【文章內(nèi)容簡介】
,45%),冰浴條件下邊攪拌邊緩慢加入硫酸銨,不可一次全部加入,而以小分量分多次慢慢溶入,并不時攪拌,以免造成局部濃度過高。緩慢加入時為了避免局部的濃度一下子很高,因為硫酸銨不同的濃度是沉淀不同的蛋白為主,這樣就可能將不想沉淀的蛋白沉淀下來。冰浴條件是為了保證蛋白的活性,因為硫酸銨加入到辛酸溶液后會產(chǎn)熱。硫酸銨全加入后,再攪拌1030min,使溶液完全平衡,然后就可以進行離心。一般采取4℃攪拌30min后,繼續(xù)靜置至少60min(一般過夜)。再13000r/min,4℃離心30min,棄上清,在短暫離心,將沉淀溶解于少量PBS中。但如果進行下面的親和層析。二、親和層析【HiTrap Protein AG HP 1ml(Amersham Bioscience)特性】柱床體積:1ml柱子大?。?耐受壓:最大流速:4ml/mi