【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 HBV168。 是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因168。 潛伏期： 48周168。 無(wú)癥狀 HCV攜帶者和慢性丙肝者多見(jiàn)168。 誘發(fā)肝外損傷：腎小球腎炎 168。 免疫力不牢固丙型肝炎的特點(diǎn)168。 我國(guó)丙肝病毒攜帶者的比例在 2%5%168。 隨著年齡的增長(zhǎng)，丙肝病毒攜帶率亦增高168。 易感人群感染 HCV后，慢性化的比例高達(dá) 50%以上168。 乙肝患者容易重疊 HCV感染HCV的診斷及預(yù)防168。檢查病毒 RNA168。檢測(cè)抗 HCV168。因 HCV免疫原性不強(qiáng)及變異，目前尚無(wú)可用疫苗HCV的診斷及預(yù)防168。丙型肝炎病毒：中國(guó)普通人群抗 ＨＣＶ抗體的陽(yáng)性率為 32%168。全世界約 17億人感染了ＨＣＶ168。目前除了干擾素 α(ＩＦＮ α)或其與利巴韋林聯(lián)合應(yīng)用對(duì)部分患者有一定療效168。疫苗研究：由于ＨＣＶ包膜糖蛋白Ｅ 2中和性抗原位點(diǎn)存在高變區(qū) 1(ＨＶＲ 1)進(jìn)展甚微168。 ＨＣＶ抗原表位：線性表位、空間表位。如果以ＨＣＶ特異性抗體對(duì)化學(xué)合成的隨機(jī)噬菌體多肽庫(kù)進(jìn)行篩 選 ,則很難篩選到與原始的抗原序列完全一致的序列 ,而是獲得大量與原始抗原序列完全不同的多肽片段。這種一級(jí)結(jié)構(gòu)序列與原始抗原不同 ,又保留其抗原反應(yīng)性的抗原表位 ,稱為模擬表位 (ｍｉｍｏｔｏｐｅ )。從其結(jié)構(gòu)而言 ,模擬表位多數(shù)是構(gòu)象表位 (ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｅｐｉｔｏｐｅ ),即空間表位。168。 噬菌體表面展示技術(shù)的建立和應(yīng)用促進(jìn)了ＨＣＶ抗原模擬表位的研究。國(guó)外學(xué)者應(yīng)用噬菌體表面展示技術(shù)篩選獲得了ＨＣＶ不同的結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白抗原的模擬表位。這些研究結(jié)果首先在免疫學(xué)理論上闡明了抗原 抗體分子之間相互對(duì)應(yīng)的多樣性的問(wèn)題 ,同時(shí)由于模擬表位的抗原性較強(qiáng) ,且具有廣譜性 ,因此 ,在新型診斷試劑和廣譜疫苗的研究中具有重要的應(yīng)用前景。HCV的診斷及預(yù)防168。丙型肝炎病毒感染的診斷 ,第三代血清學(xué)檢測(cè)試劑 —— 較好的敏感性和特異性 ,但 20%患者可不出現(xiàn)抗體 ,或有的患者抗體存在時(shí)間可以很長(zhǎng)168?，F(xiàn)行感染，早期診斷 —— 因此 ,核酸檢測(cè)在HCV感染的診斷中要比 HBV感染的診斷重要得多。168。丁型肝炎病毒（ hepatitisDvirus， HDV）168。 HDV是一種缺陷病毒168。 由 HBsAg構(gòu)成其外殼168。 HDV定位于肝細(xì)胞核內(nèi)，在血液中由 HBsAg包被，形成 3537nm顆粒168。 單負(fù)鏈環(huán)狀 RNAHDV的結(jié)構(gòu)168。 Rizzetto于1977年首先發(fā)現(xiàn)，又稱 ? 抗原168。 3537nm球形顆粒；168。 168。 含 9個(gè) ORF丁型肝炎的特點(diǎn)168。 只能感染 HBsAg陽(yáng)性的病人168。 我國(guó)丁肝感染率在 %5%，西南地區(qū)感染率高168。 患者可不定期隔離，或隔離至肝功能正常，或 HBsAg陰轉(zhuǎn)。168。 病原學(xué)檢查為 HDAg、 抗 HD及 HDVRNA， 持續(xù)高滴度 IgG型抗 HD是慢性 HDV感染的主要血清學(xué)標(biāo)志。一旦乙肝患者感染了 HDV， 尤其是在慢性乙肝的基礎(chǔ)上感染，容易發(fā)展成為重度慢性乙肝、重型肝炎，甚至肝硬化。 微生物學(xué)檢查及預(yù)防168。 診斷為檢測(cè)抗 HD168。 HDVRNA168。 丁型肝炎傳播途經(jīng)與乙型肝炎相似。 傳播途徑和防治原則似HBV。戊型肝炎病毒（ hepatitisEvirus， HEV）168。球形，無(wú)包膜168。直徑 32～ 34nm168。單正鏈 RNA， 3個(gè) ORF168。兩個(gè)血清型致病性及免疫168。主要為糞－口途徑傳播168。由膽汁經(jīng)糞便排出體外168。