【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 陷病毒、乙型肝炎病毒及真菌均為傳染病的主要病原體，只有對(duì)5個(gè)病原體的耐藥機(jī)制進(jìn)行全面研究，才能了解傳染病病原體的耐藥全貌及共性，達(dá)到控制耐藥性的目標(biāo)；②每個(gè)病原體均包含耐藥性的分子流行病學(xué)、耐藥機(jī)制及抗耐藥性的新途徑等方面研究?jī)?nèi)容；③研究目標(biāo)相同，均是通過(guò)病原體耐藥性及耐藥機(jī)制的研究，最終阻止或延緩耐藥性的產(chǎn)生與傳播，提高傳染病的治愈率。課題一 細(xì)菌耐藥機(jī)制及其耐藥性防治研究主要研究?jī)?nèi)容：銅綠假單胞菌對(duì)碳青霉烯類抗生素的耐藥機(jī)制、大腸埃希菌對(duì)喹諾酮類抗菌藥的質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥機(jī)制及CTX－M型ESBL的來(lái)源及傳播機(jī)制、耐藥菌的快速診斷及預(yù)防耐藥性發(fā)生研究。目標(biāo)：明確近年來(lái)新出現(xiàn)的細(xì)菌耐藥性的形成和傳播機(jī)制，及時(shí)、有效地控制耐藥菌感染及耐藥性的傳播。承擔(dān)單位：①?gòu)?fù)旦大學(xué) 負(fù)責(zé)人 王明貴（教授、博士），主要學(xué)術(shù)骨干：張嬰元（教授、博導(dǎo)）、朱德妹（教授、博導(dǎo)）張菁（副教授、碩士）。②浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院：主要學(xué)術(shù)骨干：俞云松（教授、博導(dǎo)）周志慧（副教授、博士）、陳亞崗（教授、博導(dǎo)）經(jīng)費(fèi)比例：37％。課題二 耐藥結(jié)核分枝桿菌的分子流行病學(xué)及耐藥機(jī)制研究主要研究?jī)?nèi)容：我國(guó)耐藥結(jié)核病分子流行病學(xué)特征及傳播模式、我國(guó)主要抗結(jié)核藥物耐藥基因譜的繪制、新耐藥基因及耐藥機(jī)制、耐藥基因型與表型的相關(guān)性以及快速基因藥敏診斷技術(shù)的臨床應(yīng)用評(píng)估。目標(biāo)：明確我國(guó)耐藥結(jié)核分枝桿菌的分子流行病學(xué)特征及耐藥基因譜，有效控制耐藥結(jié)核病。承擔(dān)單位：①?gòu)?fù)旦大學(xué) 負(fù)責(zé)人 張文宏（副教授、博士）主要學(xué)術(shù)骨干：翁心華（教授、博導(dǎo)）、高謙(教授、博士)楊燕萍 (講師、博士) ②中科院上海生命科學(xué)院 張穎（研究員，兼美國(guó)約翰霍普金斯大學(xué)布隆博格公共衛(wèi)生學(xué)院副教授）經(jīng)費(fèi)比例：27％。課題三 我國(guó)艾滋病病毒耐藥性分子流行病調(diào)查和耐藥機(jī)制研究主要研究?jī)?nèi)容：HIV耐藥性分子流行病學(xué)研究，建立使用高靈敏度、高通量的基因型測(cè)定準(zhǔn)確預(yù)測(cè)耐藥特性，分析HIV逆轉(zhuǎn)錄酶與核苷酸類似物復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和功能，及其與細(xì)胞相關(guān)因子的分子作用機(jī)制，以HIV1 RT的結(jié)構(gòu)解析為基礎(chǔ)提出對(duì)抗HIV耐藥株的新靶位，包括細(xì)胞靶位并設(shè)計(jì)出12種新型抗病毒藥物，通過(guò)本研究提出我國(guó)艾滋病治療臨床藥物的選擇、臨床治療方案的調(diào)整和進(jìn)一步優(yōu)化方式。目標(biāo)：系統(tǒng)地開(kāi)展HIV耐藥性流行病學(xué)調(diào)查和耐藥機(jī)制的研究，為艾滋病治療提供新的抗耐藥性途徑，最終提出避免或減少HIV耐藥的出現(xiàn)和流行的新途徑。承擔(dān)單位：①中國(guó)疾病預(yù)防控制中心 負(fù)責(zé)人 邵一鳴（研究員、博士）主要學(xué)術(shù)骨干：張曉燕（副研究員、博士）、馬麗英（副研究員）、袁霖（助理研究員） ②中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)院 主要學(xué)術(shù)骨干：丁建平(研究員、博士)張美蘭（副研究員）、祁維平（助理研究員） ③北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 主要學(xué)術(shù)骨干：高峰（教授、博士）魯鳳民（副教授），史宇暉（講師，博士）經(jīng)費(fèi)比例：15％。