【文章內容簡介】 用提供基本營養(yǎng)物質：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結合蛋白：結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的工具離心機（centrifuge）是實施離心技術的裝置。離心機的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機和分析型離心機。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質的性質，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質在離心場中的行為（可用離心機中的光學系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對分子質量等性質。兩類離心機由于用途不同，故其主要結構也有差異。通常所使用的離心機根據(jù)轉子轉速大小的不同可分為普通離心機、高速離心機和超速離心機三類2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的概況離心技術是利用物體高速旋轉時產(chǎn)生強大的離心力，使置于旋轉體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉子高速旋轉時，當懸浮顆粒密度大于周圍介質密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設計多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內先裝入分離介質（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內，達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預制梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質，常用介質有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質經(jīng)過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質先均勻混合，離心開始后，梯度介質由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質的浮力密度差別進行分離，所用的介質起始密度約等于被分離物質的密度，介質在離心過程中形成密度梯度，被分離物質沉降或上浮到達與之密度相等的介質區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：離心技術的概況離心技術是利用物體高速旋轉時產(chǎn)生強大的離心力，使置于旋轉體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。離心機轉子高速旋轉時，當懸浮顆粒密度大于周圍介質密度時，顆粒離開軸心方向移動，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質的密度時，則顆粒朝向軸心方向移動而發(fā)生漂浮。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設計多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內先裝入分離介質（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內，達到彼此分離的目的。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預制梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質，常用介質有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達與自身密度相等的梯度層，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質經(jīng)過離心后會自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質先均勻混合，離心開始后，梯度介質由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質的浮力密度差別進行分離，所用的介質起始密度約等于被分離物質的密度，介質在離心過程中形成密度梯度，被分離物質沉降或上浮到達與之密度相等的介質區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：動脈血氣標本采集方法一、抗凝劑的配制首先推薦使用市場上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，%NS50ml+肝素鈉針劑2支（12500U）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲藏。每抽血氣前，用2ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤整個針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內的肝素液即可起到抗凝作用?？鼓齽┥倭藭寡耗氯獨夥治鰞x的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會影響血氣和離子的檢測結果，大劑量的抗凝劑會嚴重使離子鈣偏低，誤導臨床。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動脈，次選股動脈小兒：首選用顳淺動脈或頭皮小動脈，嚴格消毒后，用肝素化的5號頭皮針連接2ml注射器，待動脈血流至注射器乳頭時，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針塑料軟管首尾兩端（），然后拔出針頭立即混勻送檢。用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動脈，小嬰兒可用顳淺動脈取血，取完血一定要密封。因技術條件限制，不能反復動脈穿刺時，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細管采取動脈化毛細血管的血亦可。動脈化毛細血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達到動脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細管吸?。ńㄗh采用廠家配套提供的專用毛細管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢。未充分動脈化的毛細管血的PO2偏低，對PH、PCO2和HCO3—的測定結果影響不明顯。三、采血后處理采血后針尖或毛細吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進入，并立即充分混勻達到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細胞代謝耗氧，使PO2和PH值下降PCO2升高。