【文章內(nèi)容簡介】 可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí)，從室溫中取出的溫差，當(dāng)溫度較高的載片附貼上溫度低的切片時(shí)，由于兩種物質(zhì)溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時(shí)，分子間的彼此轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力。使切片與載片牢固地附貼在一起。如果用冷藏的載片附貼切片，就沒有這種現(xiàn)象發(fā)生。（8）應(yīng)視不同的組織選擇不同冰凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根椐不同的組織而定，不能一概而論，例如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝臟組織和淋巴結(jié)組織等，冷凍箱的溫度可調(diào)在10℃～15℃左右。切甲狀腺，脾、腎、肌肉等組織,則應(yīng)調(diào)在15℃ ～20℃左右。切帶有脂肪的組織如乳腺組織，應(yīng)調(diào)在25℃左右，如為大量的脂肪組織時(shí)，應(yīng)調(diào)至30℃。四、冰凍切片時(shí)的注意事項(xiàng)防卷板和切片及持刀架上的地方應(yīng)保持干凈經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余及用柔軟的紙張擦。因?yàn)榘駝┏３ＹN在上述的地方。如果不把它們?nèi)コ?，就?huì)影響切片。使切片不能完整切出。應(yīng)用于冰凍切片的組織不能過大過厚，過大難以切出好片過厚冰凍費(fèi)時(shí)，最好的取材應(yīng)在24 24 2cm。冰凍組織前組織放于組織支承器上應(yīng)視組織的走勢(shì)來給予放置，然后四周加上包埋劑，保持周邊的整齊，如出現(xiàn)凹凸不平的地方，可用刀子將其修平，才不致于影響切片。組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液在未能達(dá)到固定前更不能使用。臨床快速冰凍切片不須要預(yù)先固定，一是為了爭(zhēng)取時(shí)間，二是固定了的組織反而增加了切片的難度。如果使用了未完全固定的組織做冰凍切片，就會(huì)出現(xiàn)冰晶，這是因?yàn)楹芤旱墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前，其中的水份也會(huì)滲入到組織當(dāng)中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí)，這些水份就存留于組織中形成了冰晶。當(dāng)切片時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)組織冰凍過度時(shí)，可將冰凍的組織取出來，于室溫中停留片刻，以利于軟化組織，使其不致于過度冰凍。五、冰凍切片的快速染色用普通染色進(jìn)行染色（HE染色）（1）固定、切片用電吹風(fēng)吹干后于10%的福爾馬林鹽或純丙酮中固定2分鐘后自來水沖洗。（2）滴少許蘇木素染液于切片上于酒精燈上加熱染色，當(dāng)見有蒸汽時(shí)即可中止染色，快速水洗、分化、用熱水促其藍(lán)化、伊紅對(duì)比染色、酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。超聲波快速染色法（1）固定：切片的固定與上同。（2）把水洗后的切片插入裝有蘇木素的玻璃瓶中超聲波處理30sec或1min,水洗、分化、放于裝有熱水的玻璃瓶中、超聲波處理30sec,酒精脫水，二甲苯透明封固。結(jié)果：經(jīng)上述各種方法處理后所制作的切片。