【文章內(nèi)容簡介】 氧作為電子受體的，稱為氧化型。細菌在分解葡萄糖的過程中，可以進行無氧降解的，稱為發(fā)酵型，此類細菌無論在有氧或無氧的環(huán)境中都能分解葡萄糖，通常為兼性厭氧菌。不分解葡萄糖的細菌，稱為產(chǎn)鹼型。挑取少許純種細菌，同時穿刺接種兩支Hugh—Leifson培養(yǎng)基，其中1支在接種后，滴加高度不少于1cm的無菌液體石臘于培養(yǎng)基上進行封蓋。于35C培養(yǎng)48h以上，觀察結(jié)果。培養(yǎng)基變黃表示細菌分解葡萄糖而產(chǎn)酸，顏色不變?yōu)椴环纸馄咸烟恰Ｈ魞芍囵B(yǎng)基均為黃色為發(fā)酵型；均不變?yōu)楫a(chǎn)鹼型或不分解糖型；僅不加液體石臘的培養(yǎng)基管內(nèi)變黃為氧化型。用于細菌種屬間的鑒別。腸桿菌科細菌為發(fā)酵型，非發(fā)酵菌通常為氧化型或產(chǎn)鹼型。此外微球菌屬可氧化葡萄糖，而葡萄球菌屬則能發(fā)酵葡萄糖。（ONPG試驗）細菌分解乳糖必須有半乳糖苷滲透酶（galact osidepermease）和β半乳糖苷酶的參加。前者可將乳糖通過細胞壁送到細胞內(nèi)。后者存在于細菌的細胞內(nèi)，將進入菌細胞的乳糖分解為葡萄糖和半乳糖。具有上述兩種酶的細菌可迅速分解乳糖。遲緩分解乳糖的細菌只有β半乳糖苷酶，缺乏半乳糖苷滲透酶，或是其活性很弱，不能很快將乳糖運送到菌細胞內(nèi)，所以通常需要幾天時間乳糖才被分解。ONPG與乳糖的分子結(jié)構(gòu)相似，且分子較小，不需半乳糖苷滲透酶的運送就可進入菌細胞內(nèi)，由菌細胞內(nèi)的β半乳糖苷酶將其分解為半乳糖和黃色的鄰位硝基酚。采用ONPG試驗，可將遲緩分解乳糖的細菌迅速取得陽性結(jié)果。無色的ONPG經(jīng)β半乳糖苷酶水解后生成黃色的鄰位硝基酚。迅速及遲緩分解乳糖的細菌如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬等陽性。而不發(fā)酵乳糖的細菌如沙門菌、變形桿菌等均為陰性。 某些細菌能水解七葉苷生成七葉素與培養(yǎng)基中枸櫞酸鐵的亞鐵離子起反應(yīng)，生成黑色的化合物。將被檢菌接于七葉苷培養(yǎng)基上35℃孵育18~24h。使培養(yǎng)基變黑為陽性。克雷伯菌屬、腸桿菌屬和沙雷菌屬能水解七葉苷，腸球菌屬和D群鏈球菌也能水解七葉苷，并耐受膽汁。 細菌如產(chǎn)生淀粉酶，可將培養(yǎng)基中的淀粉分解為糖類，滴加碘液在培養(yǎng)基上，在菌落周圍透明區(qū)。將被檢菌劃線接種（或點種）淀粉血清瓊脂平板，35℃培養(yǎng)24h，在培養(yǎng)基上滴加革蘭碘液，觀察結(jié)果。培養(yǎng)基呈藍色，菌落周圍有透明圈為陽性。白喉棒狀桿菌可產(chǎn)生淀粉酶，分解淀粉。（MR）試驗 細菌在代謝過程中分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，某些細菌可進一步將丙酮酸分解為乳酸、乙酸、甲酸等，加入甲基紅指示劑出現(xiàn)紅色（陽性）。有些細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進一步轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)如醇、酮、醛、氣體和水，加入甲基紅指示劑呈黃色（陰性）。將被檢菌接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，于35℃培養(yǎng)2~4d，加入甲基紅指示劑2滴，立即觀察結(jié)果。紅色為陽性；桔紅色為弱陽性；黃色為陰性。主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別，前者為陽性，后者為陰性。此外沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌、變形桿菌等為陽性，腸桿菌屬、克雷伯菌等為陰性。 細菌在葡萄糖的代謝過程中生成丙酮酸，有些細菌可將丙酮酸進一步脫羧產(chǎn)生乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在堿性溶液中被空氣中的氧氧化為二乙酰（丁二酮），進而與培養(yǎng)基中的精氨酸所含的胍基發(fā)生反應(yīng)，生成紅色化合物，即VP反應(yīng)陽性。將被檢菌接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基后，加入5%，再加入40%，振搖后觀察結(jié)果。于數(shù)分鐘內(nèi)呈紅色為陽性，如無紅色出現(xiàn)，而且于35℃中4h仍無紅色者為陰性。本試驗常與甲基紅試驗一起使用。前者為陽性的細菌，后者為陰性，反之亦如此。如大腸埃希菌、沙門菌屬、志賀菌屬等甲基紅呈陽性反應(yīng)，VP反應(yīng)則陰性。相反，如沙雷菌、陰溝腸桿菌等，VP反應(yīng)陽性，而甲基紅反應(yīng)陰性。 某些細菌可氧化葡萄糖酸鉀，生成2酮基葡萄糖酸。2酮基葡萄糖酸是一種還原性物質(zhì)，可與班氏試劑起反應(yīng)，出現(xiàn)棕色或磚紅色的Cu2O沉淀。接種細菌至改良Haynes培養(yǎng)基中，48h后取培養(yǎng)液1ml，加入班氏定性試劑1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷卻。觀察結(jié)果。出現(xiàn)黃到磚紅色沉淀為陽性。不變或仍為藍色為陰性。主要用于假單胞菌的鑒定。