真菌培養(yǎng)及鑒定(編輯修改稿)
2024-10-29 06:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 方法較好。對喜樹的根部和莖部的升汞消毒時(shí)間以4～5min為宜，喜樹葉子的升汞消毒時(shí)間應(yīng)控制在2min左右。在所試條件下共計(jì)分離得到70株內(nèi)生真菌，主要分布在樹葉(%)和皮部(%)，根部(%)和種子(%)中的內(nèi)生真菌數(shù)目較少，在木質(zhì)部未分離到內(nèi)生真菌。采用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)結(jié)合的方法對所得菌株進(jìn)行鑒定。應(yīng)用形態(tài)學(xué)方法共鑒定出6株內(nèi)生真菌，分布于6屬。按照培養(yǎng)特征，把所得內(nèi)生真菌歸為27個(gè)形態(tài)類群。選取不同形態(tài)類群中的代表菌株，擴(kuò)增并測定其rDNAITS區(qū)段的DNA序列，結(jié)合內(nèi)生真菌與GenBank中參考菌株堿基序列相似性和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析，確定其分類地位。共獲得18株內(nèi)生真菌的ITS序列，分析結(jié)果表明，這18株內(nèi)生真菌分屬于2個(gè)亞門，4綱，8目，8科，14屬。形態(tài)學(xué)鑒定與分子生物學(xué)鑒定結(jié)果一致。鑒定結(jié)果在一定程度上反應(yīng)了喜樹生態(tài)系內(nèi)生真菌的生物多樣性。在本研究中，共分離得到18株擬莖點(diǎn)霉屬(phomopsis)菌株，%，為優(yōu)勢菌群，對其進(jìn)行了基于ITS區(qū)段的系統(tǒng)發(fā)育分析。本文采用薄層層析TLC方法與高效液相色譜HpLC法，從3株內(nèi)生真菌CZ1CZ1CZ18的發(fā)酵產(chǎn)物中檢出喜樹堿。發(fā)酵產(chǎn)物是以喜樹種子煎汁液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。第四篇：真菌的鑒定 真菌的鑒定麥曲在黃酒釀造中起著重要的作用，真菌的鑒定。分析微生物在麥曲中的區(qū)系分布和其中微生物菌群的系統(tǒng)發(fā)育，對于理順麥曲中的微生物與產(chǎn)地環(huán)境的相互關(guān)系、建立麥曲微生物生態(tài)數(shù)據(jù)庫和麥曲品質(zhì)的分子評價(jià)指標(biāo)，具有重要的指導(dǎo)意義。不同培養(yǎng)基進(jìn)行真菌平板分離的結(jié)果文章來源華夏酒報(bào)為了最大限度地分離出麥曲中的真菌，采用了三種培養(yǎng)基，其中pDA和CpK培養(yǎng)基是用來分離真菌的常用培養(yǎng)基，此外還使用了麥曲浸提液培養(yǎng)基(WQE)，因?yàn)樗臓I養(yǎng)成份近似于微生物最原始的生存環(huán)境。對于三種培養(yǎng)基進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)，pDA和WQE培養(yǎng)基上的菌落數(shù)在48小時(shí)后達(dá)到最大，104cfu/104cfu/g干曲。而在CpK培養(yǎng)基上，由于本身是合成培養(yǎng)基，營養(yǎng)不夠豐富，所以24小時(shí)后開始慢慢形成菌落，56小時(shí)后達(dá)到最大值，104 cfu/g干曲。不同培養(yǎng)基的麥曲真菌分布根據(jù)菌落大孝形態(tài)和顏色等表型特征進(jìn)行初步區(qū)分，共得到24株純種菌株。各個(gè)純株在3種分離培養(yǎng)基上的分布情況見表1。從pDA，CpK和WQE三種培養(yǎng)基上分離得到的純種真菌分別為8種、18種和11種。pDA是營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基，但分離出來的真菌數(shù)目最少。而近似于微生物最原始生存環(huán)境的WQE培養(yǎng)基分離得到的真菌種類，要比預(yù)期的少。在合成培養(yǎng)基CpK上分離獲得的真菌種類最多，暗示在低營養(yǎng)長時(shí)間的培養(yǎng)條件下，能夠較多地回收得到麥曲樣品中的真菌。將10—5稀釋度以上檢測到的真菌認(rèn)為是麥曲樣品中的優(yōu)勢菌。從表中可以看出，不同的培養(yǎng)基分離出來的優(yōu)勢菌是不一樣的，且每一種培養(yǎng)基都能檢測到其它培養(yǎng)基所不能檢測到的優(yōu)勢菌株，所以必須聯(lián)合使用多種分離培養(yǎng)基，才能準(zhǔn)確解析麥曲中的真菌多樣性。另外，在分離培養(yǎng)基中有必要加入去氧膽酸鈉來抑制菌絲的蔓延。純種真菌的鑒定對分離獲得的24株真菌純株進(jìn)行形態(tài)初步鑒定和基于ITS序列的分子鑒定，具體測序結(jié)果見表 綜合平板分離和測序的結(jié)果可以看出，通過大規(guī)模的系統(tǒng)分離培養(yǎng)方法確定麥曲中的優(yōu)勢真菌為：傘枝犁頭霉(Absidia corymbifera—like)，米曲霉(Aspergillus oryzae)、煙曲霉(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉()、小孢根霉(Rhizopus microsporus)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)、季氏畢赤氏酵母(pichia guilliermondii)和異常畢赤酵母(pichia anomala)，鑒定材料《真菌的鑒定》。本研究分離鑒定出的焦曲霉(Aspergillus ustus)、土曲霉(Aspergillus terreus—like)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、桔青霉(penicillium citrimum)、季氏畢赤酵母、異常畢赤酵母，小孢根霉，多變根毛霉(Rhizomucor variabilis)、球毛殼霉(Chaetomium globasum)、阿姆斯特丹散囊菌(Eurotium amstelodami)和phaeosphaeria fuckelii等菌株在以前的研究結(jié)果中均未出現(xiàn)。所用的麥曲是人工腳踏成型，此前公司采用培養(yǎng)法對機(jī)制麥曲中的真菌進(jìn)行過研究，機(jī)制麥曲中的優(yōu)勢真菌為傘枝犁頭霉(Absidia corymbifera)、米根霉(Rhizopus oryzae)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、煙曲霉(Aspergillus fumigatus)。除了米根霉以外，其余優(yōu)勢真菌與本文的研究結(jié)果一致。人工腳踏成型麥曲中的真菌種類比機(jī)械壓制成型
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