細(xì)胞核呈藍(lán)色，軟骨基質(zhì)鈣鹽深藍(lán)色，胞漿呈深度不同的粉紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，膠原纖維量粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，切片完整，未見有冰晶出現(xiàn)。第六章 切片染色與封固一、染色：利用染料在組織切片上給與顏色，使其與組織或細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細(xì)結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細(xì)胞的各種成分。一、染色 ?目的:將組織切片浸入染色劑內(nèi),使組織或細(xì)胞等成分染上不同的顏色 產(chǎn)生不同的折射 ,以便在光學(xué)顯微鏡下觀察.?方法:蘇木素伊紅染色稱常規(guī)染色,(特染).染色原理化學(xué)反應(yīng)：利用組織細(xì)胞內(nèi)酸堿性的不同，其與陰陽離子結(jié)合力的不同，染色也不同。如：細(xì)胞核呈酸性＋堿性染料(氧化蘇木素)→深藍(lán)色細(xì)胞漿呈堿性﹢酸性染料(伊紅染料)→不同深淺的紅色物理作用：①毛細(xì)管作用及滲透作用②吸收和溶液作用：如復(fù)紅溶液為紅色，所染組織也為紅色，但干燥復(fù)紅為綠色③吸附作用 染色術(shù)語?⒈媒染劑：與染料或組織發(fā)生結(jié)合作用，促進(jìn)染色能力的物質(zhì)，如鐵明礬、鉀明礬等。?⒉促染劑：能使組織易于著色的物質(zhì)，它與媒染劑不同，不直接參與染色反應(yīng)，如醋酸、碳酸等。?⒊分化劑：如酸堿類分化劑，又稱退色劑；氧化退色劑，主要用于漂白作用。染色步驟: 脫蠟（1）二甲苯I5分鐘（2）二甲苯II（應(yīng)完全透明）5分鐘逐級(jí)降濃度酒精水化脫二甲苯（3）無水酒精I(xiàn)（變?yōu)椴煌该鳎?－2分鐘（4）無水酒精I(xiàn)I1－2分鐘（5）95% 酒精1－2分鐘（6）80% 酒精1－2分鐘（7）自來水洗片刻染色步驟（8）蒸餾水片刻（9）蘇木素液染核10—15分鐘（10）自來水沖洗片刻（11）1%鹽酸酒精分化—1分鐘（12）流水沖洗片刻（13）碳酸鋰飽和水溶液反藍(lán)1分鐘（14）流水沖洗510分鐘（15）復(fù)染 0．5％伊紅水溶液（對(duì)比染色）2—5分鐘 染色步驟: ?逐級(jí)升濃度酒精脫水（若為醇溶伊紅可直接人90％酒精）（16）自來水洗（分化伊紅）片刻（17）95％酒精I(xiàn)1－2分鐘（18）95%酒精 III—2分鐘（I9）無水酒精 I1—2分鐘（20）無水酒精I(xiàn)Il－2分鐘 ?透明（21）二甲苯I5—10分鐘（22）二甲苯II5—10分鐘（23）蓋玻片下封固?染色結(jié)果: 細(xì)胞核：藍(lán)色，軟骨基質(zhì)鈣鹽等深藍(lán)色；細(xì)胞漿深淺不同的粉紅色，嗜酸性顆粒鮮紅色；膠原纖維呈粉紅色，肌纖維呈鮮紅色，彈力纖維呈亮紅色，紅血球?yàn)榻奂t色，蛋白基質(zhì)為粉紅色。? HE（Hematoxin Eosin,HE〕染色 ?1〕蘇木素染色配方： ?蘇木素1g ?純酒精10ml ?鉀明礬20g ?蒸餾水200ml ?氯化汞 ?2〕伊紅染色配方：伊紅 ?蒸餾水99ml 伊紅染液 ?配方：伊紅Y（水溶）—lg蒸餾水99ml若取用伊紅Y（醇溶性）應(yīng)溶于99ml75％或95％的乙醇中。，可加速其染色過程，并使胞漿的色澤更為艷麗 HE染色過程中的要點(diǎn)： ?切片脫蠟務(wù)必干凈徹底?脫苯和酒精要徹底?蘇木素染色液配制及鹽酸酒精分化較為重要?各級(jí)水洗應(yīng)充分及伊紅染色要適當(dāng)?切片固封樹膠要適當(dāng)染色時(shí)的注意事項(xiàng)（1）切片烘烤以切片附貼牢固為原則，否則容易掉片。（2）切片脫蠟一定要徹底，不然會(huì)導(dǎo)致染色深淺不一。（3）切片染蘇木素前可令其無水化，這樣可延長蘇木素的壽命。因?yàn)槊看稳旧?