生物化學(xué)第二章蛋白質(zhì)化學(xué)課件3lijianbing(編輯修改稿)
2024-08-28 17:45 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 具有膠體溶液的特征。 可溶性蛋白質(zhì)分子表面分布著大量極性氨基酸殘基 ， 對(duì)水有很高的親和性 ， 通過(guò)水合作用在蛋白質(zhì)顆粒外面形成一層 水化層 ， 同時(shí)這些顆粒帶有 電荷 ， 因而蛋白質(zhì)溶液是相當(dāng)穩(wěn)定的親水膠體 。 蛋白質(zhì)是比較穩(wěn)定的親水膠體的原因 蛋白質(zhì)分子表面有許多極性基團(tuán) ， 如氨基 、 羧基 、 羥基和氫硫基等 ， 這些基團(tuán)對(duì)水有高度親和性 ， 從而在蛋白質(zhì)顆粒外面形成一層水化層 ， 同時(shí)這些顆粒帶有 電荷 ， 使得蛋白質(zhì)顆粒彼此不能靠近 ， 不會(huì)碰撞而聚集成大顆粒， 因而蛋白質(zhì)溶液是相當(dāng)穩(wěn)定的親水膠體 。 重要 第六節(jié) 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì) 蛋白質(zhì)膠體性質(zhì)的應(yīng)用 透析法 :利用蛋白質(zhì)不能透過(guò)半透膜的的性質(zhì)，將含有小分子雜質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液放入透析袋再置于流水中，小分子雜質(zhì)被透析出，大分子蛋白質(zhì)留在袋中，以達(dá)到純化蛋白質(zhì)的目的。這種方法稱為透析（dialysis）。 鹽析法 :在蛋白質(zhì)溶液中加入高濃度的硫酸銨、氯化鈉等中性鹽，可有效地破壞蛋白質(zhì)顆粒的水化層。同時(shí)又中和了蛋白質(zhì)表面的電荷，從而使蛋白質(zhì)顆粒集聚而生成沉淀，這種現(xiàn)象稱為鹽析（ salting out）。 第六節(jié) 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì) 蛋白質(zhì)的沉淀 如果加入適當(dāng)?shù)脑噭┦沟鞍踪|(zhì)分子處于等電點(diǎn)狀態(tài)或失去水化層 （ 消除相同電荷 ，除去水膜 ） ， 蛋白質(zhì)膠體溶液就不再穩(wěn)定并將產(chǎn)生沉淀 。 第六節(jié) 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì) 蛋白質(zhì)的沉淀 沉淀方法類別 : 高濃度中性鹽 （ 鹽析 、 鹽溶 ） 酸堿 （ 等電點(diǎn)沉淀 ） 有機(jī)溶劑沉淀 重金屬鹽類沉淀 生物堿試劑和某些酸類沉淀 加熱變性沉淀 第六節(jié) 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì) 蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性 ● 蛋白質(zhì)各自所特有的高級(jí)結(jié)構(gòu) ， 是表現(xiàn)其物理性質(zhì)和化學(xué)特性以及生物學(xué)功能的基礎(chǔ) 。 當(dāng)天然蛋白質(zhì)受到某些物理因素和化學(xué)因素的影響， 使其分子內(nèi)部原有的高級(jí)構(gòu)象發(fā)生變化時(shí) ， 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)功能都隨之改變或喪失， 但并未導(dǎo)致其一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化 ， 這種現(xiàn)象稱為變性作用 （ denaturation） 。 第六節(jié) 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì) 蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性 ● 蛋白質(zhì) 變性作用 表征 ：生物活性喪失；物理性質(zhì) （ 溶解度 、 粘度 、 擴(kuò)散系數(shù) 、 光譜特性等 ） 和化學(xué)性質(zhì) （ 化學(xué)反應(yīng) ， 被酶解性） 改變 。 應(yīng)用 ：變性滅菌 、 消毒；變性制食品；抗衰老 …… 第六節(jié) 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì) 蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性 ● 蛋白質(zhì)的變性作用如果不過(guò)于劇烈 ， 則是一種可逆過(guò)程 ， 變性蛋白質(zhì)通常在除去變性因素后 ， 可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來(lái)的構(gòu)象 ， 恢復(fù)原有的理化性質(zhì)和生物活性 ， 這種現(xiàn)象成為 復(fù)性（ renaturation） 。 