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正文內(nèi)容

循環(huán)腫瘤細胞檢測的現(xiàn)狀及發(fā)展docxdocx(編輯修改稿)

2025-08-14 04:07 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 且SCLC患者CTC計數(shù)顯著高于NSCLC患者,CTC計數(shù)隨著肺癌分期的增高而明顯增多,尤以Ⅳ期且伴遠處轉(zhuǎn)移的患者CTC計數(shù)最高。也有研究發(fā)現(xiàn)CTCs水平隨腫瘤直徑增大、分化程度降低、骨轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而升高。Nagrath等發(fā)現(xiàn)在評估化療的療效上,CTCs數(shù)量的改變與按照實體瘤的療效評價標準(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors,RECIST)進行計算機斷層掃描(puted tomography,CT)檢查的結(jié)果具有高度一致性。化療前CTCs計數(shù)高的患者預(yù)后差,化療后CTCs計數(shù)下降多的患者,化療效果較好,死亡風(fēng)險降低,提示CTCs對廣泛期的小細胞肺癌具有預(yù)測作用,并且化療后CTCs計數(shù)的改變可以提供有價值的臨床信息,指導(dǎo)后續(xù)治療。早期胃癌往往臨床癥狀不明顯,當(dāng)出現(xiàn)明顯癥狀時,已到中晚期,失去了治療的最佳時機。因此早期診斷、治療胃癌是提高患者生存率的關(guān)鍵。CTCs對胃癌特別是早期胃癌的發(fā)現(xiàn)及診斷目前尚處于探索和研究階段。李熳等對45例胃癌患者CTCs進行了檢測,其中27例(60%)檢出有CTCs,CTCs陽性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)密切相關(guān),而與性別、年齡、腫瘤部位和TNM分期、腫瘤分化程度無關(guān)[27]。曹中正等于2014年報道了運用免疫磁珠法陰性富集CTCs并行免疫熒光原位雜交檢測技術(shù)[28]。%,24例良性胃?。ㄎ笣兓蚵晕秆祝?。且發(fā)現(xiàn)胃癌患者外周血中CTCs水平升高與TNM分期無關(guān),胃癌早期階段外周血中便可檢出CTCs,提示可能在腫瘤早期階段即發(fā)生微轉(zhuǎn)移。Hiraiwa等利用CellSearch System發(fā)現(xiàn)外周血中CTCs≥2組總生存率顯著低于CTCs2組;Matsusaka等人則發(fā)現(xiàn)CTCs≥4組的化療病人總生存期和無進展生存期要顯著小于CTCs4組,提示CTCs水平也許與化療藥物治療反應(yīng)相關(guān)。4 主要循環(huán)腫瘤細胞檢測儀器簡介美國FDA在2004年、2007年和2008年分別批準了美國強生公司子公司Veridex開發(fā)的Cellsearch CTCs檢測技術(shù)用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)直腸癌與前列腺癌的預(yù)后評估、無進展生存期和總生存期的預(yù)測。Cellsearch也是目前唯一被FDA批準用于臨床的檢測系統(tǒng)。2007年美國臨床腫瘤學(xué)會(American Society of Clinical Oncology,ASCO)將CTCs納入了腫瘤標志物范疇;2012年國家食品藥品監(jiān)督管理總局(China Food and Drug Administration,CFDA)批準Veridex的CellSearch系統(tǒng)用于檢測CTCs以評估轉(zhuǎn)移性乳腺癌的預(yù)后;2013年CTCs檢測被納入美國醫(yī)保;2016年初CFDA批準了格諾思博生物科技有限公司自主研發(fā)的首個肺癌循環(huán)腫瘤細胞檢測葉酸受體陽性CTC檢測試劑盒(注冊證編號:國械注準20163400061)。該試劑盒采用了國內(nèi)原創(chuàng)的靶向PCR CTC檢測技術(shù),顯著提高了CTC檢測的敏感性。自2004年,Cellsearch檢測系統(tǒng)獲得美國FDA的認證后,10多年間CTCs檢測技術(shù)及檢測儀器突飛猛進,涌現(xiàn)了許多專注于CTCs診斷的公司,生產(chǎn)的檢測儀器品牌有四十幾種之多[29],包括強生Veridex公司、凱杰公司(Qiagen)、Epic Sciences、CytoTrack、Codiak BioSciences、Illumina、Thermo Fisher以及Celsee Diagnostics等等。