課題四 乙型肝炎病毒的耐藥機(jī)制主要研究?jī)?nèi)容：核苷類似物對(duì)HBV的耐藥規(guī)律及其天然無(wú)應(yīng)答性的原因、HBV變異序列特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的研究、對(duì)導(dǎo)致干擾素抗病毒治療失敗的宿主因素進(jìn)行分析、建立并優(yōu)化乙肝病毒表型耐藥及藥敏實(shí)驗(yàn)的體外鑒定系統(tǒng)、臨床HBV耐藥監(jiān)測(cè)系統(tǒng)和網(wǎng)絡(luò)的建立。目標(biāo)：通過(guò)對(duì)HBV耐藥規(guī)律的研究、耐藥監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的建立，提高抗HBV藥物的臨床療效。承擔(dān)單位：①上海第二醫(yī)科大學(xué) 負(fù)責(zé)人 張欣欣（教授、博士） 主要學(xué)術(shù)骨干：陸志檬（教授、博導(dǎo)）、龔啟明（副教授） ②南方醫(yī)科大學(xué) 主要學(xué)術(shù)骨干：溫淑娟（副教授）王戰(zhàn)會(huì)（助理研究員） ③北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 莊輝（教授，院士），李彤（副教授） 李杰（副教授）經(jīng)費(fèi)比例：13％。課題五 白色念珠菌耐藥機(jī)制研究主要研究?jī)?nèi)容：通過(guò)分子流行病學(xué)調(diào)查，耐藥菌株基因變異分析，明確我國(guó)白色念珠菌耐藥變異的特點(diǎn)及規(guī)律；應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片雜交和蛋白質(zhì)二維電泳技術(shù)，結(jié)合生物信息學(xué)分析技術(shù)，發(fā)現(xiàn)新的白色念珠菌耐藥相關(guān)基因；通過(guò)相關(guān)基因缺失菌和高表達(dá)菌的表型分析，分析白色念珠菌耐藥相關(guān)基因功能，并進(jìn)一步闡明白色念珠菌耐藥機(jī)制；利用白色念珠菌耐藥株和耐藥基因高表達(dá)優(yōu)勢(shì)變異株，篩選抗耐藥白色念珠菌新化合物。目標(biāo)：明確我國(guó)耐藥白色念珠菌的分子流行病學(xué)特征及耐藥變異特點(diǎn)；研究新的白色念珠菌耐藥相關(guān)基因及其功能，進(jìn)一步闡明白色念珠菌耐藥機(jī)制；建立有效篩選抗耐藥白色念珠菌新化合物的模型。承擔(dān)單位：中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué) 負(fù)責(zé)人 姜遠(yuǎn)英（教授、博導(dǎo)） 主要學(xué)術(shù)骨干：顧 軍（教授、博導(dǎo)）、曹永兵(講師、博士)經(jīng)費(fèi)比例：8%技術(shù)路線1. 細(xì)菌耐藥機(jī)制及耐藥性防治（1）多重耐藥銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制 通過(guò)對(duì)碳青霉烯酶、膜通透性改變及主動(dòng)外排機(jī)制的研究，明確多重耐藥銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制，對(duì)新發(fā)現(xiàn)的碳青霉烯酶進(jìn)行進(jìn)一步的研究。 1）碳青霉烯酶的研究：通過(guò)對(duì)碳青霉烯酶的篩選、酶特性及基因型分類等研究，了解產(chǎn)酶在耐藥性形成中的作用，與國(guó)外資料比較，了解國(guó)內(nèi)細(xì)菌產(chǎn)碳青霉烯酶特性；對(duì)新基因型進(jìn)行基因定位（質(zhì)?；蛉旧w）、克隆表達(dá)、酶動(dòng)力學(xué)等研究。 2）膜通透性研究：以聚丙烯胺凝膠電泳（SDS－PAGE）方法分析外膜孔蛋白的情況，與敏感株比較，闡明外膜蛋白在碳青霉烯類抗生素耐藥形成中的作用。 