生物化學第二章蛋白質化學課件3lijianbing(編輯修改稿)
2025-08-28 17:45 本頁面
【文章內容簡介】 具有膠體溶液的特征。 可溶性蛋白質分子表面分布著大量極性氨基酸殘基 ， 對水有很高的親和性 ， 通過水合作用在蛋白質顆粒外面形成一層 水化層 ， 同時這些顆粒帶有 電荷 ， 因而蛋白質溶液是相當穩(wěn)定的親水膠體 。 蛋白質是比較穩(wěn)定的親水膠體的原因 蛋白質分子表面有許多極性基團 ， 如氨基 、 羧基 、 羥基和氫硫基等 ， 這些基團對水有高度親和性 ， 從而在蛋白質顆粒外面形成一層水化層 ， 同時這些顆粒帶有 電荷 ， 使得蛋白質顆粒彼此不能靠近 ， 不會碰撞而聚集成大顆粒， 因而蛋白質溶液是相當穩(wěn)定的親水膠體 。 重要 第六節(jié) 蛋白質的重要性質 蛋白質膠體性質的應用 透析法 :利用蛋白質不能透過半透膜的的性質，將含有小分子雜質的蛋白質溶液放入透析袋再置于流水中，小分子雜質被透析出，大分子蛋白質留在袋中，以達到純化蛋白質的目的。這種方法稱為透析（dialysis）。 鹽析法 :在蛋白質溶液中加入高濃度的硫酸銨、氯化鈉等中性鹽，可有效地破壞蛋白質顆粒的水化層。同時又中和了蛋白質表面的電荷，從而使蛋白質顆粒集聚而生成沉淀，這種現(xiàn)象稱為鹽析（ salting out）。 第六節(jié) 蛋白質的重要性質 蛋白質的沉淀 如果加入適當的試劑使蛋白質分子處于等電點狀態(tài)或失去水化層 （ 消除相同電荷 ，除去水膜 ） ， 蛋白質膠體溶液就不再穩(wěn)定并將產生沉淀 。 第六節(jié) 蛋白質的重要性質 蛋白質的沉淀 沉淀方法類別 : 高濃度中性鹽 （ 鹽析 、 鹽溶 ） 酸堿 （ 等電點沉淀 ） 有機溶劑沉淀 重金屬鹽類沉淀 生物堿試劑和某些酸類沉淀 加熱變性沉淀 第六節(jié) 蛋白質的重要性質 蛋白質的變性與復性 ● 蛋白質各自所特有的高級結構 ， 是表現(xiàn)其物理性質和化學特性以及生物學功能的基礎 。 當天然蛋白質受到某些物理因素和化學因素的影響， 使其分子內部原有的高級構象發(fā)生變化時 ， 蛋白質的理化性質和生物學功能都隨之改變或喪失， 但并未導致其一級結構的變化 ， 這種現(xiàn)象稱為變性作用 （ denaturation） 。 第六節(jié) 蛋白質的重要性質 蛋白質的變性與復性 ● 蛋白質 變性作用 表征 ：生物活性喪失；物理性質 （ 溶解度 、 粘度 、 擴散系數 、 光譜特性等 ） 和化學性質 （ 化學反應 ， 被酶解性） 改變 。 應用 ：變性滅菌 、 消毒；變性制食品；抗衰老 …… 第六節(jié) 蛋白質的重要性質 蛋白質的變性與復性 ● 蛋白質的變性作用如果不過于劇烈 ， 則是一種可逆過程 ， 變性蛋白質通常在除去變性因素后 ， 可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來的構象 ， 恢復原有的理化性質和生物活性 ， 這種現(xiàn)象成為 復性（ renaturation） 。 重要 蛋白質的變性與復性 當蛋白質受到某些物理因素和化學因素的影響 ，使其分子內部原有的高級構象發(fā)生變化時 ， 蛋白質的理化性質和生物學功能都隨之改變或喪失 ，但并未導致其一級結構的變化 ， 這種現(xiàn)象稱為 變性 ； 變性蛋白質通常在除去變性因素后 ， 可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來的構象 ， 恢復原有的理化性質和生物活性 ， 這種現(xiàn)象成為 復性 。 第六節(jié) 蛋白質的重要性質 蛋白質的主要顯色反應 雙縮脲反應 酚試劑反應 → 蛋白質定量 、 定性 茚三酮反應 測定常用方法 雙縮脲反應 紅紫色絡合物 Cu2+ 蛋白質的紫外吸收光譜 蛋白質在遠紫外光區(qū) （ 200230nm） 有較大的吸收 ， 在 280nm有一特征吸收峰 ， 可利用這一特性對蛋白質進行定性定量鑒定 。 蛋白質質量濃度 /（ mg/ml） = 280 260 測定范圍： ～ 第二章 蛋白質化學 第七節(jié) 蛋白質分離純化與鑒定 第七節(jié) 蛋白質的分離、純化與鑒定 一、蛋白質分離純化的一般原則 高純度、高活性、高回收率 第七節(jié) 蛋白質的分離、純化與鑒定 二、蛋白質分離純化的一般程序 前處理、粗分級、細分級和結晶 第七節(jié) 蛋白質的分離、純化與鑒定 三、蛋白質分離純化的一般方法 （一）根據蛋白質分子大小進行分離 （二）根據蛋白質溶解度的差異分離 （三）根據蛋白質電荷不同進行分離 （四）根據蛋白質專一性的不同分離 第七節(jié) 蛋白質的分離、純化與鑒定 （一）根據蛋白質分子大小進行分離 透析（ dialysis）和超濾（ ultrafiltration） 半透膜 （玻璃紙，火棉紙） 透析常用于蛋白質溶液的除鹽 超濾常用于蛋白質溶液的除鹽、濃縮 第七節(jié) 蛋白質的分離、純化與鑒定 （一）根據蛋白質分子大小進行分離 密度梯度離心 （ density gradient ultracentrifugation） 常見有蔗糖密度梯度（連續(xù)、不連續(xù)） 質量和密度大的蛋白質分子沉降快 第七節(jié) 蛋白質的分離、純化與鑒定 （一）根據蛋白質分子大小進行分離 凝膠過濾（ gel filtration chromatography） 分子篩層析，分子排阻層析 Sephadex G50 分離范圍： 1 50030 000 交聯(lián)葡聚糖 （ Sephadex） 聚丙烯酰胺凝膠 （ BioGel P） 瓊脂糖凝膠 （ Sepharose， BioGel A） C. reticulata Separation by open column chromatography 山茶花色素 CY3GEpCX的分離提取 MCI gel Sephadex gel ODS gel crude extract ODS gel Collection of petals Isolation of pigments 1
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