對(duì)肝細(xì)胞的直接損傷及免疫病理作用168。多表現(xiàn)為急性戊型肝炎168。孕婦感染常致流產(chǎn)戊型肝炎的特點(diǎn)168。 與甲型肝炎相比，患者黃疸前期癥狀重，病程持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，病死率較高，特別是孕婦感染 HEV后。青壯年是 HEV最喜歡攻擊的人群。168。 戊型肝炎分兩種： “流行性 ”多發(fā)生在雨季和洪水后， “散發(fā)性 ”在秋冬季呈現(xiàn)高峰。168。 傳染性強(qiáng)的時(shí)間在患者將要出現(xiàn)癥狀前 (潛伏末期 )至發(fā)病初期，患者的隔離期為起病后 3周。168。 尚末發(fā)現(xiàn)有 2次發(fā)病者。微生物學(xué)檢查及預(yù)防168。 檢測(cè) HEV： EM或 IEM168。 檢測(cè)抗 HEV IgM168。 HEV RNA168。 預(yù)防與甲肝類似168。 TLMV病毒（ TTVliked mini virus, TLMV） ：2023年 TakahashiTTVDNA引物作 PCR， 檢測(cè)抗HCV陽(yáng)性血漿， 10份 TTVDNA滴度 105拷貝 /ml， 其中 3份（分別為 CBD23 279和 203）血漿PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度較預(yù)期為短（約 ）， 該病毒的全長(zhǎng) DNA序列較 TTV為短，分別為 2860nt（CBD231株）、 2856nt–BD279株）和 2897nt（CBD203株），證明是一種新病毒，命名為 TTV樣微小病毒（ TTVlikeminivirus， TLMV） .168。 準(zhǔn)種的研究：集中在 RNA病毒（ RNA病毒變異大，復(fù)制快，短時(shí)間內(nèi)感染個(gè)體中即可形成一個(gè)彼此密切相關(guān)的異質(zhì)性病毒群體 .）168。HCV和 HIV168。 病毒的準(zhǔn)種特性：實(shí)質(zhì)是進(jìn)化的一種生存優(yōu)勢(shì)，病毒最大限度地 制造 自己的大量變異序列，這些序列中可能包括了潛在有用的變異體，對(duì)抗病毒制劑有抵抗能力168。 能逃避 CTL攻擊和誘導(dǎo)免疫耐受的突變體 . 這樣當(dāng)環(huán)境改變后病毒可以快速的作出反應(yīng)，從而保證其在宿主體內(nèi)的生存 168。 最近的研究還發(fā)現(xiàn)病毒準(zhǔn)種象人體免疫系統(tǒng)一樣具有記憶能力，當(dāng)準(zhǔn)種再次遇到經(jīng)歷過(guò)的環(huán)境作用時(shí)，保存在突變譜內(nèi)的少量病毒株將迅速大量復(fù)制成為準(zhǔn)種的主導(dǎo)序列 .因此如果病毒準(zhǔn)種的復(fù)雜性越大，治療難度就可能越大 .168。 在 HCV的研究中已發(fā)現(xiàn)，病毒準(zhǔn)種的異質(zhì)性越大，對(duì) IFNα的應(yīng)答性就越差DNA病毒的 HBV也存在準(zhǔn)種特性 . 已有少量的研究報(bào)道證實(shí)了這種假說(shuō)，有關(guān) HBV準(zhǔn)種復(fù)雜性與 IFNα應(yīng)答性之間相關(guān)性研究尚未見(jiàn)報(bào)道 . HBV不僅存在準(zhǔn)種特性，且在慢性乙型肝炎中準(zhǔn)種的復(fù)雜性和異質(zhì)性還很大 . 同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，在 IFNα應(yīng)答的患者中，準(zhǔn)種的復(fù)雜性明顯小于非應(yīng)答患者，這與在 HCV的研究發(fā)現(xiàn)相一致 . 肝臟天然免疫系統(tǒng)的研究意義：肝臟 NK細(xì)胞研究　 NK細(xì)胞是天然免疫的核心細(xì)胞 ,在腫瘤及病毒的免疫監(jiān)視中十分重要 ,國(guó)內(nèi)該領(lǐng)域研究十分薄弱。肝臟是機(jī)體天然免疫的核心器官 ,近 3年才形成此概念 ,國(guó)際上研究亦十分薄弱 ,有望形成自有學(xué)科優(yōu)勢(shì)。168。 DL C1基因表達(dá)與肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系168。 應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng) (RQPCR)研究位于 8P的 DLC l基因 mRNA表達(dá)與肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。