20xx人教版高中生物選修一53血紅蛋白的提取和分離(編輯修改稿)
2025-01-14 14:55 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 、樣品加入和洗脫。 根據(jù)教材圖 5－ 19，說出制作色譜柱需要的材料。 橡皮塞 2個、打孔器、小刀、移液管、尼龍紗、尼龍網(wǎng)、玻璃管、尼龍管等。 色譜柱的制作過程：準(zhǔn)備材料→加工橡皮塞→安裝色譜柱 下面進(jìn)行第二步――凝膠色譜柱的裝填。請閱讀教材： 色譜柱的裝填過程。 步驟 操作要求 ① 操作要求 色譜柱垂直固 定在支架上 ② 計算稱量凝膠 根據(jù)色譜柱體積計算凝膠用量 ③ 配制懸浮液 凝膠顆粒＋蒸餾水→充分溶脹 凝膠顆粒＋洗脫液→沸水浴 ④ 裝填懸浮液 一次性緩慢倒入；輕輕敲打 ⑤ 緩沖液洗滌平衡 立刻用磷酸緩沖液洗滌平衡 12h 樣品加入和洗脫。其基本過程是： 調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì) 至此，血紅蛋白即可得到粗分離。在整個操作過程中，應(yīng)當(dāng)注意以下事項(xiàng)： （ 1）紅細(xì)胞的洗滌： 洗滌次數(shù)不能過少；低速、短時離心。 （ 2）凝膠的預(yù)處理： 沸水浴法時間短，還能除去微生 物和氣泡 （ 3）色譜柱的裝填： 裝填盡量緊密，降低顆粒間隙；無氣泡；洗脫液不能斷流。 （ 4）色譜柱成功標(biāo)志：紅色區(qū)帶均勻一致地移動。 （三）課堂總結(jié)、點(diǎn)評 （四）實(shí)例探究 例 1 利用凝膠色譜法，什么樣的蛋白質(zhì)先洗脫出來（ ） A. 相對分子質(zhì)量大的 B. 溶解度高的 C. 相對分子量小的 D. 所代電荷多的 解析：凝集色譜法使根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)能進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，路程較長，移動速 度較慢；相對分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，路程較短，移動速度較快，首先洗脫出來。 答案： A 例 2 蛋白質(zhì)提取和分離分為哪幾步（ ） A. 樣品處理、凝膠色譜操作、 SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳 B. 樣品處理、凝膠色譜操作、純化 C. 樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定 D. 樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定 解析：蛋白質(zhì)的提取和分離分為樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定四步。 A 中凝膠色譜操作及 SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳為實(shí)驗(yàn)操作過程中的技術(shù) 答案： C ☆綜合應(yīng)用 例 3用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì)（ ） 血 紅 蛋 白 的 取 和 分 離 凝膠色譜法 原 理 分離過程 凝膠電泳法 緩沖溶液 組 成 作 用 蛋白質(zhì)的 提取分離 樣品處理 粗 分 離
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