重要 蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)受到某些物理因素和化學(xué)因素的影響 ，使其分子內(nèi)部原有的高級(jí)構(gòu)象發(fā)生變化時(shí) ， 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)功能都隨之改變或喪失 ，但并未導(dǎo)致其一級(jí)結(jié)構(gòu)的變化 ， 這種現(xiàn)象稱為 變性 ； 變性蛋白質(zhì)通常在除去變性因素后 ， 可緩慢地重新自發(fā)折疊成原來(lái)的構(gòu)象 ， 恢復(fù)原有的理化性質(zhì)和生物活性 ， 這種現(xiàn)象成為 復(fù)性 。 第六節(jié) 蛋白質(zhì)的重要性質(zhì) 蛋白質(zhì)的主要顯色反應(yīng) 雙縮脲反應(yīng) 酚試劑反應(yīng) → 蛋白質(zhì)定量 、 定性 茚三酮反應(yīng) 測(cè)定常用方法 雙縮脲反應(yīng) 紅紫色絡(luò)合物 Cu2+ 蛋白質(zhì)的紫外吸收光譜 蛋白質(zhì)在遠(yuǎn)紫外光區(qū) （ 200230nm） 有較大的吸收 ， 在 280nm有一特征吸收峰 ， 可利用這一特性對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性定量鑒定 。 蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度 /（ mg/ml） = 280 260 測(cè)定范圍： ～ 第二章 蛋白質(zhì)化學(xué) 第七節(jié) 蛋白質(zhì)分離純化與鑒定 第七節(jié) 蛋白質(zhì)的分離、純化與鑒定 一、蛋白質(zhì)分離純化的一般原則 高純度、高活性、高回收率 第七節(jié) 蛋白質(zhì)的分離、純化與鑒定 二、蛋白質(zhì)分離純化的一般程序 前處理、粗分級(jí)、細(xì)分級(jí)和結(jié)晶 第七節(jié) 蛋白質(zhì)的分離、純化與鑒定 三、蛋白質(zhì)分離純化的一般方法 （一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小進(jìn)行分離 （二）根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異分離 （三）根據(jù)蛋白質(zhì)電荷不同進(jìn)行分離 （四）根據(jù)蛋白質(zhì)專一性的不同分離 第七節(jié) 蛋白質(zhì)的分離、純化與鑒定 （一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小進(jìn)行分離 透析（ dialysis）和超濾（ ultrafiltration） 半透膜 （玻璃紙，火棉紙） 透析常用于蛋白質(zhì)溶液的除鹽 超濾常用于蛋白質(zhì)溶液的除鹽、濃縮 第七節(jié) 蛋白質(zhì)的分離、純化與鑒定 （一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小進(jìn)行分離 密度梯度離心 （ density gradient ultracentrifugation） 常見(jiàn)有蔗糖密度梯度（連續(xù)、不連續(xù)） 質(zhì)量和密度大的蛋白質(zhì)分子沉降快 第七節(jié) 蛋白質(zhì)的分離、純化與鑒定 （一）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小進(jìn)行分離 凝膠過(guò)濾（ gel filtration chromatography） 分子篩層析，分子排阻層析 Sephadex G50 分離范圍： 1 50030 000 交聯(lián)葡聚糖 （ Sephadex） 聚丙烯酰胺凝膠 （ BioGel P） 瓊脂糖凝膠 （ Sepharose， BioGel A） C. reticulata Separation by open column chromatography 山茶花色素 CY3GEpCX的分離提取 MCI gel Sephadex gel ODS gel crude extract ODS gel Collection of petals Isolation of pigments 1
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