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動物細胞工程(使用)(編輯修改稿)

2025-03-26 16:15 本頁面
 

【文章內容簡介】 誘導融合 . ? 物理法: 電激 融合 病毒顆粒黏 附細胞表面 細胞膜連接 細胞膜被 病毒顆粒穿通 細胞融合、形成雜種細胞 動物細胞融合技術的應用 ? 細胞融合技術突破了有性雜交的局限,使遠緣雜交成為可能。 ? 利用雜交瘤技術,制備單克隆抗體。 思考討論: 為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活?不滅活行嗎? 因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分子和脂 質分子重新排布,細胞膜打開,細胞發(fā)生融合,不滅 活的話會感染細胞,而不能誘導細胞融合。 ? 人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是 ? – 將抗原注入動物體 ,然后從動物血清中提取抗體 ? 這種方法的缺點是什么 ? – 效率低,產量有限,純度低,動物抗體注入人體可能產生嚴重的過敏反應。 ? 運用已學知識,設想怎樣獲得單一類型的抗體? ? 能否用單個 B淋巴細胞通過克隆形成的細胞群來產生單一類型的抗體呢? B淋巴細胞在體外不能無限增殖。 二:動物細胞融合的成功應用 —— 單克隆抗體的制備 思考 單克隆抗體的制備 — 極富創(chuàng)造性的方案 將能夠產生特定抗體的 B淋巴細胞 和具有無限增殖能力的 骨髓瘤細胞 融合在一起,形成雜交瘤細胞。雜交瘤細胞既能在體外快速生長,又能持續(xù)分泌成分單一的特異性抗體。這種 單一類型的只針對某一特定抗原決定簇的抗體分子,就是單克隆抗體。 ? 米爾斯坦 (阿根廷 )和科勒 (德國 )因此在 1984年獲諾貝爾獎。 雜交 細胞 滅活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤細胞 B淋巴細胞 經(jīng)免疫 的小鼠 提取 雜交瘤 細胞 第一次篩選 用特定的 選 擇性培養(yǎng)基 第二次篩選 能產生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細胞 體外培養(yǎng) 注射到小鼠腹腔 提取單克隆抗體 3)、為何要進行兩次篩選? 4)、如何進行第 2次篩選? 培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上,每孔只有一個雜交瘤細胞。 第 1次篩選得到雜交瘤細胞(多種)。第 2次篩選得到能產生特異性抗體的雜交瘤細胞群。 問題強化: 1)、本過程利用了哪些原理? 免疫原理,細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理 2)、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與 B細胞融合? 這樣融合成的雜交瘤細胞,繼承了雙親細胞的遺傳物質,不僅具有 B細胞分泌抗體的能力,而且還有無限增殖的本領,因而可以獲得大量單克隆抗體 ? 作為診斷試劑 : 在臨床生化診斷、病理組織定位、體內腫瘤的定位等 ,與常規(guī)抗體相比 ,具有 準確、高效、簡易、快速 特點 . ? 用于治療疾病和運載藥物 : ? 主要用于癌癥治療。 ? 生物導彈: 抗癌細胞的單克隆抗體 +放射性同位素 +化學藥物或細胞毒素 。(單克隆抗體:導向。準確找到癌細胞位置,原位殺死癌細胞。) 單克隆抗體的優(yōu)點: 特異性強,靈敏度高,可大量制備。 單克隆抗體的應用 [例題 2] ( 1)在用動物細胞融合技術制備單克隆抗體時, 將抗原注射到小鼠體內,可獲得 (多選 ) ( ) A. T淋巴細胞 B.效應 B淋巴細胞 C.抗體 D.記憶細胞 ( 2)下列關于單克隆抗體的制備和應用的敘述中, 正確的是 (多選 ) ( ) A. B淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合,一般需要滅活的仙臺 病毒或聚乙二醇誘導
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