收集 5l例復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院外科手術(shù)切除的肝細(xì)胞癌 (H C C)及癌旁正常組織標(biāo)本，根據(jù)臨床病理學(xué)指標(biāo)，分為高低侵襲性兩組，用RQ—PCR 對(duì)不同侵襲性 H CC之間的 DLC l基因表達(dá)進(jìn)行分析。對(duì)不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能 Mtt CC 9 7一 L． MHCC97一 H、HCCLM Hep3B及 HepG2肝癌細(xì)胞系用同樣方法分析 DLC—l基因的表達(dá)差異。結(jié)果非轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 Hep3B和 HepG2與轉(zhuǎn)移細(xì)胞系 MHCC97一 L、 MHCC97 H和 ttCCLM 3之間 DLC l基因表達(dá)差168。 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (尸 0． 01)，并隨著侵襲與轉(zhuǎn)移潛能的逐步提高 DlJC l表達(dá)水下也相應(yīng)逐步降低； HCCLM 3細(xì)胞系顯著低于 MHCC97 L細(xì)胞系 (P0． 01)。 HCC組織中，高侵襲忡HCC組 DLC—l 基因表達(dá)明顯低于低侵襲性 HCC組 (P0． 05)。結(jié)論 DI C—l 基因表達(dá)與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移的抑制相關(guān)，其表達(dá)可能在抑制肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。168。 RNA干擾技術(shù)用于抗乙型肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)研究168。 構(gòu)建針對(duì)乙型肝炎病毒表面抗原 (IIBSAg)和核心抗原的小干擾 RNA (siRNA)表達(dá)載體 pSUper C， 觀察其對(duì) HepG2 2． 2． 1 5細(xì)胞 (簡(jiǎn)稱 2． 1 5細(xì)胞 )中 HBV DNA轉(zhuǎn)錄和翻譯相應(yīng)蛋白的影響。根據(jù) RNA干擾 (RNAi)作用原理設(shè)計(jì)針對(duì) IIBV核心區(qū)的相應(yīng)序列，再將其克隆入含聚合酶 Ⅲ H l R NA 啟動(dòng)子的真核表達(dá)載體 PSUPe r， 將此重組質(zhì)粒以電轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)入2． 2． 1 5細(xì)胞中，用酶聯(lián)免疫吸附法 (Abbott試劑 )檢測(cè)培養(yǎng)上清液中 HBsAg和 e抗原 (HBeAg)的表達(dá)。結(jié)果經(jīng)酶切鑒定、電泳和測(cè)序分析證明，成功構(gòu)建了含作用序列的重組質(zhì)粒 pSUper C； 但以電穿孔法轉(zhuǎn)染 2． 2． 1 5細(xì)胞后末能發(fā)現(xiàn)其對(duì) 2． 2． 1 5細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的 HBsAg和 HBeAg的表達(dá)有影響。結(jié)論 RNAi在 2． 2． 1 5細(xì)胞中的作用還需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)。168。 乙型肝炎病毒 cccDNA檢測(cè)的方法與臨床意義168。 細(xì)胞外乙型肝炎病毒 (HBV)DNA是一種松弛環(huán)狀的雙鏈DNA(relaxed circular DNA， rcDNA)分子，其兩條鏈均不是閉合的，其中負(fù)鏈較長(zhǎng)，約 3200個(gè)堿基，含有 HBV基因組的全長(zhǎng)基因，在其 5 起始端與 3 末端之間有一數(shù)個(gè)堿基的“ 缺刻 ” ；正鏈較短，有較大的 “ 缺口 ” ，其 3 木端不固定，故長(zhǎng)度是可變的，約為負(fù)鏈長(zhǎng)度的 50％～ 100％。在HBV的復(fù)制過(guò)程中，病毒 DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞核，在 DNA聚合酶的作用下，兩條鏈的缺口均被補(bǔ)齊，形成 超螺旋的共價(jià)、閉合、環(huán)狀 DNA分子 (covalently closed circular DNA，cccDNA)。