，切片水洗，然后進(jìn)入染液雖然每次帶入的水分很少，但隨著次數(shù)的增加，所帶入的水分足可以稀釋染液影響染色的質(zhì)量。（4）切片在蘇木素的染色時(shí)間應(yīng)充分寧過勿不足。對(duì)于初學(xué)者來說更應(yīng)過染，否則分化會(huì)過度導(dǎo)致染色過淺。（5）切片分化時(shí)，要根椐不同的組織來確定分化時(shí)間，并不斷積累經(jīng)驗(yàn)。（6）伊紅染色時(shí)間也要充分，經(jīng)低濃度灑精時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察，必要時(shí)快速通過，以免過于褪色。（7）切片致無水酒精后，不要在控干無水酒精時(shí)讓切片干涸，可以不經(jīng)控干直接地進(jìn)入碳酸二甲苯（也可以進(jìn)入二甲苯酒精混合1：1）碳酸有較強(qiáng)的吸水性透明也好很適合南方地區(qū)。（8）切片從二甲苯中取出封固時(shí)，切不能讓其干涸，因南方地區(qū)空氣潮濕干涸的切片與空氣接觸，可吸收其水份。這樣的切片很容易裉色。切片不干涸，表面被著二甲苯，由于它不溶于水起到與水隔絕的作用。（9）滴中性樹膠封蓋切片，膠不能太濃，太濃膠難以均勻鋪開，且易產(chǎn)生氣泡，又不能太稀過稀的膠由于二甲苯含量較多，當(dāng)切片干燥時(shí)，二甲苯揮發(fā)掉，膠封的切片收縮，即可導(dǎo)致一半切片沒有被膠封固的結(jié)果。最合適的膠應(yīng)是滴下成珠。（10）封固切片時(shí)，盛膠的瓶子及瓶蓋四周不要留有余膠，否則瓶蓋難以打開。因此每次用完后都必須將其擦干凈。當(dāng)打不開瓶蓋時(shí)應(yīng)放入烤箱中烘烤，即可打開。（11）標(biāo)簽附貼要認(rèn)真，不要貼得歪歪斜斜，、切片機(jī)的使用，應(yīng)如何注意保養(yǎng)？切片機(jī)座應(yīng)注意平穩(wěn)，切片時(shí)應(yīng)注意搖轉(zhuǎn)速度的快慢要盡量保持均勻一致。滑動(dòng)面要經(jīng)常滴上機(jī)油，以利于滑動(dòng)及旋轉(zhuǎn)自如和防銹，切片完后除去殘蠟，取下切片刀，先用濕布擦去余蠟，繼用干布擦干，再用油布擦一遍，最后用罩蓋好切片機(jī)，以防灰塵落于機(jī)上，影響機(jī)器的運(yùn)轉(zhuǎn)?；瘜W(xué)試劑使用時(shí)的注意事項(xiàng)（1）已打開的藥品或染色時(shí)的玻璃瓶染色液，每次用后即隨手蓋緊，以免揮發(fā)，易揮發(fā)易吸潮的藥品用后蠟封。（2）易燃的試劑要遠(yuǎn)離火種，謹(jǐn)防火災(zāi)，因病理科有較多的易燃化學(xué)試劑。（3）強(qiáng)酸，強(qiáng)堿試劑或有腐蝕性的廢染液，不要直接倒入下水道，以免腐蝕下水道，造成不必要的損失。（4）易變質(zhì)或易氧化失效的試劑，應(yīng)標(biāo)明配制日期，妥為保存，有的只能一次性用完，因此,應(yīng)本著節(jié)約的原則，用多少，配多少，切勿造成浪費(fèi)。石蠟切片刀應(yīng)怎樣保養(yǎng)好？切片刀要經(jīng)常磨，保持鋒利無刀口，每次用完后用布擦干凈，再用油布擦，以防刀口生銹影響切片。如何使樹膠處于中性狀態(tài)？取少量無水碳酸鈉，加入到封固用的樹膠中攪拌后放置數(shù)日取其上清液，即為中性樹膠。切片染完蘇木素后的分化，應(yīng)該如何控制和注意什么問題？（1）分化液中鹽酸不能高于1%，否則會(huì)因分化過強(qiáng)而將已著色的顏色大部分脫水，造成染色過淺。（2）對(duì)各種組織應(yīng)視情況而定，如淋巴結(jié)的切片，應(yīng)分化較長時(shí)間等。（3）分化完后，應(yīng)在顯微鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)核中的物質(zhì)不清楚，則應(yīng)繼續(xù)分化至清晰為止。（4）要認(rèn)真操作，細(xì)心觀察，不斷總結(jié)。