【文章內(nèi)容簡介】 ? 2. 了解豬群豬瘟抗體監(jiān)測的意義。 ? 二、材料準(zhǔn)備 ? ： OPD、酶標(biāo)板、酶聯(lián)檢測儀、微量加樣器、 tip頭。 ? 2. 藥品：豬瘟病毒、酶標(biāo) SPA、待檢血清、豬瘟陽性血清、豬瘟陰性血清、 0． 01mol／ L。 PBS、封閉液 2mol／ LH2S04溶液、 pH9． 6碳酸鹽緩沖液、 3％ H2O檸檬酸鹽緩沖液。 ? 3. 消毒用品： 5%碘酊 100ml,75%酒精 100ml,棉球或棉簽 30個(gè) (支 )。 ? 4. 工作服：消毒過的工作服、帽、鞋 2套 ? 5. 待檢動(dòng)物：血清 10份 ?三、 內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)化操作要領(lǐng) ? 1. 標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟 ?包被 用碳酸鹽緩沖液稀釋豬瘟病毒抗原至lmg／ mL，以微量加樣器每孔加樣 100uL，置濕盒內(nèi) 37℃ 包被 2～ 3h,以含 0． 05％吐溫的 PBS沖洗酶標(biāo)板，共洗滌 5次，每次 3min。 ?封閉 以微量加樣器在每孔內(nèi)加 1％ PBS封閉液 200uL，置濕盒內(nèi) 37℃ 封閉 3h。 ?洗滌 以含 ％吐溫的 PBS沖洗酶標(biāo)板，共洗滌 5次，每次 3min。 ?加待檢血清 以微量加樣器在每孔內(nèi)加100uLPBS，然后在酶標(biāo)板的第 1孔加 100uL待檢血清，以微量加樣器反復(fù)吹吸幾次混勻后，吸 100uL加至第 2孔，依次倍比稀釋至第 12孔，剩余的 100uL棄去，置濕盒內(nèi)37℃ 作用 2h. ?洗滌 以含 ％吐溫的 PBS沖洗酶標(biāo)板，共洗滌 5次，每次 3min。 ?加酶標(biāo) SPA 以 PBS將酶標(biāo) SPA稀釋至工作濃度，以微量加樣器每孔加 100uL，置濕盒內(nèi)37℃ 作用 2h。 ?洗滌 以含 0． 05％吐溫的 PBS沖洗酶標(biāo)板，共洗滌 5次，每次 3min。 ?加底物顯色 取 10mL檸檬酸鹽緩沖液，加OPD4mg和 3％過氧化氫 100uL，每孔加50ul底物重置濕盒內(nèi) 37℃ ,避光顯色 10min。 ?終止反應(yīng) 加 2mol／ L 硫酸溶液終止反應(yīng)每孔 100uL。 ? ?以酶標(biāo)儀檢測樣品的 A490，檢測之前，先以空白孔調(diào)零，當(dāng) P／ N≥2． 1即判為陽性。 ?注意：每塊 ELISA均需在最后一排的后 3孔設(shè)立陽性對照、陰性對照和空白對照。 ?四、考核標(biāo)準(zhǔn) ?優(yōu)秀 能熟練掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作，準(zhǔn)確判定結(jié)果為豬瘟者為優(yōu)秀。 ?良好 能熟練掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作，結(jié)果判定的操作者為良好。 ?及格 能熟練掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作，結(jié)果判定不熟練者為及格。 ?不及格 不能熟練掌握酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作者為不及格。 ?技能操作七 巴氏桿菌病的常規(guī)微生物學(xué)診斷 ?一、目的要求 ?掌握巴氏桿菌病的基本微生物學(xué)診斷方法。 ? 二、材料準(zhǔn)備 ? 1. 器械：鑷子 2把，手術(shù)片 3片，手術(shù)刀柄 2把，手術(shù)剪刀 2把，骨剪 2把，塑料杯 2個(gè)，酒精燈 2盞，酒精棉球 20個(gè)，解剖車 1部，載玻片、試管、棉簽、平皿、顯微鏡、染色缸， ? 2. 藥品：瑞氏染液各一套。 ? 3. 消毒用品： 5%碘酊 100ml,75%酒精 100ml,棉球或棉簽 30個(gè) (支 )。 ? 4. 工作服：消毒過的工作服、帽、鞋 2套，一次手套若干。 ? 5. 待檢動(dòng)物：禽出敗可疑病雞 4只。 ? 三、 內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)化操作要領(lǐng) ? 1．病原菌抹片制備 ? 考生著裝整齊 → 無菌操作剖檢病雞 → 采集新鮮的待檢實(shí)質(zhì)器官：肝、脾、腎、肺臟等器官和心血等材料 → 取病料涂數(shù)片 → 固定 → 進(jìn)行瑞氏染色 →然后鏡檢。 ? ? 