168。 治療前后肝細(xì)胞內(nèi) HBV cccDNA~含量的變 ft應(yīng)該納入到抗一HBV藥物評(píng)價(jià)的指標(biāo)體系中來(lái)，從一定意義上說(shuō)，只有能夠徹底清除 HBV cccDNA的藥物，才能算是真正 “ 有效 ” 的抗病毒藥物。 168。 cccDNA不同于 rcDNA， 后者存在于 HBV核心中，外有核衣殼蛋白保護(hù)，因而在血液中是比較穩(wěn)定的；而cccDNA原本存在于肝細(xì)胞核中，不與蛋白共價(jià)結(jié)合，肝細(xì)胞被破壞釋放到血液中時(shí)從理論上講應(yīng)該是裸露的核酸分子，因此在血液中是否穩(wěn)定尚存疑問(wèn)。但我們認(rèn)為 HBV cccDNA是一種不斷折疊而形成的超螺旋結(jié)構(gòu)的 DNA分子，不同于一般的雙鏈 DNA，既然用真核質(zhì)粒作載體的各種 DNA疫苗能通過(guò)機(jī)體的各種屏障被機(jī)體攝取而不被破壞，我們推測(cè)類似結(jié)構(gòu)的乙型肝炎 cccDNA在血液中應(yīng)該也是穩(wěn)定的。 168。 SEN病毒：一種新近發(fā)現(xiàn)的肝炎病毒？168。 1999年 Primi等在 1例感染人類免疫缺陷病毒的靜脈毒癮者血清中分離出一種新的可能導(dǎo)致急、慢性肝炎的單鏈 DNA病毒，并以該患者姓名的首位字母暫時(shí)命名為 SEN病毒（senvirus， SENV）。168。 SENV是一種無(wú)包膜、線狀單股負(fù)鏈 DNA病毒，長(zhǎng)度約為3800kb。 SENV的開(kāi)放讀碼框（ ORF） 1氨基酸殘基為 642～762個(gè)， N末端富含精氨酸 /賴氨酸區(qū)相對(duì)保守。 SENV的 ORF1具有 3個(gè) Rep蛋白基序。 SENV的 ORF2含有 146～ 166個(gè)氨基酸。 ORF3與 ORF1的 3′ 端序列部分重疊，有 81～ 88個(gè)氨基酸組成，在 ATG起始密碼子上有一個(gè) TATA功能區(qū)。它與經(jīng)輸血傳播病毒（ TTV） 原型株的核酸序列同源性低于 50%，氨基酸序列同源性僅為 3%。因此，它不是 TTV親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的病毒變異株，而是一群不完全相同的病毒組成新的亞科的代表。目前至少可分為 A～ H等 8個(gè)基因亞型，各型間氨基酸序列差異在 15%～ 50%之間。在目前已知的 8個(gè)基因亞型中，僅SENV－ C/H和 D亞型與慢性肝病關(guān)系密切。 SENV兩個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)的基因位點(diǎn)變異頻率為 104/ 年 病毒性肝炎藥物核 苷 類 似 藥為一種強(qiáng)的單磷酸次黃嘌呤核苷脫氫酶抑制劑，阻礙病毒核酸合成。適應(yīng)證：用于腎綜合征出血熱和丙型肝炎治療劑 量：口服 ～ ， 3～ 4次分服副作用：有致畸和引起溶血，可致心肌損害和引 起呼吸困難。利巴韋林（病毒唑， Ribavirin,Virazole）適應(yīng)證：抗皰疹病毒， VZV病毒；其單磷酸鹽 （ AraMP） 可抑制 HBV。副作用：消化道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝損害及骨髓抑制等毒性反應(yīng)。注 意：不可靜脈推注，滴速應(yīng)慢，配制的液體不可冷藏；不可與別嘌呤醇合用，以免增加毒性反應(yīng)。阿糖腺苷（ Vidarabine）三磷酸化后具抑制 HIV逆轉(zhuǎn)錄酶活性，可口服，生物利用度達(dá) 80%以上，對(duì)宿主細(xì)胞增殖作用和骨髓毒性小，易產(chǎn)生抗藥性，與 AZT伍用可減少毒性反應(yīng)。適應(yīng)證： HIV感染劑 量：每次 ， 6次 /d； 與 AZT交替使用副作用：主要為末梢神經(jīng)炎（灼痛、刺痛），其他有皮疹、發(fā)熱等脫氧胞苷（ 2’,3’ dideoxycytidine, ddC）口服吸收較好，生物利用度可達(dá) 40%，其活性部分在細(xì)胞內(nèi)半減期 12h， 可每日兩次給藥。如果先予 AZT治療 8周后再用 ddI， 可更有效地防止病情進(jìn)展，提高存活期適應(yīng)證： HIV感染劑 量：每日 ～ 副作用：外周神經(jīng)痛、胰腺炎、頭痛、失眠、惡心、嘔吐、發(fā)熱、皮疹等。脫氧肌苷（ 2’,3’ dideoxyinosine, ddI）最初用于 HIV感染，以后發(fā)現(xiàn)其對(duì) HBVDNAP有抑制作用，細(xì)胞毒性作用小