真菌培養(yǎng)及鑒定-wenkub
2024-10-29 06 本頁(yè)面
【正文】 raud agar)上，置室溫或37℃培養(yǎng)1～3周。第一篇：真菌培養(yǎng)及鑒定真菌培養(yǎng)及鑒定、真菌培養(yǎng)及鑒定 體表真菌的標(biāo)本有毛發(fā)、皮屑、甲屑、痂等，標(biāo)本在分離前常先用75%的乙醇消毒，真菌培養(yǎng)及鑒定。必要時(shí)可行小培養(yǎng)協(xié)助鑒定。下面我們就從培養(yǎng)基的選擇、培養(yǎng)時(shí)間、菌種鑒定三方面來(lái)了解一下灰指甲的真菌培養(yǎng)法。各種真菌的生長(zhǎng)速度不同，所以報(bào)告的時(shí)間也不同。(1)絲狀真菌：包括皮膚癬菌和霉菌，根據(jù)菌落形成所需要的時(shí)間，在不同條件下生長(zhǎng)的情況，菌落表面及背面的形態(tài)、色素，培養(yǎng)基中有無(wú)色素，培養(yǎng)物用乳酚棉藍(lán)染色后鏡檢找特征性標(biāo)志結(jié)構(gòu)。)絲狀真菌：主要是形態(tài)學(xué)的鑒定，如直接涂片觀察，小培養(yǎng)顯微鏡鑒定，誘導(dǎo)形態(tài)觀察(25℃與35℃下雙相型真菌的特征孢子及菌絲的產(chǎn)生和兩種菌落的形成及腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基，KT培養(yǎng)基，KelleyAgar培養(yǎng)基轉(zhuǎn)相誘導(dǎo)，另外常用的還有皮膚癬菌VB1生長(zhǎng)刺激，吳氏熒光檢查，毛發(fā)穿孔試驗(yàn)及在特殊情況下進(jìn)行的一些生化鑒定等。此外，還有血清學(xué)玻片凝集試驗(yàn)，動(dòng)物致病性實(shí)驗(yàn)，分子生物學(xué)鑒定：如核酸雜交，DNA探針雜交，pCR擴(kuò)增序列分析，pCRSSCp單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析，pCRRFLp限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析，pCRRApD隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性分析，pFCG脈沖電泳核型分析等。對(duì)于絲狀真菌及雙相型真菌，可采用小培養(yǎng)法，快速簡(jiǎn)便易于觀察。大多數(shù)人知道細(xì)菌可以導(dǎo)致疾病，并習(xí)慣用“有病菌”或“有細(xì)菌”來(lái)形容一個(gè)臟的環(huán)境或物品。細(xì)菌僅有原始核結(jié)構(gòu)，無(wú)核膜和核仁，細(xì)胞器很少，屬于原核細(xì)胞型微生物。工業(yè)上許多酶制劑、農(nóng)業(yè)上的飼料發(fā)酵都離不開(kāi)真菌。真菌還可引起動(dòng)、植物和人類(lèi)的多種疾病，在人類(lèi)主要有三種類(lèi)型：①真菌感染。體呈絲狀，叢生，可產(chǎn)生多種形式的孢子。但也能引起工業(yè)原料和產(chǎn)品以及農(nóng)林產(chǎn)品發(fā)霉變質(zhì)。通常以出芽繁殖。是重要的發(fā)酵素，能分解碳水化合物產(chǎn)生酒精和二氧化碳等。細(xì)胞呈圓形、卵形或橢圓形。菌絲體紫紅色。近年來(lái)的研究表明，內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生與宿主相同或相似的代謝產(chǎn)物，對(duì)相應(yīng)的內(nèi)生真菌及其代謝產(chǎn)物的研究已經(jīng)成為尋找藥物來(lái)源的一種新途經(jīng)。在所試條件下共計(jì)分離得到70株內(nèi)生真菌，主要分布在樹(shù)葉(%)和皮部(%)，根部(%)和種子(%)中的內(nèi)生真菌數(shù)目較少，在木質(zhì)部未分離到內(nèi)生真菌。