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正文內(nèi)容

實(shí)驗(yàn)室生物安全基礎(chǔ)知識(shí)概論(編輯修改稿)

2025-01-19 16:00 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ? 7. 國(guó)內(nèi)外新技術(shù)、新方法等的不定期培訓(xùn)。 培訓(xùn)的實(shí)施細(xì)則 ? 1. 理論培訓(xùn) : ? (l) 培訓(xùn)目標(biāo) : ① 熟悉本實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度和操作規(guī)范 ,形成初步的實(shí)驗(yàn)室工作概念。②了解本實(shí)驗(yàn)室從事工作的特點(diǎn)以及各種微生物的危害評(píng)估文件。 ? (2) 培訓(xùn)方式 : 講解。 ? (3) 培訓(xùn)內(nèi)容 : ① 本實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)成文的規(guī)章制度 :生物安全防護(hù)、廢棄物處理、安全制度、衛(wèi)生制度、責(zé)任制度、試劑定購(gòu)制度、儀器使用制度等。②實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)規(guī)章制度和生物安全管理手冊(cè)。 ? (4) 考核 : 由本實(shí)驗(yàn)室三位工作人員組織對(duì)理論學(xué)習(xí)的書(shū)面考試和面試工作。書(shū)面考試注重其掌握的準(zhǔn)確程度 ,面試主要測(cè)試其熟練程度和靈活應(yīng)變能力??己吮竞细裾唔氈匦聦W(xué)習(xí) ,不能進(jìn)入下一步的培訓(xùn)。 培訓(xùn)的實(shí)施細(xì)則 ? 2. 常規(guī)技能培訓(xùn) : (l) 培訓(xùn)目標(biāo) : ① 熟練基本實(shí)驗(yàn)操作和儀器的使用;②初步培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的基本觀念和良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。 (2) 培訓(xùn)方式 : 現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。 (3) 培訓(xùn)內(nèi)容 : ① 衛(wèi)生打掃 : 實(shí)驗(yàn)室地面、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、超凈臺(tái)面、垃圾處理以及打掃得先后順序;工作休息區(qū)的衛(wèi)生打掃。 ②實(shí)驗(yàn)室常規(guī)操作技術(shù) :包括無(wú)菌觀念、平板的制備、劃線分離、顯微鏡觀察、菌落接種、活化、菌體收集、菌(毒)種保存等。 ③ 小型儀器的使用:微量移液器和移液管的使用、 pH計(jì)和試紙、天平、混勻器、微波爐、電磁爐、水浴鍋等。 ④玻璃儀器的清洗 : 量筒、燒杯、三角瓶等。 ⑤大型儀器的使用 : 普通冰箱和低溫冰箱 (存放和處理樣品 )、 高壓鍋、離心機(jī)、液氮罐、生物安全柜、生化培養(yǎng)箱、電泳設(shè)備、超凈臺(tái)、 PCR 儀、搖床、超聲破碎儀、顯微鏡等。 ⑥消毒和滅菌方法 : 物理滅菌(紫外、過(guò)濾、灼燒、高壓 )法、化學(xué)滅菌 (熏蒸、酒精、消毒液 ) 法等。 ⑦辦公用品使用的培訓(xùn) : 電話、傳真機(jī)、電腦、打印機(jī)等。 五、 實(shí)驗(yàn) 室 設(shè)備 ? 選擇設(shè)備時(shí)應(yīng)符合一些基本原則,即: ? 在設(shè)計(jì)上應(yīng)能阻止或限制操作人員與感染性物質(zhì)間的接觸 ? 建筑材料應(yīng)防水、耐腐蝕并符合結(jié)構(gòu)要求 ? 設(shè)備裝配后應(yīng)無(wú)毛刺、銳角以及易松動(dòng)的部件 ? 