3）主動(dòng)外排系統(tǒng)的研究：采用CCCP抑制試驗(yàn)及外排泵調(diào)控基因PCR擴(kuò)增及序列分析方法明確外排表達(dá)狀況。（2）大腸埃希菌耐藥機(jī)制研究1）大腸埃希菌對(duì)喹諾酮類的質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥機(jī)制研究：①質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥基因qnrA及qnrB分子流行情況：檢測(cè)gnr在患者臨床分離株、健康人腸道、家禽、家畜腸道中的分布，明確質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥機(jī)制在喹諾酮類耐藥性形成中的作用。②耐藥機(jī)制研究：qnr產(chǎn)物Qnr蛋白對(duì)喹諾酮作用靶位DNA旋轉(zhuǎn)酶A、B亞基的保護(hù)作用、Qnr作用位點(diǎn)和Qnr蛋白的模建及晶體結(jié)構(gòu)的研究，明確這一近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的耐藥現(xiàn)象的形成機(jī)制。2）大腸埃希菌等革蘭陰性桿菌CTX－M型ESBLs的傳播機(jī)制及傳播規(guī)律：國(guó)內(nèi)的ESBL以CTX－M型為主，通過(guò)對(duì)編碼基因周圍DNA的分析、比較，了解編碼基因的起源及其傳播規(guī)律。（3）建立耐藥菌快速基因診斷方法采用分子生物信息學(xué)技術(shù)，研究病原菌的基因組序列或特征性基因序列，種屬的保守區(qū)序列，致病基因和耐藥基因序列或特征性的基因序列等，如16SrRNA，23SrRNA，16SrRNA－23SrRNA基因區(qū)間的基因序列差異等。目標(biāo)是建立多重DNA引物的反應(yīng)模式，可鑒別革蘭陽(yáng)性和革蘭陰性菌的主要菌種。同時(shí)可以識(shí)別主要的耐藥基因以及重要的耐藥基因組DNA片斷，以進(jìn)行耐藥譜的測(cè)定，進(jìn)而采用分子生物學(xué)方法直接從人體體液或相關(guān)標(biāo)本中檢測(cè)細(xì)菌的特異性DNA，從而建立快速、準(zhǔn)確的病原菌診斷方法。（4）建立常用抗菌藥治療各種重要病原菌的“防突變濃度”范圍：擬采用體外模型測(cè)定抗菌藥測(cè)定金葡菌、肺炎鏈球菌和銅綠假單胞菌的MPC和“突變選擇窗”，據(jù)此改進(jìn)現(xiàn)有的給藥方案，達(dá)到提高治愈率，減少耐藥菌產(chǎn)生的目的。2. 耐藥結(jié)核分枝桿菌的分子流行病學(xué)及耐藥機(jī)制（1）我國(guó)耐藥結(jié)核病分子流行病學(xué)特征及傳播模式的研究擬對(duì)我國(guó)華北與華東地區(qū)近10年來(lái)的結(jié)核初發(fā)病人菌株庫(kù)進(jìn)行DNA指紋分析，同時(shí)對(duì)這些出發(fā)病人的耐藥狀況進(jìn)行鑒定，對(duì)主要抗結(jié)核藥物耐藥菌株的主要耐藥基因進(jìn)行鑒定，從而對(duì)耐藥的進(jìn)化特征、聚集性特征和耐藥基因分布特征進(jìn)行生物信息學(xué)分析。從而給出我國(guó)華北與華東地區(qū)近10年來(lái)的主要抗結(jié)核藥物耐藥性的進(jìn)化特征與耐藥基因發(fā)生特征。同時(shí)，我們還以華東地區(qū)3個(gè)區(qū)縣所有的菌陽(yáng)結(jié)核病病人（包括涂陽(yáng)和涂陰病人）作為樣本，利用MIRU和IS6110－RFLP的方法鑒定所有菌株的基因型。結(jié)合流行病學(xué)資料，分析結(jié)核病的流行規(guī)律，建立以分子流行病學(xué)方法為基礎(chǔ)的耐藥結(jié)核病傳播的規(guī)律快速鑒定平臺(tái)。（2）主要抗結(jié)核藥物耐藥基因譜的繪制及新耐藥基因與耐藥機(jī)制的研究在我國(guó)華北與華東地區(qū)耐藥菌株分子流行病學(xué)研究基礎(chǔ)上，進(jìn)行主要耐藥基因篩查，繪制我國(guó)耐藥結(jié)核病相關(guān)基因與位點(diǎn)譜，為分子生物學(xué)診斷方法的研制奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。在篩查