【文章內(nèi)容簡介】 ，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設(shè)計多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：動脈血氣標(biāo)本采集方法一、抗凝劑的配制首先推薦使用市場上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，%NS50ml+肝素鈉針劑2支（12500U）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲藏。每抽血氣前，用2ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤整個針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用?？鼓齽┥倭藭寡耗氯獨夥治鰞x的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會影響血氣和離子的檢測結(jié)果，大劑量的抗凝劑會嚴重使離子鈣偏低，誤導(dǎo)臨床。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動脈，次選股動脈小兒：首選用顳淺動脈或頭皮小動脈，嚴格消毒后，用肝素化的5號頭皮針連接2ml注射器，待動脈血流至注射器乳頭時，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針?biāo)芰宪浌苁孜矁啥耍ǎ?，然后拔出針頭立即混勻送檢。用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動脈，小嬰兒可用顳淺動脈取血，取完血一定要密封。因技術(shù)條件限制，不能反復(fù)動脈穿刺時，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細管采取動脈化毛細血管的血亦可。動脈化毛細血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達到動脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細管吸?。ńㄗh采用廠家配套提供的專用毛細管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢。未充分動脈化的毛細管血的PO2偏低，對PH、PCO2和HCO3—的測定結(jié)果影響不明顯。三、采血后處理采血后針尖或毛細吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進入，并立即充分混勻達到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細胞代謝耗氧，使PO2和PH值下降PCO2升高。若不能立即測定，應(yīng)將血氣標(biāo)本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測時間也不宜超過2小時。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：VC影響血糖尿糖檢測解放軍總醫(yī)院檢驗中心主任叢玉隆指出，維生素c（vc）可以還原尿糖檢測試劑中的酶，會導(dǎo)致尿糖檢測的結(jié)果失真，對于糖尿病患者來說，服用維生素要謹慎。第一次遇到尿糖檢測失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗科的檢驗員。一天晚上急診科一患者化驗的結(jié)果是血糖8毫克。急診醫(yī)生一看檢驗報告馬上產(chǎn)生疑問：怎么會是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個人早就死了。于是檢驗科再次對病人的血樣化驗，結(jié)果還是8毫克，叢玉隆仔細檢查了檢驗程序和檢驗設(shè)備，都沒發(fā)現(xiàn)問題，但檢驗結(jié)果確實與病人實際病情不符。叢玉隆再仔細檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時，患者正輸著vc，結(jié)果終于弄明白了，原來是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗結(jié)果。vc的影響到底有多大？叢玉隆再次做了試驗，一組人一天吃3片vc（每片100毫克），第二天檢測結(jié)果是每毫升尿含vc30毫克。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。一組人一天吃了9片vc，第二天尿含vc是300毫克。叢玉隆說，假如一個糖尿病人，沒吃vc以前的尿糖是2個加號，吃了9片vc后，就可能是1個加號，甚至?xí)霈F(xiàn)陰性結(jié)果。叢玉隆進行的另一個實驗證實，給健康人靜脈推注vc2000毫克，然后在不同時間段取尿，30分鐘后尿含vc600多毫克、1小時500多毫克、5小時后含幾十毫克（正常值），說明靜脈使用大劑量vc對糖尿病人的尿糖檢查干擾更大。試驗也證明5個小時以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗結(jié)果。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：血磷測定的參考值參考值：血清磷：～2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：血磷的測定方法血清無機磷的測定方法一般有磷鉬酸法、染料法和酶法。