11dna重組技術的基本工具_2(編輯修改稿)
2025-03-17 16:57 本頁面
【文章內容簡介】 末端黏合起來，這樣就形成了重組的 DNA分子了 ? 實際還不夠 ,還需要 DNA連接酶進行連接。 一種限制酶只能識別和切斷特定的核苷酸序列，這是由限制酶的性質（ 專一性或特異性 ）決定的。 中軸線 思考：①限制酶所識別的序列有什么特點？ 限制酶所識別的序列，都可以找到一條中心軸線，中心軸線兩側的雙鏈 DNA上的 堿基是旋轉對稱的 。 ②限制酶在 DNA的任何部位都能將 DNA切開嗎？ 問題探討： ①限制酶從哪里尋找？ 提示：聯(lián)想以前學過的內容 ── 噬菌體侵染細菌的實驗，進而認識細菌等單細胞生物容易受到自然界外源 DNA的入侵。那么這類原核生物之所以長期進化而不絕滅，有何保護機制？ 原核生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細菌的一種防御性工具，當外源 DNA侵入時，會利用限制酶將外源 DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源 DNA、使之失效，從而達到保護自身的目的。 ②迄今為止，基因工程中使用的限制酶絕大部分都是從細菌或霉菌中提取出來的，聯(lián)系你已有的知識，想一想，為什么細菌中限制酶不剪切細菌本身的 DNA？ 是因為微生物在長期進化過程中，含有某種限制酶的細胞， 其 DNA分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列 ， 或者通過甲基化酶將甲基轉移到所識別序列的堿基上 ，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的 DNA被切斷，并且可以防止外源 DNA的入侵． 將切下來的 DNA片段拼接成新的 DNA分子 , 是靠DNA連接酶來完成的。 1967年，世界上幾個實驗室?guī)缀跬瑫r發(fā)現(xiàn)了一種能夠將兩條 DNA鏈連接起來的酶，稱之 DNA連接酶。 根據酶的來源不同，可以將這些酶分為兩類：一種是從大腸桿菌中分離得到的，稱為 。另一類是從 T4噬菌體中分離出來的 ,稱為 T4DNA連接酶 。 這兩類酶都是將雙鏈 DNA片段 “ 縫合”起來， 恢復 被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵 ，但這兩種酶的作用有所差別： DNA片段互補的黏性末端之間連接起來， 不能將雙鏈 DNA片段平末端之間進行連接。而 T4DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈 DNA片段互補的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈 DNA片段的平末端，但連接平末端之間的效率比較低。 （二） “分子縫合針” —— DNA連接酶 種類： 兩類 Ecoli DNA 連接酶 T4 DNA連接酶 磷酸二酯鍵 DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“ 縫合 ”起來，即把梯子兩邊扶手的斷口連接起來，這樣一個
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