以下簡介幾種作者認為較有代表性的CTCs檢測儀器: Cellsearch CTCs檢測系統(tǒng)Cellsearch CTCs檢測系統(tǒng)是Veridex公司(Veridex公司是強生的一個子公司)專有的一項技術(shù),是一種高效的、半自動化的CTCs檢測系統(tǒng)。該系統(tǒng)采用一種獨創(chuàng)的稱為鐵磁流體的抗體,這種鐵磁流體可同鐵微粒相結(jié)合,且與CTCs表面的EpCAM+/CK+/CD45+等受體有極強的特異性結(jié)合的能力,系統(tǒng)用磁場將CTCs分離之后進行生物或化學(xué)染色,細胞表面具有EpCAM+/CK+/CD45+被識別為腫瘤細胞。該系統(tǒng)包括三部分:⑴細胞收集保存管:采集并完善保存細胞使樣本可在室溫下保存小時,方便批量處理和遠途運輸;⑵樣本準CellTracks174。 AutoPrep174。系統(tǒng):采用自動化可復(fù)驗的樣本準備,可自動化樣本快速分析,以得到更精確的結(jié)果;⑶樣本分析CellTracksAnalyzer II174。系統(tǒng):可自動化樣本快速分析。Cellsearch CTCs檢測系統(tǒng)既可以用于體外診斷也可供研究使用,同時將微量細胞進行分析的過程半自動化、標準化,使其成為一個簡單的三步流程。 Celsee PREPCelsee PREP是美國Celsee Diagnostics公司生產(chǎn)的全自動循環(huán)腫瘤細胞富集和檢測平臺。其產(chǎn)品包括CTC富集和檢測系列CelseePREP100 、Celsee PREP400以及圖像分析儀Celsee ANALYZER。與其它免疫學(xué)與免疫磁珠、離心等富集分析方法不同,其而不依賴于特定的標志物,而是通過腫瘤細胞的物理特性來捕獲富集。在現(xiàn)有使用過濾方法富集CTC的產(chǎn)品中,Celsee是第一個無需預(yù)先去除紅細胞、高度自動化、高效率富集CTC的產(chǎn)品,并將細胞富集系統(tǒng)與細胞鑒定和分析系統(tǒng)整合到一起。該系統(tǒng)能夠處理全血液樣本,不需要提前預(yù)處理。Celsee PREP400利用微流體動力學(xué),能實現(xiàn)多通道全自動化處理血液樣本,是多通道全自動的CTC富集和檢測系統(tǒng),實現(xiàn)從樣品到結(jié)果的一步到位。Celsee PREP產(chǎn)品能在不添加標記、不依賴于特定標志物的情況下實現(xiàn)CTC富集和回收,并能直接對富集的細胞進行免疫化學(xué)、DNA FISH、或者mRNA FISH等實驗并能保證細胞活性。Celsee ANALYZER的五色成像系統(tǒng)可對CTC特征、數(shù)量和細胞種類進行高度自動化、高通量的分析,以便研究人員更好地理解癌細胞的突變和異質(zhì)性。 CytoQuestTM亞諾法(Abnova)[30]推出的CytoQuestTM CR是以分子親和力為基礎(chǔ),利用對溫度敏感的奈米柱陣列捕捉及釋放循環(huán)腫瘤細胞(circulating tumor cells,CTCs)的平臺。CytoQuestTM CR能夠提供高純度、高存活率的循環(huán)腫瘤細胞 (CTCs) 以進行后續(xù)的蛋白質(zhì)生物標記(protein biomarker)辨識及基因分析,如熒光原位雜交(FISH)、微陣列以及次世代測序技術(shù)(NGS)。對臨床醫(yī)學(xué)研究而言,CytoQuestTM CR是一個威力強大的輔助工具,能夠幫助辨識與追蹤癌細胞的變化和轉(zhuǎn)移。5 循環(huán)腫瘤細胞檢測的展望早期準確地檢測CTC對合理地進行綜合治療至關(guān)重要,并可作為治療效療評估指標及加強輔助化療的選擇性指標,有助于建立個體化治療方案。然而CTCs是非常罕見的,只是血液中循環(huán)細胞的一小部分,因此除了計數(shù)以外的分子分析從技術(shù)上來說非常具有挑戰(zhàn)性。發(fā)現(xiàn)CTCs生物學(xué)的全貌有助于靶定特異性細胞亞型,從而實現(xiàn)準確用藥和個性化治療的夢想。這不是一件容易的事,因為CTCs不僅罕見,而且異質(zhì)性是腫瘤的基本特性。盡管目前在CTCs研究方面已經(jīng)取得了很大的進步,但是多種分離富集與檢測方法仍難以滿足臨床實際工作的需要,每種技術(shù)的結(jié)果難以統(tǒng)一,理論和實踐上都需要制定行業(yè)技術(shù)標準。如何進一步提高CTCs檢測敏感性及特異性、發(fā)展適應(yīng)臨床CTCs快速診斷需要的高通量、自動化儀器、完善CTCs檢測程序及標準化是今后研究的主要方向。