若不能立即測定，應將血氣標本保存在2～8℃容器內，但即使這樣待測時間也不宜超過2小時。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：VC影響血糖尿糖檢測解放軍總醫(yī)院檢驗中心主任叢玉隆指出，維生素c（vc）可以還原尿糖檢測試劑中的酶，會導致尿糖檢測的結果失真，對于糖尿病患者來說，服用維生素要謹慎。第一次遇到尿糖檢測失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗科的檢驗員。一天晚上急診科一患者化驗的結果是血糖8毫克。急診醫(yī)生一看檢驗報告馬上產(chǎn)生疑問：怎么會是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個人早就死了。于是檢驗科再次對病人的血樣化驗，結果還是8毫克，叢玉隆仔細檢查了檢驗程序和檢驗設備，都沒發(fā)現(xiàn)問題，但檢驗結果確實與病人實際病情不符。叢玉隆再仔細檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時，患者正輸著vc，結果終于弄明白了，原來是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗結果。vc的影響到底有多大？叢玉隆再次做了試驗，一組人一天吃3片vc（每片100毫克），第二天檢測結果是每毫升尿含vc30毫克。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。一組人一天吃了9片vc，第二天尿含vc是300毫克。叢玉隆說，假如一個糖尿病人，沒吃vc以前的尿糖是2個加號，吃了9片vc后，就可能是1個加號，甚至會出現(xiàn)陰性結果。叢玉隆進行的另一個實驗證實，給健康人靜脈推注vc2000毫克，然后在不同時間段取尿，30分鐘后尿含vc600多毫克、1小時500多毫克、5小時后含幾十毫克（正常值），說明靜脈使用大劑量vc對糖尿病人的尿糖檢查干擾更大。試驗也證明5個小時以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗結果。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：血磷測定的參考值參考值：血清磷：～2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：血磷的測定方法血清無機磷的測定方法一般有磷鉬酸法、染料法和酶法。磷鉬酸法是血清中無機磷與鉬酸鹽結合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍進行比色測定。染料法如孔雀綠直接顯色測定法。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復性也較差，不能用于常規(guī)檢驗。酶法是一個偶聯(lián)反應，參與反應的酶有糖原磷酸化酶、葡萄糖磷酸變位酶及葡萄糖6磷酸脫氫酶，反應中使NADP+還原成NADPH，形成NADPH在340nm波長下測定其吸光度，該方法不受有機磷酸酯的干擾。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：火焰分光光度法的儀器原始的火焰光度計由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測器組成?，F(xiàn)代的火焰分光光度計的基本框圖（見圖）示意出：試樣溶液經(jīng)霧化后噴入火焰，溶劑在火焰中蒸發(fā)，鹽粒熔融，轉化為蒸氣，離解成原子（部分電離），再由火焰高溫激發(fā)發(fā)光，發(fā)射的光經(jīng)切光器調制，并由單色器（通常是光柵）分光，選擇待測波長譜線，經(jīng)光電轉換和電信號放大后檢出。反射鏡起聚光作用?；鹧婀舛确ǔＳ玫幕鹧媸窃诖髿夂銐合陆?jīng)化學反應而燃燒的。不同的燃料氣體和助燃氣組分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學火焰能達到的最高溫度和化學作用性質（見表）。這是火焰光度法應用中要選擇的關鍵條件。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：火焰分光光度法的簡史，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。，并使用了參考元素技術。由于當時使用照相方法記錄譜線，致使準確定量分析工作較為繁瑣。1935年制成第一臺火焰光譜光電直讀光度計，使得火焰光度法應用范圍進一步擴大。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：火焰分光光度法的應用火焰分光光度法主要用于堿金屬和堿土金屬元素的定量分析。方法簡單迅速，組分影響較小，取樣量小，用一份溶液即可進行多種元素分析，每毫升10微克濃度的鈉溶液也可測定。此法不僅可作為一個光化學分析方法獨立使用，而且可作為一個有特色的光檢測器，與氣相色譜儀聯(lián)用，或作為一種試樣原子化裝置，用于原子吸收光譜法中。2012年醫(yī)學檢驗考試血液檢驗復習輔導：骨髓標本的采集選擇骨髓標本的采集選擇骨髓標本大部分采用穿刺法吸取。骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個方面考慮：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位應淺表、易定位；③應避開重要臟器。臨床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、脛骨等處。髂骨后上棘此處骨皮質薄，骨髓腔大，進針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位。2012年醫(yī)學檢驗考試血液檢驗復習輔導：骨髓涂片的檢查骨髓涂片的檢查（1）普通光鏡低倍鏡檢驗：判斷骨髓增生程度；估計巨核細胞系統(tǒng)增生情況；觀察涂片邊緣、尾部、骨髓小粒周圍，有無體積較大或成堆分布的異常細胞。（2）油鏡：選擇滿意的片膜段，觀察200～500個細胞，按細胞的種類、發(fā)育階段分別計算，并計算它們各自的百分率；仔細觀察各系統(tǒng)的增生程度和各階段細胞數(shù)量和質量的變化。2012年醫(yī)學檢驗考試血液檢驗復習輔導：骨髓象的分析與報告骨髓象的分析與報告包括骨髓有核細胞增生程度、粒細胞與有核紅細胞比例、粒系統(tǒng)細胞改變、紅系統(tǒng)細胞改變、巨核系統(tǒng)細胞改變、淋巴系統(tǒng)細胞改變、單核系統(tǒng)細胞改變和其他血細胞改變。2012年醫(yī)學檢驗考試綜合知識輔導：均相酶免疫測定均相酶免疫測定：屬于競爭結合分析方法。①酶增強免疫測定技術（EMIT）：了解其基本原理，反應后酶活力大小與標本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。②克隆酶供體免疫分析：DNA重組技術可分別合成某種功能酶（如βD半乳糖苷酶）分子的兩個片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨均無酶活性，一定條件下結合形成四聚體方具酶活性。2012年醫(yī)學檢驗考試綜合知識輔導：異相酶免疫測定異相酶免疫測定：又分為液相和固相酶免疫測定。①液相酶免疫測定：其測定靈敏度與放射免疫方法相近，近年有取代放