市場營銷第七節(jié)抗體分子的改造和基因工程(編輯修改稿)
2025-03-22 18:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 T細胞表面抗原 CD4是愛滋病病毒（ human immunodeficiency virus， HIV）的受體，在免疫預(yù)防和免疫治療方面，免疫粘連素可能會提供一個新的途徑。 ? 將 Ig的 Fc段與 CD4形成的重組分子，可以中和 HIV，但只是簡單地結(jié)合會引起具 Fc受體細胞的感染，而在體內(nèi)具有 Fc受體的細胞相應(yīng)是多的，為此只有用定點突變或其他方法改變 Fc段，使之不與 Fc受體結(jié)合，便可有效地防治愛滋病。 六、抗體基因文庫的構(gòu)建和基因表達篩選的表面呈現(xiàn)技術(shù) ? 1985年 Smith將一基因片段克隆到載體噬菌體 fdtet的基因 Ⅲ （ g3）上，發(fā)現(xiàn)該基因所表達的蛋白與噬菌體基因 Ⅲ 表達的蛋白結(jié)合在一起呈現(xiàn)到噬菌體表面。這種表達的融合蛋白仍保留抗原特異性和生物活性，可通過相應(yīng)抗原進行檢測。 ? 這樣我們不僅可以利用噬菌體來構(gòu)建基因文庫，而且可以獲得表達性的基因文庫，無疑對高效率地篩選和富集目的基因提供了極大的方便。 ? 現(xiàn)在這一技術(shù)已被廣泛地用于抗體基因文庫， cDNA文庫、隨機多肽基因文庫和突變基因文庫的構(gòu)建和篩選等諸多方面。 ? 絲狀噬菌體表面呈現(xiàn)技術(shù)以絲狀噬菌體為表達載體，目的基因插入到噬菌體外殼蛋白基因內(nèi)，其天達產(chǎn)物呈現(xiàn)在噬菌體表面。 Ff絲狀噬菌體 ? Ff絲狀噬菌體呈柔性長絲狀，直徑約為 ,野生型體長約為 900nm。其基因組是一單鏈環(huán)狀 DNA，全序列已經(jīng)測也，約含 6000多個核苷酸，編碼 10種蛋白質(zhì)。其中有 5種蛋白組成外殼蛋白，基因 Ⅷ（ g8）在野生型噬菌體中約有 2700～ 3000個考貝，它所編碼的 gp8蛋白是外殼蛋白的主要成分。它圍繞基因組 DNA以螺旋對稱的排列構(gòu)成圓管形的噬菌體外殼。除 gp8外，不有 4種少量的外殼蛋白： gpgp gp7和 gp9，分別由基因 Ⅲ 、 Ⅵ 、 Ⅶ 、 Ⅸ 編碼，它們各有 5個拷貝。 ? 目的基因表達的蛋白如若想在噬菌體表面呈現(xiàn)，就必須插在這 5種外殼的其中這一處。實驗表明，在 gp gp gp9中插入外源蛋白，都會影響其構(gòu)成外殼蛋白的功能，而在 gp8和 gp3的 N端插入外源蛋白后，形成的融合蛋白既可在噬菌體表面呈現(xiàn)，也不影響噬菌體的完整性和穩(wěn)定性。 ? 成熟的 gp8含有 50個氨基酸，從構(gòu)成外殼的功能來看可分為 4個部分： （ 1） C端 15個氨基酸偏堿性，與 DNA相結(jié)合，構(gòu)成外殼的內(nèi)壁，在此處的突變將影響與 DNA的相互作用。 （ 2） 25～ 35位肽段具有高度的疏水性，借此特性分子間相互聚合，形成固牢的外殼。這段肽鏈的改變將會影響噬菌體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。 （ 3）從第 6位的脯氨酸到 C末端是連續(xù)的 α 螺旋結(jié)構(gòu)，6～ 24位的螺旋肽段外露，在外殼上排列緊密，占據(jù)了噬菌體的大部分表面。如有稍大肽段插入，將會影響外殼的穩(wěn)定性。 （ 4） N端 1～ 5位的氨基酸序列是丙氨酸 谷氨酸
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