基因工程-2-載體(編輯修改稿)
2025-02-26 10:40 本頁面
【文章內容簡介】 產物 頭部前體 連環(huán) DNA 基因 A的產物在 cos位點切割噬菌體 DNA 包含在外殼中的基因 D的產物 基因 W和 FII的產物組裝蛋白質加完整的尾部 噬菌體的包裝過程 sup細菌 頭部基因 （琥珀突變型） 尾部基因 （琥珀突變型） 轉錄復制 蛋白質合成 組裝尾部所需要的組分 “ 無頭部 ” 的提取物 組裝頭部所需要的組分 “ 無尾部 ” 的提取物 溫育 完整的噬菌體 轉錄復制 蛋白質合成 T4噬菌體的體外包裝 λ DNA的體外包裝 體外包裝的重組 DNA比裸露的 DNA導入受體細胞的效率高 10010000倍 : 用途 :主要用于建立真核生物的基因文庫 ①感染高效 :比質粒高百倍 ②容量大 :可達 15Kb (不得超過原來長度的 105%,不得短于原來長度的 75%) ③ 易操作 ,易保藏 二、柯斯 (COS)載體 (cosmid) ① 帶有抗藥性標記 ② 帶有質粒的復制起始點 ③ 帶有多個限制酶的單一切點 ④ 帶有 λ 噬菌體粘性末端片段 由質粒和 λ粘性末端“尾巴”兩部分組成。 ① 能象 λDNA 一樣體外包裝，并高效導入受體細胞 ② 可以裝載比質?；?λDNA 大得多的外源 DNA片段 cos區(qū) kb+質粒部分 外源 DNA ③ 由于攜帶質粒的選擇標記，便于篩選 ④ 由于質粒上的多種單一酶切位點，便于克隆。 利用柯斯載體載體進行基因克隆的一般程序 三、 M13噬菌體克隆載體 :環(huán)狀 ,單鏈 DNA, 優(yōu)越性 ① 單鏈 DNA噬菌體的復制，是以雙鏈環(huán)形的 DNA為媒介的，這種復制形式的 DNA簡稱 RFDNA； ② 不論是 RFDNA還是 ssDNA都能感染大腸桿菌； ③ 單鏈 DNA噬菌體顆粒的大小，是受其 DNA的大小制約的，不存在包裝限制問題； ④ 可產生含外源片斷的單鏈 DNA分子。 五、噬菌體展示載體 其基本原理是將外源 DNA片段插入噬菌體編碼蛋白基因PⅢ 中，使外源 DNA片段對應的表達產物融
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