選取不同形態(tài)類(lèi)群中的代表菌株，擴(kuò)增并測(cè)定其rDNAITS區(qū)段的DNA序列，結(jié)合內(nèi)生真菌與GenBank中參考菌株堿基序列相似性和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析，確定其分類(lèi)地位，鑒定材料《真菌的分子鑒定》。在本研究中，共分離得到18株擬莖點(diǎn)霉屬(phomopsis)菌株，%，為優(yōu)勢(shì)菌群，對(duì)其進(jìn)行了基于ITS區(qū)段的系統(tǒng)發(fā)育分析。近年來(lái)的研究表明，內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生與宿主相同或相似的代謝產(chǎn)物，對(duì)相應(yīng)的內(nèi)生真菌及其代謝產(chǎn)物的研究已經(jīng)成為尋找藥物來(lái)源的一種新途經(jīng)。在所試條件下共計(jì)分離得到70株內(nèi)生真菌，主要分布在樹(shù)葉(%)和皮部(%)，根部(%)和種子(%)中的內(nèi)生真菌數(shù)目較少，在木質(zhì)部未分離到內(nèi)生真菌。選取不同形態(tài)類(lèi)群中的代表菌株，擴(kuò)增并測(cè)定其rDNAITS區(qū)段的DNA序列，結(jié)合內(nèi)生真菌與GenBank中參考菌株堿基序列相似性和系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析，確定其分類(lèi)地位。在本研究中，共分離得到18株擬莖點(diǎn)霉屬(phomopsis)菌株，%，為優(yōu)勢(shì)菌群，對(duì)其進(jìn)行了基于ITS區(qū)段的系統(tǒng)發(fā)育分析。分析微生物在麥曲中的區(qū)系分布和其中微生物菌群的系統(tǒng)發(fā)育，對(duì)于理順麥曲中的微生物與產(chǎn)地環(huán)境的相互關(guān)系、建立麥曲微生物生態(tài)數(shù)據(jù)庫(kù)和麥曲品質(zhì)的分子評(píng)價(jià)指標(biāo)，具有重要的指導(dǎo)意義。不同培養(yǎng)基的麥曲真菌分布根據(jù)菌落大孝形態(tài)和顏色等表型特征進(jìn)行初步區(qū)分，共得到24株純種菌株。而近似于微生物最原始生存環(huán)境的WQE培養(yǎng)基分離得到的真菌種類(lèi)，要比預(yù)期的少。另外，在分離培養(yǎng)基中有必要加入去氧膽酸鈉來(lái)抑制菌絲的蔓延。除了米根霉以外，其余優(yōu)勢(shì)真菌與本文的研究結(jié)果一致。本文所得到的序列用菌名加代號(hào)表示，來(lái)自于GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)的序列用菌名加登錄號(hào)表示。能力目標(biāo)：運(yùn)用制作及觀察青霉、曲霉臨時(shí)裝片的技能。二、教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)教學(xué)重點(diǎn)描述真菌的主要特征。師:做好了就別再動(dòng)了,下課后帶走,明天你就可以看到美麗的孢子印了。師:哦,教室里采不到蘑菇了,那么我們想收獲蘑菇,還是去一下蘑菇大棚吧。毒蘑菇過(guò)渡：是不是所有的蘑菇都可以食用呢？ 生:毒蘑菇不能食用師點(diǎn)擊圖片：這是一些毒蘑菇。）過(guò)渡師展示帶來(lái)的發(fā)霉的橘子和面包:老師還給大家?guī)Я诵╅僮雍兔姘?但沒(méi)保存好。師趁機(jī)介紹長(zhǎng)在橘子上的是青霉，長(zhǎng)在面包上的是曲霉。聯(lián)系前面我們做過(guò)的洋蔥表皮細(xì)胞裝片,我們?cè)撛趺粗谱髅咕b片呢? 生討論交流:擦片、滴水、取材(用牙簽挑取)、蓋片。師分別將一個(gè)制作效果好的裝片置于顯微投影儀上展示。另一組學(xué)生指出自己的發(fā)現(xiàn)：曲霉的菌絲是多細(xì)胞的。（如果學(xué)生制作的裝片效果好，應(yīng)該能看出青霉和曲霉的孢子排列的形狀不同，學(xué)生指出后，教師可
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