磷鉬酸法是血清中無機磷與鉬酸鹽結(jié)合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍進行比色測定。染料法如孔雀綠直接顯色測定法。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復(fù)性也較差，不能用于常規(guī)檢驗。酶法是一個偶聯(lián)反應(yīng)，參與反應(yīng)的酶有糖原磷酸化酶、葡萄糖磷酸變位酶及葡萄糖6磷酸脫氫酶，反應(yīng)中使NADP+還原成NADPH，形成NADPH在340nm波長下測定其吸光度，該方法不受有機磷酸酯的干擾。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：火焰分光光度法的儀器原始的火焰光度計由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測器組成?，F(xiàn)代的火焰分光光度計的基本框圖（見圖）示意出：試樣溶液經(jīng)霧化后噴入火焰，溶劑在火焰中蒸發(fā)，鹽粒熔融，轉(zhuǎn)化為蒸氣，離解成原子（部分電離），再由火焰高溫激發(fā)發(fā)光，發(fā)射的光經(jīng)切光器調(diào)制，并由單色器（通常是光柵）分光，選擇待測波長譜線，經(jīng)光電轉(zhuǎn)換和電信號放大后檢出。反射鏡起聚光作用。火焰光度法常用的火焰是在大氣恒壓下經(jīng)化學(xué)反應(yīng)而燃燒的。不同的燃料氣體和助燃氣組分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學(xué)火焰能達到的最高溫度和化學(xué)作用性質(zhì)（見表）。這是火焰光度法應(yīng)用中要選擇的關(guān)鍵條件。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：火焰分光光度法的簡史，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。，并使用了參考元素技術(shù)。由于當(dāng)時使用照相方法記錄譜線，致使準(zhǔn)確定量分析工作較為繁瑣。1935年制成第一臺火焰光譜光電直讀光度計，使得火焰光度法應(yīng)用范圍進一步擴大。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：火焰分光光度法的應(yīng)用火焰分光光度法主要用于堿金屬和堿土金屬元素的定量分析。方法簡單迅速，組分影響較小，取樣量小，用一份溶液即可進行多種元素分析，每毫升10微克濃度的鈉溶液也可測定。此法不僅可作為一個光化學(xué)分析方法獨立使用，而且可作為一個有特色的光檢測器，與氣相色譜儀聯(lián)用，或作為一種試樣原子化裝置，用于原子吸收光譜法中。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試血液檢驗復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓標(biāo)本的采集選擇骨髓標(biāo)本的采集選擇骨髓標(biāo)本大部分采用穿刺法吸取。骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個方面考慮：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位應(yīng)淺表、易定位；③應(yīng)避開重要臟器。臨床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、脛骨等處。髂骨后上棘此處骨皮質(zhì)薄，骨髓腔大，進針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試血液檢驗復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓涂片的檢查骨髓涂片的檢查（1）普通光鏡低倍鏡檢驗：判斷骨髓增生程度；估計巨核細胞系統(tǒng)增生情況；觀察涂片邊緣、尾部、骨髓小粒周圍，有無體積較大或成堆分布的異常細胞。（2）油鏡：選擇滿意的片膜段，觀察200～500個細胞，按細胞的種類、發(fā)育階段分別計算，并計算它們各自的百分率；仔細觀察各系統(tǒng)的增生程度和各階段細胞數(shù)量和質(zhì)量的變化。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試血液檢驗復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓象的分析與報告骨髓象的分析與報告包括骨髓有核細胞增生程度、粒細胞與有核紅細胞比例、粒系統(tǒng)細胞改變、紅系統(tǒng)細胞改變、巨核系統(tǒng)細胞改變、淋巴系統(tǒng)細胞改變、單核系統(tǒng)細胞改變和其他血細胞改變。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試綜合知識輔導(dǎo)：均相酶免疫測定均相酶免疫測定：屬于競爭結(jié)合分析方法。①酶增強免疫測定技術(shù)（EMIT）：了解其基本原理，反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量。