免疫原和抗血清制備技術(shù)(編輯修改稿)
2025-03-11 13:44 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 。14WO 34MoO 310H20絡(luò)合物的雙縮脲法蛋白質(zhì)＋ Ca2+堿性加深藍(lán)色已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品? 測(cè)未知分子量： 將樣品在同一凝膠柱上，同一條 件下層析、洗脫、測(cè)保留體積，并查出分子量。? 此法簡(jiǎn)便、樣品用量少，有一定的實(shí)用價(jià)值。凝膠柱保留體積分子量的對(duì)數(shù) 2.理化性質(zhì)鑒定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)① 凝膠層析技術(shù)進(jìn)行測(cè)定垂直電泳聚合成大分子凝膠 ② 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ PAGE）? 有分子篩效應(yīng)、電荷效應(yīng)及濃縮效應(yīng)，能精 確地分離和鑒定高分子物質(zhì)。? PAG的分子篩效應(yīng)測(cè)定蛋白質(zhì)抗原的分子量。? 原理： 雙丙烯酰胺N,Nmethylene bisacrylamide,Bis 丙烯酰胺(acrylamide,Acr) 催化劑 3. 純度鑒定? 方法： 醋酸纖維膜電泳進(jìn)行鑒定。返回? 原理： 蛋白質(zhì)在一定 pH下都帶有電荷，由于 各種蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同、分子量也異，因此 所帶電量也各不相同，在外加直流電場(chǎng)的作 用下，它們泳動(dòng)的速度不同，經(jīng)一段時(shí)間后 即可彼此分開(kāi)，形成電泳譜；從而判斷蛋白 質(zhì)抗原的純度。? 特點(diǎn)： 快速簡(jiǎn)便。 三、半抗原免疫原的制備： 低分子量的化學(xué)物質(zhì)。例如多糖、 多肽、甾族激素、脂肪胺、類(lèi)脂質(zhì)、核苷、 某些藥物 (包括抗生素）及其他化學(xué)物品等。： 蛋白質(zhì)類(lèi) 多肽聚合物 大分子聚合物 載體連接方法 : 載體類(lèi)型 ： 人血清白蛋白、 牛血清白蛋白 、兔 血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白等。： 人工合成的，常見(jiàn)的有多聚賴(lài) 氨酸，其分子量大（可達(dá)十幾萬(wàn)到幾十萬(wàn) )， 這種多聚物和半抗原結(jié)合后，可刺激免疫動(dòng) 物產(chǎn)生高效價(jià)、高親和力的抗體。： 羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮 等，可與半抗原結(jié)合，加入弗氏完全佐劑亦 可誘發(fā)動(dòng)物產(chǎn)生抗體。 半抗原 載體連接方法 1碳化二亞胺法：RNH=CHR’半抗原＋載體蛋白質(zhì) 攪拌 1～ 2h室溫 24h透吸除去未反應(yīng)的半抗原人工免疫原混合混合 半抗原 載體連接方法 2戊二醛法 :半抗原 NH2載體蛋白 NH2半抗原 N=CH(CH2)3CH=NH載體蛋白OHC(CH2)3CHO*戊二醛是常用的帶有兩個(gè)活性基團(tuán)的雙 功能聯(lián)接劑 半抗原 載體連接方法 3氯甲酸異丁脂法：半抗原 COOH載體蛋白 NH2ClCOOCH2CH(CH3)2半抗原 COOCOOCH2CH(CH3)2半抗原 CONH載體蛋白簡(jiǎn)便，用于類(lèi)固醇抗原制備HOCH2CH(CH3)2＋ 半抗原 載體連接方法 4琥珀酸酐法： 用于不含羧基衍生物半抗原制備半抗原 CH2OH CH2CO CH2CO 帶羧基的半抗原琥珀酸衍生物半抗原 CH2OOCCH2CH2COOH返回吡啶再經(jīng)氯甲酸異丁脂法或碳化二亞胺法制備載體半抗原 四、佐劑* 概念： 與抗原同時(shí)或預(yù)先注射于機(jī)體，能增 加機(jī)體免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類(lèi)型的物質(zhì)。 條件： ① 增加抗原的表面積； ② 改變抗原的活性基團(tuán)構(gòu)型； ③ 佐劑與抗原混合能延長(zhǎng)抗原在局部 組織的存留時(shí)間； ④ 可直接或間接激活免疫活性細(xì)胞； ⑤ 無(wú)毒性或無(wú)副作用。 （二）常用佐劑的種類(lèi)和制備：5%硫酸鋁 5%氫氧化鈉 氫氧化鋁沉淀制成懸液即為佐劑強(qiáng)烈攪拌 NS洗二次NS等體積抗原免疫接種 10%硫酸鉀鋁氫氧化鈉校正 pH值至 沉淀 乳狀懸液* 明礬佐劑抗原常用用于肌肉注射，皮下注射 易引起肉芽種和膿腫。
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1