道，以免腐蝕下水道，造成不必要的損失。（4）易變質或易氧化失效的試劑，應標明配制日期，妥為保存，有的只能一次性用完，因此,應本著節(jié)約的原則，用多少，配多少，切勿造成浪費。石蠟切片刀應怎樣保養(yǎng)好？切片刀要經(jīng)常磨，保持鋒利無刀口，每次用完后用布擦干凈，再用油布擦，以防刀口生銹影響切片。如何使樹膠處于中性狀態(tài)？取少量無水碳酸鈉，加入到封固用的樹膠中攪拌后放置數(shù)日取其上清液，即為中性樹膠。切片染完蘇木素后的分化，應該如何控制和注意什么問題？（1）分化液中鹽酸不能高于1%，否則會因分化過強而將已著色的顏色大部分脫水，造成染色過淺。（2）對各種組織應視情況而定，如淋巴結的切片，應分化較長時間等。（3）分化完后，應在顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)核中的物質不清楚，則應繼續(xù)分化至清晰為止。（4）要認真操作，細心觀察，不斷總結。切片欠佳表現(xiàn)在哪些方面？切片欠佳的主要表現(xiàn)有：切片見有刀痕皺折、橫裂、折疊、不全、破碎、組織松散。厚薄不勻或呈波浪狀等現(xiàn)象。二封固蓋玻片下封固結果：胞核呈藍色，胞漿呈紅色，紅細胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色國產(chǎn)中性樹膠 封片,注意樹膠量適中,掌握封片手法, 封固 注意事項：?，以恰能滴下成珠為宜，用前攪拌均勻。?。?，切片上剩余二甲苯不要過多也不要過干，如遇少量氣泡可用鑷子輕壓蓋片，切勿放烤箱內，如氣泡不易壓出需將切片置二甲苯后重新封固。第七章 特殊染色HE染色雖是一種快速、經(jīng)濟、且易掌握的方法，但它不能回答病因學、Z組織發(fā)生及發(fā)病機制等方面的許多問題。而特殊染色可以協(xié)助解決病理診斷問題。特殊染色法是為了達到某些特殊的要求，或是為了觀察特殊的組織結構。一、脂肪染色主要用于心、肝、腎的脂肪變性，動脈粥樣硬化，以及因脂肪栓塞導致的死亡病例鑒定等。試劑配制：蘇丹染液，70%乙醇250ml，丙酮250ml 染色方法：；，把標本放入蘇丹III染液中浸泡30min； ％乙醇分化，以脂肪組織呈橙黃色，其它組織不著色為佳； ％甲醛液中，為了防腐可加入適量的防腐劑。二 彈力纖維染色法病理診斷應用彈力纖維染色，目的是觀察組織內彈力纖維是否增生或破壞、斷裂和崩解，從而幫助診斷。?試劑配制：地衣紅酒精液1g ?70%酒精100ml ?濃鹽酸1ml ?結果：TanerUnna法，彈力纖維呈深棕紅色。Verhoeff鐵蘇木素染色法，彈力纖維呈黑色。Verhoeff鐵蘇木素染色法 三、六胺銀（PASM〕染色? 在腎臟活體組織檢查和一些真菌感染的組織選用此方法 PASM染液的配方：2％硝酸銀水溶液3ml； ?3％六次甲基四胺液25ml； ?5％硼砂2ml。?注：2％硝酸銀配制胺溶液，染色時間40分鐘，溫度 ?55~60℃，隨時鏡下觀察便于控制。PASM染色法：?（1〕1％過碘酸水溶液內染10分鐘； ?（2〕自來水沖洗，蒸餾水沖洗；?（3〕入5％鉻酸水溶液40分鐘，出此溶液后用1％亞硫酸鈉除掉鉻酸； ?（4〕自來水洗數(shù)次，蒸餾水洗3－4次；?（5〕入六胺銀染液（50－60℃〕40分鐘，20分鐘后，每5分鐘鏡下觀察一次，蒸餾水洗四次； ?（6〕%氯化金水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗三次； ?（7〕入5％硫代硫酸鈉水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗數(shù)次； ?（8〕復染HE，脫水、透明、封片?結果：底膜呈黑色，網(wǎng)狀纖維呈黑色，細胞核呈藍色，背景呈粉紅色四、淀粉樣物質染色（介紹剛果紅染色）?.淀粉樣物質是一種嗜伊紅性物質，性質屬于糖蛋白成分。組織出現(xiàn)此物質稱為淀粉樣變性。?1〕試劑配制： ?（1〕剛果紅染色液。剛果紅1g，蒸餾水100ml； ?（2〕Harris蘇木素染色液。淀粉樣物質染色（介紹剛果紅染色）?2〕染色步驟：?（1〕蘇木素染色液浸染2分鐘； ?（2〕%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘； ?（3〕流水洗，蒸餾水洗2次； ?（4〕剛果紅染色液中25分鐘； ?（5〕無水乙醇迅速脫水2次； ?（6〕二甲苯透明，中性樹膠封固。?結果：淀粉樣物質呈紅色，細胞核呈藍色。第八章細胞學檢查技術?細胞學檢查是腫瘤病理診斷和普查較常用方法。?特點：簡便、快速、無創(chuàng)傷，可反復多次檢查。?對于腫瘤，只做初步診斷，確診依