考生著裝整齊 → 右手握鏡臂，左手托鏡座 → 取至操作臺 → 開電源、調(diào)光、調(diào)焦、低高倍鏡正確使用，玻片正確取放 → 按一定順序檢查玻片上的樣本 → 據(jù)檢查結(jié)果，口述細(xì)菌的形態(tài)及染色特點(diǎn) →關(guān)電源，載物臺、集光器調(diào)至最低點(diǎn) → 物鏡旋出觀察位，放回原處 ?四、考核標(biāo)準(zhǔn) ?優(yōu)秀 能熟練掌握巴氏桿菌病病料抹片、鏡檢的方法，正確描述病原菌的形態(tài)及染色特點(diǎn)者為優(yōu)秀。 ?良好 能熟練掌握巴氏桿菌病病料抹片、鏡檢的方法，很好描述病原菌的形態(tài)及染色特點(diǎn)者為良好。 ?及格 能基本掌握巴氏桿菌病病料抹片、鏡檢的方法，較好描述病原菌的形態(tài)及染色特點(diǎn)者為及格。 ?不及格 不能掌握巴氏桿菌病病料抹片、鏡檢的方法，描述病原菌的形態(tài)及染色特點(diǎn)不正確者為不及格。 ?技能操作八 重大疫病防控技術(shù) ?一、目的要求 ?通過對口蹄疫撲滅的演習(xí)，掌握撲滅畜禽疫病的一般措施 ? 二、材料制備 ? 1. 器械：噴霧器（各種類型）、鐵鏟、鋤頭，冰壺， 20ml金屬注射器 2把、鑷子 2把、 12號或 13號短針頭 20支、 16號針頭 15支、 9號針頭 15支、針盒 1個(gè)。注射器、鑷子、針頭放入針盒煮沸消毒 20分鐘，傾干水備用。 ? 2. 藥品：生石灰，口蹄疫疫苗。 ? 3. 消毒用品： 5%碘酊 100ml,75%酒精 100ml,棉球或棉簽 30個(gè) (支 )。 ? 4. 工作服：消毒過的工作服、帽、鞋 2套，一次手套若干。 ?三、內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)化操作要領(lǐng) ? 1．疫情報(bào)告 ?迅速報(bào)告疫情，進(jìn)行早期診斷，及時(shí)采取防疫措施，是撲滅口蹄疫的關(guān)鍵問題之一。當(dāng)基層（農(nóng)牧場）防疫員或獸醫(yī)，發(fā)現(xiàn)疑似口蹄疫患病畜禽后，應(yīng)立即逐級向縣防疫指揮部報(bào)告，同時(shí)對患病畜禽進(jìn)行隔離、消毒，派專人看管。上級指揮部接到疫情報(bào)告后，應(yīng)迅速派獸醫(yī)進(jìn)行診斷并鑒定血清型。 ?當(dāng)確定為口蹄疫時(shí)，要立即劃定疫區(qū)并加以封鎖，同時(shí)采取具體的防疫措施，在 24小時(shí)內(nèi)逐級上報(bào)疫情，同時(shí)向周圍相鄰地區(qū)通報(bào)疫情，以便采取聯(lián)防措施。 ? 2．劃分疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū) ? 為疫區(qū)內(nèi)飼養(yǎng)和放牧病畜的廄舍、運(yùn)動(dòng)場或某塊草場、飲水地。 ? 疫區(qū) 為口蹄疫正在流行的地區(qū)，也是需要封鎖的地區(qū)。除患病畜禽所在的牧場、自然村外，還包括患病畜禽于發(fā)病前（在該病的最長潛伏期）后放牧、飲水、使役及活動(dòng)過的地區(qū)。 ? 受威脅區(qū) 為疫區(qū)周圍 10～ 20公里范圍內(nèi)的地區(qū)。常包括鄰近地區(qū)的集市、城鎮(zhèn)和較大的居民點(diǎn)。 ? 3．封鎖 ?執(zhí)行封鎖時(shí)，應(yīng)遵循“早、快、嚴(yán)、小”的原則，即早期封鎖，行動(dòng)要果斷迅速，封鎖要嚴(yán)密，范圍不宜過大。 ? 疫區(qū)要封死 疫點(diǎn)周圍若無墻籬，應(yīng)用樹枝或秸稈嚴(yán)密地圍起來，附近的道路均應(yīng)切斷，嚴(yán)禁人、畜進(jìn)出和車輛通過。 ? 疫區(qū)要封嚴(yán) 首先于疫區(qū)的四周設(shè)立標(biāo)牌，在進(jìn)入疫區(qū)的道路上標(biāo)明繞行路線，嚴(yán)禁人員進(jìn)出疫區(qū)，在封鎖區(qū)的交通要道路口，應(yīng)設(shè)置消毒站，派專人晝夜輪流站崗，監(jiān)督執(zhí)行封鎖措施。對必須出入疫區(qū)的工作人員和車輛必須經(jīng)過嚴(yán)格消毒。疫區(qū)內(nèi)各種易感畜禽及其產(chǎn)品和飼料、飼草，一律不準(zhǔn)運(yùn)出。 ?在封鎖區(qū)內(nèi)停止一切集會、集市貿(mào)易，以及畜禽及其產(chǎn)品的收購和運(yùn)轉(zhuǎn)。在疫區(qū)內(nèi)上學(xué)的學(xué)生或寄宿或暫時(shí)安排在非疫區(qū)學(xué)校上學(xué)。 ? 4．隔離 ? 一旦發(fā)現(xiàn)患病畜禽應(yīng)立即于固定專圈隔離，并派專人看管。必要時(shí)經(jīng)報(bào)請指揮部同意，予以急宰，但體內(nèi)外的廢棄物應(yīng)徹底消毒處理，防止散毒。并隨時(shí)對污染的環(huán)境消毒。 ? 與患病