【文章內(nèi)容簡介】 為常見原因。應用37℃40℃的生理鹽水洗滌紅細胞可去除紅細胞表面附著的導致紅細胞凝集的冷集素。 正反定型結果不一致原因 分型血清效價太低、親和力不強。如抗—A血清效價不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。 紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例則不適當，使反應不明顯，誤判為陰性反應。 受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血病或惡性腫瘤）以及B類或cisAB等。 受檢者血清中蛋白紊亂（高球蛋白血癥），或實驗時溫度過高，常引起紅細胞呈緡錢狀排列。 受檢者血清中缺乏應有的抗—A和抗—B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集，部分溶血時，可溶性血型物質中和了相應的抗體。 由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 血清中有意外抗體，如自身抗—I，常引起干擾。 老年人血清中抗體水平大幅度下降。 正反定型結果不一致的解決方法： 另從受檢者采取1份新鮮血液標本，這樣可以糾正因污染或搞錯樣本造成的不符合。 將紅細胞洗滌數(shù)次，配成2％鹽水細胞懸液，用抗—A、抗—B、抗—AI，抗—A＋B及抗—H做試驗可以得到其它有用的信息。 對受檢紅細胞作直接抗球蛋白試驗，如結果呈陽性，表示紅細胞已被抗體致敏。 用AAB、O紅細胞從自身紅細胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗—I，用O型（或ABO相合的）臍血紅細胞檢查。 如果試驗結果未見凝集，應將細胞及血清試驗至少在室溫和4℃放置30min，用顯微鏡檢查核實。 如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細胞與抗A或抗—B血清作吸收及放散試驗以及受檢者唾液作A、B、H血型物質測定。后者只對80％HAB分泌型的人有用。 如試驗結果紅細胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴，混合。往往可使緡錢現(xiàn)象消失。應注意不應先加鹽水1滴于受檢者血清中而后和紅細胞作試驗，以免使血清中抗體被稀釋。 如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時，可用下列方法進行鑒別： 觀察細胞與抗—A及抗B的凝集強度，與抗A的反應要比抗—B的反應強。這種區(qū)別用玻片法作試驗更為明顯。 用受檢者紅細胞與自身血清作試驗，血清中的抗—B不凝集自身紅細胞上的類B抗原。 檢查唾液中是否有A、B物質，如果是分泌型，可檢出A物質而無B物質。 核對患者的診斷，類B抗原的形成與結腸癌、直腸癌、革蘭陰件桿菌感染有關。12. 方法局限性 分型血清質量性能符合要求，用畢后，應放置冰箱保存，以免細菌污染。 試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 操作方法應按規(guī)定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。 按理IgM抗—A和抗—B與相應紅細胞的反應溫度以4℃為最強，但為了防止冷凝集現(xiàn)象干擾，一般仍在室溫（20℃24℃）內(nèi)進行試驗，37℃可使反應減弱。 離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結果。 觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。 試劑一旦發(fā)現(xiàn)渾濁不得使用。 制紅細胞懸液時防止自凝現(xiàn)象。13. 參考文獻中國人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司編. 全國臨床檢驗操作規(guī)程（第二版）. 1997，8992Rh（D）血型鑒定 實驗原理 紅細胞與抗D抗體發(fā)生凝集反應表明該細胞有D抗原，反之，無凝集現(xiàn)象表明試驗的紅細胞缺少正常強度的D抗原。 標本收集和制備 無菌操作收集血液標本,收集后盡可能立即進行實驗。如果不能立即實驗,應將樣品貯存于28C。收集在ACD、CPD、CPD－2A液中的血液標本,不超過21天仍可進行實驗，但是加EDTA、肝素和凝集的血液標本，實驗應在2天內(nèi)進行。 儀器、試劑、校準品、質控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品： Rh(IgM)血型定型試劑（單克隆抗體）：上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司，產(chǎn)品注冊號：國藥準字S20060018,包裝、規(guī)格：每盒內(nèi)裝有1支試劑，10ml/支，儲存要求：存放2—8℃，有效期內(nèi)使用。 操作步驟 玻片法： 干凈玻片上加1滴抗D。 再加入1滴40%50%的被檢紅細胞懸液。該紅細胞懸液可以是鹽水懸液，也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細胞。 在圓形的玻片區(qū)域中混勻，前后緩慢搖晃玻片。2分鐘左右肉眼判讀結果。不要將試劑的干燥與凝集相混淆。 如果是陰性，需要試管法重做一遍實驗。 鹽水試管法 加一滴抗D試劑于預先標記好的試管中 再加1滴約3%—5%紅細胞生理鹽水懸液于試管中?；靹?。 離心，速度和時間可選擇以下二種之一： 轉速1000rpm，時間一分鐘1分鐘或3400rpm，時間15秒。 檢查是否溶血（溶血可能是陽性結果，或者是細菌污染），然后輕輕搖晃，是細胞再懸浮起來。 觀察凝集狀況，并立即記錄結果。必要時可借助顯微鏡。 若是陰性結果，需在37℃孵育15分鐘30分鐘，然后再離心觀察結果。結果若呈陰性需進一步確認是否是弱D。 微量板法（U型板） 加一滴抗D試劑于U型底的微孔中。 再在微孔中一滴約35%的被檢紅細胞懸液，細胞懸液需事先制備于生理鹽水中。 用機械的方法將U型板混勻。 用板式離心機離心：2000rpm,時間30秒。不同的離心機，不同的微量板所需要的離心條件有所區(qū)別，正確實驗的結果需要適當?shù)碾x心，使反應板產(chǎn)生清晰的細胞扣及透亮的上清液。 檢測溶血情況（溶血可能是陽性結果，或者是細菌污染）。 結果判斷：用機械震蕩U型板，再懸浮細胞，根據(jù)懸浮情況來判斷凝集。陽性反應，出現(xiàn)紅細胞凝集，而陰性反應在微孔中會出現(xiàn)均勻細胞懸液。 可用肉眼和自動化判讀結果。 如果呈陰性