【文章內容簡介】 如 HPLC反相柱，反相板。 固定相：硅膠硅醇基結合烷基，如 RP2， RP8， RP18。親脂性： RP18 RP8 RP2。 流動相 (洗脫劑 )： MeOHH2O， CH3CNH2O 洗脫順序：分離極性大的成分，極性大者先洗脫 下來。 實驗室用高效液相色譜儀 第四節(jié) 提取分離方法 3 根據(jù)物質的 吸附性 差別進行分離 ——吸附色譜法 吸附分類： 物理吸附：無選擇性的吸附，吸附－解析發(fā)生迅速。 吸附劑如硅膠、氧化鋁、活性炭等； 化學吸附：不可逆性。如堿性氧化鋁對酚酸性成分的 吸附，硅膠對生物堿的吸附等。 半化學吸附：聚酰胺對酚酸類、醌類的氫鍵吸附。 第四節(jié) 提取分離方法 ? 吸附原理：相似相吸 ? 影響吸附過程的三要素： – 吸附劑（固定相）， – 溶質（被分離物質）， – 溶劑（洗脫劑，展開劑，流動相） 第四節(jié) 提取分離方法 硅膠、氧化鋁： 極性吸附劑：載樣量大，吸 附力強 硅膠：應用最廣，適用于各 類成分分離 氧化鋁：有中性、酸性、堿 性氧化鋁。堿性氧 化鋁不適合于分離 酸性成分，多用于 分離生物堿。 第四節(jié) 提取分離方法 硅膠、氧化鋁： ①被分離物質吸附力與結構的關系 被分離物質極性大，吸附力強， Rf值小，洗脫難， 后被洗脫下來。 官能團極性大小排列順序： COOH ArOH ROH RNH2, RNHR 39。, RNR 39。 R RCONR39。R RCHO RCOR 39。 RCOOR 39。 ROR 39。 RH 第四節(jié) 提取分離方法 硅膠、氧化鋁： ②溶劑 (洗脫劑 )的極性與洗脫力的關系 洗脫劑極性越大 , 洗脫力越強 . 練習 : 從黃花夾竹桃果仁中分離到七種強心苷成分 , 比較極性大小和硅膠柱上洗脫順序 . 名稱 R R’ 黃夾苷 A CHO (DGlc)2 黃夾苷 B CH3 (DGlc)2 黃夾次苷 A CHO H 黃夾次苷 B CH3 H 黃夾次苷 C CH2OH H 黃夾次苷 D COOH H 單乙酰黃夾次苷 B CH3 H 單乙酰黃夾次苷 B R”=COCH3, 其它 R”=H ORO HOC H3 O R 39。O C H3O R OO答案 ： 1. 極性大 小：黃夾苷 A＞黃夾苷 B ＞次苷 D＞次苷 C＞次苷 A＞次苷 B 2. 硅膠柱上的出柱順序：后 先 小極性化合物 大極性化合物 活性炭 —— 非極性吸附劑 ①吸附力與結構的關系 ? 分子量大者 分子量小者 ? 芳香族 脂肪族 ? 含 OH, COOH, NH2多者 少者 ②洗脫力與溶劑的關系 吡啶 15%酚 /醇 7%酚 /H2O 醇 含水醇 H2O ③ 應用 : 黃酮、生物堿的富集，糖的分離、脫色等。 第四節(jié) 提取分離方法 C H2COHOC H2NCH2CC H2H2CC H2H2CN HH OOOHHOOH2CCNC H2H2CC H2H2CC H2CNH2C固固固 固固固 聚酰胺 (Polyamide) 是由己酰胺聚合成的一類高分子化合物。 分離原理 ：主要通過 酰胺鍵與酚羥基、酸、醌等形成氫鍵 ，產生 吸附 作用。吸附力取決于 形成氫鍵締合的能力 。 第四節(jié) 提取分離方法 聚酰胺 ①吸附力與結構的關系 , 吸附力越強 。 , 吸附力減少 。 第四節(jié) 提取分離方法 苷 , 單糖苷 雙糖苷 叁糖苷 ,吸附力越強 。 聚酰胺 ①吸附力與結構的關系 ② 溶劑的洗脫能力 水 含水醇 醇 丙酮 NaOH/H2O甲酰胺 二甲基甲酰胺 尿素 /H2O 第四節(jié) 提取分離方法 聚酰胺 ③常用溶劑 ： H2O ， EtOH/ H2O， EtOH ④ 應用 : 分離黃酮類 。除鞣質 . OH OO H OO HO HO H第四節(jié) 提取分離方法 練習 : 某植物中分得 3個黃酮化合物，結構如下 , 比較它們的極性大小及在硅膠 TLC和聚酰胺薄膜上 Rf值大小順序 . A: R1 =R2= H B: R1 = H, R2= Rha C: R1 = Glc, R2= Rha 極性大小 : SiO2TLC Rf: Polyamide TLC, Rf: OR 2 OO H OO HO R 1第四節(jié) 提取分離方法 極性大小 : C B A SiO2TLC Rf: A B C Polyamide TLC, Rf: C B A 答案： 大孔吸附樹脂 (macroreticular resin) ① 組成 : 苯乙烯，二乙烯苯和致孔劑 ②分離原理 :吸附 (范德華力和氫鍵 )和 分子篩 作用 (多孔性結構 ) ③樹脂類型 :非極性、中極性和極性三種。 非極性 ：由苯乙烯和二乙烯苯縮合而成，故又稱 芳香吸附樹脂。 中極性 ：含脂基的吸附樹脂 。 極 性 ：含酰氨基、氰基、酚羥基等含氮、氧、硫不同極性功能的吸附樹脂。 第四節(jié) 提取分離方法 大孔吸附樹脂 ④洗脫劑 : H2O 及不同比例的含水醇。 洗脫分離 : H2O 洗 : 糖 ,水溶性色素 30% EtOH/ H2O: 極性大的成分 5075% EtOH: 皂苷類 95% EtOH: 極性小成分 ⑤應用 : 除多糖 , 水溶性色素 , 富集苷類成分 第四節(jié) 提取分離方法 第四節(jié) 提取分離方法 離解程度不同 進行分離 — 離子交換法 固定相 ：離子交換樹脂（聚苯乙烯高分子化合物，引 入交換基團） 分類： 陽離子交換樹脂：強酸型 RSO3H+ 弱酸型 RCOOH+ 陰離子交換樹脂：強堿型 RN+(CH3)3Cl 弱堿型 RNH2, RNHR’, RNR’R” 陰離子交換樹脂： ： 主要用于 生物堿 和 有機酸 的分離。 離解程度不同 進行分離 — 離子交換法 : 陽離子交換樹脂： 第四節(jié) 提取分離方法 R S O 3 H + + B H + R S O 3 B H + O H R S O 3 H + + BR N + ( C H 3 ) 3 C l + R 39。 C O O R N + ( C H 3 ) 3 . R 39。 C O O H C l R N + ( C H3 ) 3 C l + R 39。 C O O H第四節(jié)