(二)、蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗 某些細菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸和游離的氨，加入三氯化鐵試劑與苯丙酮酸螯合后產(chǎn)生綠色反應(yīng)。大量接種被檢菌于苯丙氨酸瓊脂斜面上，35℃培養(yǎng)18~24h，加入10%三氯化鐵試劑出現(xiàn)綠色為陽性。主要用于鑒定變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登菌屬細菌，均為強陽性，腸桿菌科中其它細菌均為陰性。 細菌分解氨基酸使其脫羧基，生成胺和CO2。各種細菌的產(chǎn)生的脫羧酶種類不一樣，但氨基酸經(jīng)脫羧后所產(chǎn)生的胺，均可使培養(yǎng)基變堿。最常測定的氨基酸有三種：賴氨酸、鳥氨酸和精氨酸。挑取待測菌分別接種三種氨基酸培養(yǎng)基及對照培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)1~4d，每天檢查一次結(jié)果。氨基酸測定管由黃變?yōu)樽仙?，黃色為陰性（僅發(fā)酵葡萄糖）。對照（無氨基酸）為黃色（發(fā)酵葡萄糖）。沙門菌屬中除傷寒和雞沙門菌之外，其余沙門菌屬的鳥氨酸和賴氨酸脫羧酶均陽性。致賀菌屬中除宋內(nèi)和鮑氏志賀菌外，其它志賀菌均陰性。對鏈球菌和弧菌科細菌的鑒定也有重要價值。 精氨酸經(jīng)兩次水解，先生成瓜氨酸和氨，瓜氨酸又在瓜氨酸酶的作用下，形成鳥氨酸、氨及二氧化碳。鳥氨酸又在鳥氨酸脫羧酶的作用下生成腐胺及二氧化碳。將被檢菌接種于脫羧酶培養(yǎng)基培養(yǎng)基，腸桿菌科應(yīng)覆蓋滅菌液體石蠟。假單胞菌通常采用Thornley氏培養(yǎng)基,不加石蠟。指示劑顏色轉(zhuǎn)為堿性為陽性，即溴甲酚紫轉(zhuǎn)為紫色，酚紅轉(zhuǎn)為紅色。Thornley氏培養(yǎng)基通常陽性在24~48h后，最長可觀察至7d。 某些細菌能產(chǎn)生尿素酶分解尿素，產(chǎn)生大量的氨使培養(yǎng)基變堿。將被檢菌接種于相應(yīng)的尿素培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)18~24h觀察結(jié)果。陰性時應(yīng)繼續(xù)觀察4d。細菌分解尿素后培養(yǎng)基變堿，使酚紅指示劑變紅為陽性，不變?yōu)殛幮浴Ｆ娈愖冃螚U菌和普通變形桿菌、雷極普羅威登菌和摩根摩根菌陽性，斯氏和產(chǎn)堿普羅威登菌陰性。 細菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚與試劑中的對二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色。挑取純培養(yǎng)物接種蛋白胨水培養(yǎng)基，于35℃培養(yǎng)1~2d，使成兩層，觀察結(jié)果。兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽性，無色為陰性。主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。 某些細菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成硫化氫，遇鉛或亞鐵離子生成黑色硫化物。將培養(yǎng)物接種于醋酸鉛或克氏鐵瓊脂等培養(yǎng)基，經(jīng)35℃培養(yǎng)1~2d，觀察結(jié)果。醋酸鉛培養(yǎng)基變黑色為陽性，不變?yōu)殛幮浴？耸翔F瓊脂等培養(yǎng)基，還原含硫化合物而產(chǎn)生硫化氫，與二價鐵生成黑色的硫化亞鐵，陰性不產(chǎn)生黑色沉淀。腸桿菌科中沙門菌屬、愛德華菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬細菌，絕大多數(shù)硫化氫陽性，其它菌屬陰性。此外，腐敗假單胞菌、口腔類桿菌和某些布魯菌硫化氫也陽性。 明膠酶是細菌產(chǎn)生的一種胞外酶，能分解明膠為氨基酸，從而失去凝固力，使半固體的明膠培養(yǎng)基成為流動的液體。將被檢菌穿刺接種于明膠培養(yǎng)基，于20℃培養(yǎng)7d，逐日觀察結(jié)果。如室溫高培養(yǎng)基自行溶化時，可于冰箱內(nèi)放置30min，不再凝固為陽性。沙雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝腸桿菌等可液化明膠，腸桿菌科其它細菌很少液化明膠。金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、腐敗假單胞菌也能產(chǎn)生明膠酶。有些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類桿菌等也能液化明膠。(三)、 碳源和氮源利用試驗 當細菌利用銨鹽作為唯一氮源，并能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長分解枸櫞酸鈉，使培養(yǎng)基變堿。在枸櫞酸鹽瓊脂斜面上濃密劃線，大量接種被檢菌，于35℃培養(yǎng)1~4d，逐日觀察結(jié)果。枸櫞酸鹽培養(yǎng)基斜面上有細菌生長，培養(yǎng)基變藍為陽性；無細菌生長、顏色不變（綠色）為陰性。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性，沙門菌屬、克雷伯菌屬、粘質(zhì)和液化沙雷菌及某些變形桿菌以及枸櫞酸桿菌陽性。此外，銅綠假單胞菌、洋蔥假單胞菌和嗜水氣單胞菌也能利用枸櫞酸鹽。 細菌