切片欠佳表現(xiàn)在哪些方面？切片欠佳的主要表現(xiàn)有：切片見有刀痕皺折、橫裂、折疊、不全、破碎、組織松散。厚薄不勻或呈波浪狀等現(xiàn)象。二封固蓋玻片下封固結(jié)果：胞核呈藍(lán)色，胞漿呈紅色，紅細(xì)胞呈桔紅色，其它成分呈深淺不同紅色國產(chǎn)中性樹膠 封片,注意樹膠量適中,掌握封片手法, 封固 注意事項(xiàng)：?，以恰能滴下成珠為宜，用前攪拌均勻。?。?，切片上剩余二甲苯不要過多也不要過干，如遇少量氣泡可用鑷子輕壓蓋片，切勿放烤箱內(nèi)，如氣泡不易壓出需將切片置二甲苯后重新封固。第七章 特殊染色HE染色雖是一種快速、經(jīng)濟(jì)、且易掌握的方法，但它不能回答病因?qū)W、Z組織發(fā)生及發(fā)病機(jī)制等方面的許多問題。而特殊染色可以協(xié)助解決病理診斷問題。特殊染色法是為了達(dá)到某些特殊的要求，或是為了觀察特殊的組織結(jié)構(gòu)。一、脂肪染色主要用于心、肝、腎的脂肪變性，動(dòng)脈粥樣硬化，以及因脂肪栓塞導(dǎo)致的死亡病例鑒定等。試劑配制：蘇丹染液，70%乙醇250ml，丙酮250ml 染色方法：；，把標(biāo)本放入蘇丹III染液中浸泡30min； ％乙醇分化，以脂肪組織呈橙黃色，其它組織不著色為佳； ％甲醛液中，為了防腐可加入適量的防腐劑。二 彈力纖維染色法病理診斷應(yīng)用彈力纖維染色，目的是觀察組織內(nèi)彈力纖維是否增生或破壞、斷裂和崩解，從而幫助診斷。?試劑配制：地衣紅酒精液1g ?70%酒精100ml ?濃鹽酸1ml ?結(jié)果：TanerUnna法，彈力纖維呈深棕紅色。Verhoeff鐵蘇木素染色法，彈力纖維呈黑色。Verhoeff鐵蘇木素染色法 三、六胺銀（PASM〕染色? 在腎臟活體組織檢查和一些真菌感染的組織選用此方法 PASM染液的配方：2％硝酸銀水溶液3ml； ?3％六次甲基四胺液25ml； ?5％硼砂2ml。?注：2％硝酸銀配制胺溶液，染色時(shí)間40分鐘，溫度 ?55~60℃，隨時(shí)鏡下觀察便于控制。PASM染色法：?（1〕1％過碘酸水溶液內(nèi)染10分鐘； ?（2〕自來水沖洗，蒸餾水沖洗；?（3〕入5％鉻酸水溶液40分鐘，出此溶液后用1％亞硫酸鈉除掉鉻酸； ?（4〕自來水洗數(shù)次，蒸餾水洗3－4次；?（5〕入六胺銀染液（50－60℃〕40分鐘，20分鐘后，每5分鐘鏡下觀察一次，蒸餾水洗四次； ?（6〕%氯化金水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗三次； ?（7〕入5％硫代硫酸鈉水溶液1－2分鐘，蒸餾水洗數(shù)次； ?（8〕復(fù)染HE，脫水、透明、封片?結(jié)果：底膜呈黑色，網(wǎng)狀纖維呈黑色，細(xì)胞核呈藍(lán)色，背景呈粉紅色四、淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）?.淀粉樣物質(zhì)是一種嗜伊紅性物質(zhì)，性質(zhì)屬于糖蛋白成分。組織出現(xiàn)此物質(zhì)稱為淀粉樣變性。?1〕試劑配制： ?（1〕剛果紅染色液。剛果紅1g，蒸餾水100ml； ?（2〕Harris蘇木素染色液。淀粉樣物質(zhì)染色（介紹剛果紅染色）?2〕染色步驟：?（1〕蘇木素染色液浸染2分鐘； ?（2〕%鹽酸乙醇分化數(shù)秒鐘； ?（3〕流水洗，蒸餾水洗2次； ?（4〕剛果紅染色液中25分鐘； ?（5〕無水乙醇迅速脫水2次； ?（6〕二甲苯透明，中性樹膠封固。?結(jié)果：淀粉樣物質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。第八章細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)?細(xì)胞學(xué)檢查是腫瘤病理診斷和普查較常用方法。?特點(diǎn)：簡便、快速、無創(chuàng)傷，可反復(fù)多次檢查。?對(duì)于腫瘤，只做初步診斷，確診依