細胞工程之核移植技術(shù)與動物克隆(編輯修改稿)
2025-02-12 16:48 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 活 (6) 核移植胚胎移入代孕母畜（即胚胎移植） (5) 重組胚的體外或體內(nèi)培養(yǎng) 克隆羊多莉產(chǎn)生的技術(shù)流程 19 核受體細胞選擇： 去核卵母細胞常常作為核移植的受體細胞。 選擇的生物學(xué)依據(jù) (或為何選擇卵細胞為核移植受體細胞 )： (1) 核受體細胞的準備 20 ? 在卵母細胞的細胞質(zhì)含有某種特定的因子，可以使 移植核中所含有的基因表達程序發(fā)生重新排列。 ? 使已經(jīng)分化了的細胞重新回到發(fā)育過程的原點， 同受精卵一樣開始個體發(fā)育過程。 卵母細胞的來源： ? 用激素對雌體進行超排處理，從輸卵管沖出體內(nèi) 成熟的 MII 卵母細胞。 ? 從屠宰場收集卵巢，吸出濾泡中的卵丘 — 卵母細胞 復(fù)合體 (COCs)，在體外培養(yǎng)成熟后作為受體。 ? 冷凍保存的卵母細胞 (1) 核受體細胞的準備 21 卵母細胞的去核處理： (1) 核受體細胞的準備 22 ? 將 MII卵母細胞置于含細胞松弛素 ()的 培養(yǎng)液處理 1020min. ? 顯微鏡下以持卵管吸住卵母細胞 . ? 以尖端去核針刺穿透明帶，吸出第一極體和極體下 1/3胞質(zhì) . 供體細胞核具備的條件： ? 必須是完整的二倍體，保持有供體動物完整的 基因組 ? 供體細胞核必須能夠在受體細胞質(zhì)的作用下，產(chǎn)生 細胞分化過程的逆轉(zhuǎn)，能重新完成從受精到發(fā)育成 一個正常動物個體的全過程。 (2) 核供體細胞的準備 23 供體細胞類型： ? 胚胎卵裂球細胞 ? 體細胞 ? 胚胎干細胞和胎兒成纖維細胞 (2) 核供體細胞的準備 24 (3) 細胞核移植 ? 胞質(zhì)內(nèi)注射 ? 透明帶下注射 25 胞質(zhì)內(nèi)注射是用一個外徑 5～ 8μm 的注核針 吸取供體核后直接注射進卵母細胞胞質(zhì)內(nèi) 把供體細胞核注射在透明帶與卵母細胞之間的 卵周隙中，核移植后用電刺激進行細胞融合 固定針對準極體部位，將卵母細胞固
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