培養(yǎng)條件決定由戊糖乳桿菌lps26生產(chǎn)的兩種細(xì)胞外多糖的(編輯修改稿)
2025-03-21 03:40 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 pH 為進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)基成分，添加不同碳源進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 1. 菌株和培養(yǎng)基條件 ?材料和方法 2. 對(duì)細(xì)胞表面進(jìn)行化學(xué)處理 每 10ml樣品過(guò)夜培養(yǎng)后以 5ml以下任何一種溶液重懸處理： ? 30％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的十二烷基磺酸鈉于 45176。 C下處理 30min ? NaOH于 20176。 C處理 30min ? 蛋白酶 K（ ）于 50176。 C處理 30min ?材料和方法 3. EPS的分離純化 在前人方法上進(jìn)行改進(jìn)如下： ① 10ml樣品以 30W 1Hz超聲波處理了 10min ② 用 10％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的三氯乙酸攪拌處理 30分鐘 ③ 4℃ 10000g離心 10min以去除細(xì)胞核蛋白 ④ 以 2倍體積的酒精沉淀過(guò)夜 ，重溶于 1ml蒸餾水中 ⑤ 4℃ 中透析 48h，期間每 12h換水一次 ⑥ 純凈的 EPS被凍干以便于進(jìn)行進(jìn)一步定量和成分分析 ?材料和方法 4. EPS的定量 對(duì)含 EPS的樣品進(jìn)行高壓液相色譜 (HPLC)系統(tǒng)進(jìn)行過(guò)濾層析 (SEC) ，組分用一個(gè)以 TSKGel precolumn柱保護(hù)的 TSKGel G5000 PWXL柱收集。 HPLC條件如下： ?流動(dòng)相是 NaNO3 ?柱溫是 40℃ ?流速是 ?進(jìn)樣量是 50ul ?材料和方法 5. 單糖的分析 存在兩種 EPS (EPS A and EPS B) ① 分離得到的 EPS蒸餾水透析 48h以去除來(lái)自流動(dòng)相的 NaNO3然后將其凍干 ② 依靠根據(jù) alditol acetate方法進(jìn)行的氣相色譜來(lái)測(cè)定多糖成分 ③ 樣品以丙酮（ 1ul對(duì)應(yīng)每 ug EPS）溶解 ④ 通過(guò)與 HewlettPackard 5972選擇性質(zhì)量檢測(cè)器連接的 Series II HewlettPackard 5890儀和按流注射模式操作的一根石英毛細(xì)管（ mm by 30 m。 SPTM 2330）進(jìn)行分析 ⑤ 烤箱的溫度保持在 220℃ ?材料和方法 6. 發(fā)酵條件 ?所有的發(fā)酵實(shí)驗(yàn)都是在一個(gè) 750ml的含葡萄糖（ 20g/L） 的 SDM培養(yǎng)基中進(jìn)行的 ?以 30176。 C過(guò)夜培養(yǎng)的培養(yǎng)物按 2％體積分?jǐn)?shù)接種 ?通過(guò)一個(gè) InPro 3000/225探針進(jìn)行測(cè)量后自動(dòng)補(bǔ)加 NH4OH來(lái)控制 pH ?轉(zhuǎn)速為 150rpm ?連續(xù)發(fā)酵 ：當(dāng)菌體達(dá)到指數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，補(bǔ)加新鮮的培養(yǎng)基使之開(kāi)始從最低稀釋度下進(jìn)行發(fā)酵 ?分別對(duì) 多種碳源 （葡萄糖、乳糖、果糖和甘露醇）， 不同糖濃度 （ 5，20， 30和 40g/L）， 不同溫度 （ 20， 25和 30176。 C）以及 不同 pH水平（ ，）進(jìn)行了實(shí)驗(yàn) ?對(duì)細(xì)菌的生長(zhǎng)情況（以 CUF/ml表示）， pH（未控制 pH培養(yǎng)物）和產(chǎn)物 EPS的量進(jìn)行了測(cè)定， HPLC對(duì)糖和有機(jī)酸進(jìn)行檢測(cè) ?材料和方法 7. 動(dòng)力學(xué)參數(shù) ?最大生長(zhǎng)率 μmax＝〔 ln（ X1X0） /（ t1－ t0）〕 ，其中X1和 X0是 CFU/ml的數(shù)， t0和 t1是對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期起止時(shí)間 ?EPS產(chǎn)率 (YEPS)以每克糖產(chǎn)生的 EPS毫克數(shù)表示 ?單位體積產(chǎn)率 (Pv)以每小時(shí)每升培養(yǎng)液中產(chǎn)生的 EPS毫克數(shù)表示 ?材料和方法 8. 以牛奶進(jìn)行培養(yǎng) ?在商品 UHT培養(yǎng)基添加了 2％的脫脂牛奶粉末作為兩種菌的培養(yǎng)基 ?兩種菌分別在 MRS和 M17培養(yǎng)基上過(guò)夜培養(yǎng)，以它們作為接種體。在 25176。 C下培養(yǎng) 72小時(shí)后每毫升戊糖乳酸桿菌LPS26長(zhǎng)出了 2 107個(gè)菌落，乳酸乳球菌乳酸亞種IPLA947則長(zhǎng)出了 106個(gè) ?材料和方法 9. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 ?數(shù)據(jù)依靠電腦軟件進(jìn)行了差異分析和最小差異意義監(jiān)測(cè)分析驗(yàn)證 ,結(jié)論為極為顯著（ P） 圖 L. pentosus LPS26產(chǎn)生的 EPS ? 分析顯示存在分別對(duì)應(yīng)兩個(gè)峰的兩種多聚物，一種大分子量（ highMw）多聚物（ EPS A），分子量 106 Da，另一種小分子量多聚物（ EPS B)，分子量 104Da。 ?實(shí)驗(yàn)結(jié)果－－ EPS的組成 ? 氣相色譜 質(zhì)譜分析顯示兩種 EPS的單糖組成是不同的。 EPS
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