②克隆酶供體免疫分析：DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶（如βD半乳糖苷酶）分子的兩個片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨均無酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試綜合知識輔導(dǎo)：異相酶免疫測定異相酶免疫測定：又分為液相和固相酶免疫測定。①液相酶免疫測定：其測定靈敏度與放射免疫方法相近，近年有取代放射免疫方法的趨勢。②固相酶免疫測定：如常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）2012年醫(yī)學(xué)檢驗考試生化檢驗輔導(dǎo)：肝硬化的臨床意義肝硬化代償期患者血清ALT可輕度增高或正常，失代償期ALT可持續(xù)升高。膽汁淤積性肝硬化ALT活性較高可與黃疸平行，AST升高不及ALT顯著。肝硬化病變累及線粒體時，多數(shù)AST升高程度超過ALT。2012年醫(yī)學(xué)檢驗基礎(chǔ)知識輔導(dǎo)：尿的方法學(xué)評價尿色和透明度判斷，受主觀因素影響。尿透明度還易受某些鹽類結(jié)晶的影響。臨床應(yīng)用僅作參考2012年醫(yī)學(xué)檢驗基礎(chǔ)知識輔導(dǎo)：尿的質(zhì)量控制，鹽類結(jié)晶析出、尿膽原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰懰?、細菌增殖和腐敗、尿素分解，均可使尿顏色加深、混濁度增高?012年醫(yī)學(xué)檢驗基礎(chǔ)知識輔導(dǎo)：尿的生理性變化（1）代謝產(chǎn)物：生理性影響尿顏色主要是尿色素、尿膽素（URB）、尿膽原（URO）等。（2）飲水及尿量：大量飲水、尿量多則尿色淡；尿色深見于尿量少、飲水少或運動、出汗、水分丟失。（3）藥物的影響：如服用核黃素、呋喃唑酮、痢特靈、黃連素、牛黃、阿的平使尿呈黃色或深黃色；番瀉葉、山道年等使尿呈橙色或橙黃色；酚紅、番瀉葉、蘆薈、氨基匹林、磺胺藥等使尿呈紅色或紅褐色。（4）鹽類結(jié)晶及酸堿度：生理性尿混濁的主要原因是含有較多的鹽類，常見有：①尿酸鹽結(jié)晶：在濃縮的酸性尿遇冷時，可有淡紅色結(jié)晶析出。②磷酸鹽或碳酸鹽結(jié)晶：尿呈堿性或中性時，可析出灰白色結(jié)晶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗免疫檢驗考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)腫瘤壞死因子的生物效應(yīng)：TNF對多種腫瘤細胞均有殺傷或抑制作用，敏感性因腫瘤細胞類型而異；TNF呈劑量依賴性地抑制病毒介導(dǎo)的細胞病變的發(fā)展，對RNA病毒和DNA病毒均有抑制作用；TNF能夠增強T細胞產(chǎn)生以IL2為主的淋巴因子，提高IL2R的表達水平，促進T細胞增殖；還能促進B細胞增殖、分化和產(chǎn)生抗體；TNF有中性粒細胞和單核細胞趨化作用，并使之活化和脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)；TNF可刺激成骨細胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性，誘導(dǎo)成骨細胞吸收骨質(zhì)、使軟骨細胞進行軟骨更新，抑制軟骨形成。2012年醫(yī)學(xué)檢驗免疫檢驗考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究：由于TNF的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能，TNF療法的研究已被許多國家開展。動物實驗和臨床經(jīng)驗表明，TNF對某些腫瘤具有明顯的抑制作用，但副作用大，建立合理的用藥方案及治療措施，可望降低用量，減輕副作用，達到最佳治療效果。2012年醫(yī)學(xué)檢驗血液檢驗輔導(dǎo)：紅細胞鐮變試驗（1）原理：在低氧分壓條件下，HbS轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原狀態(tài)后溶解度降低，從而聚合成短棒狀凝膠使紅細胞變形，呈鐮刀狀。結(jié)果：陰性，無鐮變細胞。（2）臨床意義：陽性見于鐮狀細胞貧血（HbS病），HbBart、HbI病可見少量鐮狀細胞。2012年醫(yī)學(xué)檢驗知識輔導(dǎo)：埃希菌屬的常規(guī)檢驗項目CDC將大腸埃希氏菌O157：H7列為常規(guī)檢測項目EHEC的血清型》50種，最具代表性的是O157：，O157：H7占腸道分離病原菌的第二或第三位，是從血便中分離到的最常見的病原菌，分離率占血便的40%，8三個月O157：H7感染的發(fā)生率最高。且0157是4歲以下兒童急性腎功衰的主要病原菌，所以CDC提出應(yīng)將大腸埃希氏菌0157：H7列為常規(guī)檢測項目。2012年醫(yī)學(xué)檢驗知識輔導(dǎo)：埃希菌屬的腸道感染埃希菌屬的腸道感染：致病性大腸埃希菌有下列五個病原群。（1）腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）：引起霍亂樣腸毒素腹瀉（水瀉）。（2）腸致病型大腸埃希菌（EPEC）：主要引起嬰兒腹瀉。（3）腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：可侵入結(jié)腸黏膜上皮，引起志賀樣腹瀉（粘液膿血便）。（4）腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：又稱產(chǎn)志賀樣毒素（VT）大腸埃