CTCs檢測的前景不僅僅在于其對腫瘤的診斷、治療、監(jiān)測,分選出的CTCs對化療藥物敏感性檢測用于指導(dǎo)個體化治療是臨床亟需和期盼的 腫瘤的檢測與治療,專家、創(chuàng)業(yè)者和投資人有何分析與展望? 5月27日上午在廣州市國際會展中心,火石創(chuàng)造開展腫瘤檢測及治療前沿技術(shù)研討會,邀請腫瘤檢測及治療領(lǐng)域資深專家、投資人和創(chuàng)業(yè)家圍繞最新腫瘤檢測及治療技術(shù)、投資熱點、以及未來發(fā)展方向進行分析和展望,并就腫瘤檢測及治療的創(chuàng)業(yè)機會進行討論,加速創(chuàng)新企業(yè)與產(chǎn)業(yè)資本有效對接,期望促進腫瘤領(lǐng)域技術(shù)成果轉(zhuǎn)化,益于廣大群眾。深圳裕策生物科技有限公司CEO高志博《腫瘤精準免疫治療與基因檢測》高志博先生表示,腫瘤免疫治療近幾年非?;穑饕w現(xiàn)在細胞免疫治療里的CART和TCI技術(shù),以及PD1和PDL1免疫治療。多家機構(gòu)預(yù)測未來免疫治療市場達到1200億美金的,PD1和PDL1個市場可以達到350億美金。然而,目前免疫療法并不完美,由于缺乏合適的臨床分子標志物,PD1/PDL1藥物的受益人群無法被高效的篩選;缺乏有效的抗原靶點,實體瘤的細胞治療技術(shù)進展緩慢。此外,更多的腫瘤免疫機制亟待研究和探索。所以,在治療前,先對患者進行基因檢測,提前預(yù)判藥物療效和預(yù)測治療靶點,將免疫治療技術(shù)與基因組學(xué)技術(shù)結(jié)合,做到真正的腫瘤精準免疫治療,成為了當(dāng)前國際上腫瘤免疫治療研究的前沿。如何準確判斷腫瘤患者的基因組變異與免疫療效的關(guān)系?如何快速準確地篩選細胞免疫治療的適合靶點?這些都是目前亟待解決的問題。此外,缺乏中國人自己的腫瘤免疫基因組數(shù)據(jù)庫,也成為腫瘤精準免疫治療發(fā)展過程中的一個重大阻礙。高志博介紹了由裕策生物發(fā)起,詹啟敏院士擔(dān)任專家顧問委員會主任委員的中國抗癌“天梯計劃”。這項計劃依托中國豐富的腫瘤臨床資源,借助基因組研究和生物信息學(xué)大數(shù)據(jù)分析、人工智能等技術(shù),推動基于臨床數(shù)據(jù)的腫瘤免疫治療特異性抗原及生物標志物的開發(fā)和利用。致力于為臨床腫瘤治療的科學(xué)家和醫(yī)生提供輔助治療決策,為藥企開發(fā)藥物提供可信靶點選擇,加速最新腫瘤免疫療法的臨床轉(zhuǎn)化。裕策生物的目標建立中國人群首個萬人級別的3D腫瘤免疫基因組數(shù)據(jù)庫。金域檢驗臨床基因組檢測中心葉李莉《腫瘤分子檢測應(yīng)用,對樣本質(zhì)量控制方面的思考》葉李莉女士表示,高精技術(shù)和低檢出限往往是相伴相生的,尤其是在醫(yī)學(xué)檢驗中,低檢出限更是大家關(guān)注和追求的目標,這關(guān)系到如何為患者提供更靈敏的檢測技術(shù),幫助疾病的早篩和藥物敏感性檢測。液體活檢是現(xiàn)在腫瘤檢測的熱門話題,其中的檢測標志物主要包括ctDNA、循環(huán)腫瘤細胞以及外泌體三個方面,尤其是ctDNA檢測,在臨床中的應(yīng)用主要由以下四個方面:用藥指導(dǎo);治療監(jiān)測;早期篩查;科學(xué)研究。從樣本質(zhì)量控制的角度來說,技術(shù)的選擇、樣本的質(zhì)量控制以及平臺的選擇,都對最后的檢測結(jié)果和技術(shù)準確性有著重要的影響。其中,用ctDNA檢測基因融合、用分子標簽技術(shù)篩選ctDNA乃至線粒體的低頻突變,以及用ddPCR聯(lián)合NGS來提高檢出率等,都體現(xiàn)出了技術(shù)選擇的重要性;樣本質(zhì)量的控制,以及檢測平臺的選擇,也都是質(zhì)量控制的關(guān)鍵步驟,對最后結(jié)果的準確性至關(guān)重要。最后,要澄清一些誤區(qū),對于一線臨床醫(yī)生來說:,有時候Target/Hotspot Gene Sequencing更加實用;;。麗珠圣美研發(fā)副總裁 唐東江博士《精準醫(yī)學(xué)時代的液態(tài)活檢》腫瘤的難治之處,在于其空間異質(zhì)性和時間異質(zhì)性,在精準醫(yī)學(xué)的背景下,要做到精準診斷和精準治療,實時檢測就變得非常重要。近幾年來,液體活檢成為了應(yīng)對腫瘤時空異質(zhì)性的重要手段,其中比較成熟的兩個物質(zhì)便是循環(huán)腫瘤細
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