設(shè)備的設(shè)計(jì)、建造與安裝應(yīng)便于操作、易于維護(hù)、清潔、清除污染和進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)。應(yīng)盡量避免使用玻璃及其他易碎的物品。 ? 需要詳細(xì)咨詢(xún)?cè)O(shè)備的性能和結(jié)構(gòu)規(guī)格,以確保設(shè)施具備必要的安全特性。 基本生物安全設(shè)備 ? 移液輔助器 —— 避免用口吸的方式移液。有不同設(shè)計(jì)的多種產(chǎn)品可供使用。 ? 生物安全柜,在以下情況使用: ? —— 處理感染性物質(zhì);如果使用密封的安全離心杯,并在生物安全柜內(nèi)裝樣、取樣,則這類(lèi)材料可在開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室離心 ? —— 空氣傳播感染的危險(xiǎn)增大時(shí) ? —— 進(jìn)行極有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作時(shí)(包括離心、研磨、混勻、劇烈搖動(dòng)、超聲破碎、打開(kāi)內(nèi)部壓力和周?chē)h(huán)境壓力不同的盛放有感染性物質(zhì)的容器、動(dòng)物鼻腔接種以及從動(dòng)物或卵胚采集感染性組織)。 ? 一次性塑料接種環(huán),也可在生物安全柜內(nèi)使用電加熱接種環(huán),以減少生成氣溶膠。 ? 螺口蓋試管及瓶子。 ? 用于清除感染性材料污染的高壓滅菌器或其他適當(dāng)工具。 ? 一次性巴斯德塑料移液管,盡量避免使用玻璃制品。 ? 在投入使用前,像高壓滅菌器和生物安全柜等設(shè)備必須用正確方法進(jìn)行驗(yàn)收。應(yīng)參照生產(chǎn)商的說(shuō)明書(shū)定期檢測(cè)。 常用設(shè)備的 安全操作注意事項(xiàng)( 1) ? 生物安全柜分為 I、 II、 III個(gè)不同等級(jí)。 ? I級(jí)能夠保護(hù)工作人員和周?chē)h(huán)境,但不能切實(shí)保護(hù)操作樣本,因此生物安全柜 I級(jí)不能用于食品微生物檢驗(yàn)的無(wú)菌操作。 ? II級(jí)生物安全柜在設(shè)計(jì)上不但能提供個(gè)體防護(hù),而且能保護(hù)工作臺(tái)面的物品不受空氣的污染,其有四種不同的類(lèi)型( A A B1和 B2型),可用于操作危險(xiǎn)度II級(jí)和 III級(jí)的感染性物質(zhì)。 ? III級(jí)生物安全柜則可提供更高級(jí)別的生物安全保護(hù)。 常用設(shè)備的 安全操作注意事項(xiàng)( 2) ? 生物安全柜使用要點(diǎn): ( 1)使用者應(yīng)熟知生物安全柜的使用方法和局限性; ( 2)使用前后,工作臺(tái)面和內(nèi)壁要用消毒劑擦拭消毒,生物安全柜風(fēng)機(jī)應(yīng)至少運(yùn)行 5min完成凈化后使用; ( 3)使用中不能打開(kāi)玻璃觀察檔板,應(yīng)穿個(gè)體防護(hù)服; ( 4)生物安全柜內(nèi)盡量少放置器材或標(biāo)本、不能影響后部壓力排風(fēng)系統(tǒng)的氣流循環(huán); ( 5)放入生物安全柜的物品應(yīng)采用 70%酒精來(lái)清除表面污染??梢栽谙緞┙竦拿砩线M(jìn)行實(shí)驗(yàn),以吸收可能濺出的液滴; ( 6)耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及移液適宜于盛放盤(pán)不應(yīng)放在生物安全柜的外面;( 7)在工作臺(tái)面上的操作應(yīng)按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進(jìn)行; ( 8)在生物安全柜內(nèi)所形成的幾乎沒(méi)有微生物的環(huán)境中,應(yīng)避免使用明火,可使用電熱式接種環(huán)滅菌器,最好使用一次性無(wú)菌接種環(huán); ( 9)盡可能避免雙臂頻繁進(jìn)出生物安全柜,否則會(huì)干擾空氣屏障的完全性,影響防護(hù); ( 10)一旦發(fā)生生物學(xué)危害物品溢出,應(yīng)在生物安全柜運(yùn)行狀態(tài)下清理,使用有效的消毒劑,盡可能減少氣溶膠,所有接觸溢出的物品都要進(jìn)行消毒或高壓滅菌。 ( 11)每年應(yīng)對(duì)生物安全防護(hù)效果進(jìn)行測(cè)試,定期維護(hù)。 常用設(shè)備的 安全操作注意事項(xiàng)( 3) ? 離心機(jī) 離心機(jī)是最常用的實(shí)驗(yàn)室儀器,最易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室污染。掌握正確的離心機(jī)使用技術(shù)十分重要。 (1)在使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)時(shí),儀器良好的機(jī)械性能是保障微生物安全的前提條件。 (2)應(yīng)按照操作手冊(cè)來(lái)操作離心機(jī)。 (3)離心機(jī)放置的高度應(yīng)當(dāng)使小個(gè)子工作人員也能夠看到離心機(jī)內(nèi)部,以正確放置十字軸和離心桶。 (4)離心管和盛放離心標(biāo)本的容器應(yīng)當(dāng)由厚壁玻璃制成,或最好為塑料制品,并且在使用前應(yīng)檢查是否破損。 (5)用于離心的試管和標(biāo)本容器應(yīng)當(dāng)始終牢固蓋緊 (最好使用螺旋蓋 )。 (6)離心桶的裝載、平衡、密封和打開(kāi)必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。 (7)離心桶和十字軸應(yīng)按重量配對(duì),并在裝載離心管后正確平衡。 (8)操作指南中應(yīng)給出液面距離心管管口需要留出的空間大小。 (9)空離心桶應(yīng)當(dāng)用蒸餾水或乙醇 (異丙醇, 7 O% )來(lái)平衡。 (1 O)對(duì)于危險(xiǎn)度 3級(jí)和 4級(jí)的微生物,必須使用可封口的離心桶 (安全杯 )。 (11)當(dāng)使用固定角離心轉(zhuǎn)子時(shí),必須小心不能將離心管裝得過(guò)滿,否則會(huì)導(dǎo)致漏液。 (1 2)應(yīng)當(dāng)檢查離心機(jī)內(nèi)轉(zhuǎn)子部位的腔壁是否被污染或弄臟。如污染明顯,應(yīng)重新評(píng)估離心操作規(guī)范。 (1 3)應(yīng)當(dāng)檢查離心轉(zhuǎn)子和離心桶是否有腐蝕或細(xì)微裂痕。 (1 4)每次使用后,要清除離心桶、轉(zhuǎn)子和離心機(jī)腔的污染。 (1 5)使用后應(yīng)當(dāng)將離心桶倒置存放使平衡液流干。 (1 6) 良好的離心操作技術(shù)和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護(hù),以防止感染性氣溶膠和可擴(kuò)散粒子的產(chǎn)生。 常用設(shè)備的 安全操作注意事項(xiàng)( 4) ? 移液管、移液器 (1)應(yīng)使用移液設(shè)備,嚴(yán)禁用口吸取。 (2)所有移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染。 (3)不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣體。 (4)感染性物質(zhì)不能使用移液管反復(fù)吹吸混合。 (5)不能將液體從移液管內(nèi)用力吹出。 (6)刻度對(duì)應(yīng) (mark— to— mark)移液管不需要排出最后一滴液體,因此最好使用這種移液管。 (7)污染的移液管應(yīng)該完全浸泡在盛有適當(dāng)消毒液的防碎容器中。移液管應(yīng)當(dāng)在消毒劑
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