化驗(yàn)技術(shù)協(xié)會(huì)第八期培訓(xùn)資料(編輯修改稿)
2024-08-09 21:48 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 [CMCC(F)98001](7)黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003] 菌液制備制備的菌液，一般當(dāng)日使用。取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，177?！媾囵B(yǎng)18～24小時(shí)；白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，℃177?！媾囵B(yǎng)24～48小時(shí)，％無(wú)菌氯化鈉溶液制成每毫升含菌小于100菌落形成單位(cfu)的菌懸液。將黑曲霉菌斜面的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，℃177。℃培養(yǎng)5～7天，使大量的孢子成熟。加入3～5ml ％無(wú)菌氯化鈉溶液，用玻棒或白金餌輕輕振搖將孢子洗脫。然后，用管口帶有能過(guò)濾菌絲的裝置(如薄層無(wú)菌棉花或紗布的無(wú)菌毛細(xì)吸管)的吸管吸出胞子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，％無(wú)菌氯化鈉溶液將其稀釋至每毫升含小于100cfu的孢子懸液(可采用比濁法)。以上菌液在供試驗(yàn)的同時(shí)，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂，白色念球菌和黑曲霉用改良馬丁培養(yǎng)基注皿(1m1)或平板涂布()，按規(guī)定條件培養(yǎng)后，計(jì)數(shù)。4 培養(yǎng)基 一般采用商品脫水培養(yǎng)基，臨用時(shí)按照使用說(shuō)明書進(jìn)行配制，配制培養(yǎng)基時(shí)稱量要迅速以免吸潮而影響稱量的準(zhǔn)確性，同時(shí)為避免增加培養(yǎng)基中的金屬離子及其他微量化學(xué)元素而影響微生物的生長(zhǎng)、鑒別、所用器具應(yīng)為潔凈玻璃器皿，所用溶解用水為純水。 培養(yǎng)基的pH值應(yīng)符合規(guī)定，否則必須校正。調(diào)節(jié)pH值：測(cè)定pH值的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25℃177。2℃，調(diào)節(jié)pH值可用無(wú)菌的lmol／L(1N)氫氧化鈉或10％碳酸鈉溶液、lmol／L鹽酸溶液或15%冰醋酸溶液。分裝好的培養(yǎng)基及時(shí)密封后必須在配制當(dāng)天(2小時(shí)內(nèi)最佳)進(jìn)行滅菌處理。 新鮮配制的培養(yǎng)基，應(yīng)按中國(guó)藥典規(guī)定的處方，對(duì)培養(yǎng)基的原材料要進(jìn)行挑選，化學(xué)藥品均需用CP試劑規(guī)格。 除葡萄糖和指示液外，將處方中各成分加水后置有石棉網(wǎng)的電爐、可調(diào)電磁爐或其它適宜的加熱設(shè)備中，微溫溶解。用lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，～，煮沸，用棉(紙)漿減壓抽濾或以脫脂棉，濾紙等濾材過(guò)濾，使培養(yǎng)基澄清。 加入葡萄糖和指示液，搖勻，補(bǔ)足水量，調(diào)節(jié)pH值(～)，177。，分裝，裝量不宜超過(guò)容器的2／3，以免滅菌時(shí)溢出。 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基I，分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基的氧化層(粉紅色)不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1／2，滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的顏色不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的l／5，否則，須經(jīng)100℃水浴或流通蒸汽加熱至粉紅色消失(不超過(guò)20分鐘)，迅速冷卻。培養(yǎng)基只限加熱一次，并防止被污染。 滅菌應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序進(jìn)行。培養(yǎng)基應(yīng)只能進(jìn)行一次蒸汽滅菌處理。固體培養(yǎng)基使用前的融化，不宜使用蒸汽滅菌柜融化瓊脂培養(yǎng)基，宜選用沸水浴融化培養(yǎng)基。 未開封脫水培養(yǎng)基應(yīng)避光儲(chǔ)存于25℃以下陰涼干燥處，已開封的脫水培養(yǎng)基應(yīng)蓋緊，避光儲(chǔ)存于25℃以下陰涼干燥處。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃避光的環(huán)境，有條件置冰箱4℃～8℃冷藏儲(chǔ)存較好。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中，應(yīng)在三周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，可在一年內(nèi)使用。 培養(yǎng)基的裝量 對(duì)于采用直接接種法檢查的液體樣品，培養(yǎng)基的裝量與供試品的裝量相關(guān)，供試品的裝量小于20ml的樣品，培養(yǎng)基裝量15ml；供試品的裝量大于或等于20ml小于50ml的樣品，培養(yǎng)基裝量40ml；供試品的裝量大于或等于50ml小于100ml的樣品，培養(yǎng)基裝量80ml； 對(duì)于采用直接接種法檢查的固體樣品(含藥品及外科用輔料棉花及紗布)，培養(yǎng)基的裝量均為100ml；對(duì)于縫合線、一次性醫(yī)用材料及醫(yī)療器具，如果醫(yī)療器具體積過(guò)大，培養(yǎng)基的裝量可在2000ml以上，以將其完全浸沒為準(zhǔn)。 對(duì)于采用薄膜過(guò)濾法檢查的樣品，若用封閉式薄膜濾器操作的，培養(yǎng)基裝量100ml；若用開放式薄膜濾器操作的，培養(yǎng)基裝量50ml。 培養(yǎng)基的適用性檢查培養(yǎng)基的檢查包括無(wú)菌檢查和靈敏度檢查；符合規(guī)定者方可用于供試品的無(wú)菌檢查。培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行，但是所用培養(yǎng)基不符合無(wú)菌要求，供試品的無(wú)菌檢查結(jié)果應(yīng)視為無(wú)效。培養(yǎng)基的靈敏度檢查應(yīng)對(duì)購(gòu)進(jìn)的每個(gè)批號(hào)的脫水培養(yǎng)基進(jìn)行靈敏度檢查，檢查合格后方可使用，但當(dāng)培養(yǎng)基的配制方法和滅菌程序發(fā)生變更時(shí)，應(yīng)再次對(duì)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行檢查。 培養(yǎng)基無(wú)菌檢查的操作及結(jié)果判定每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支(瓶)，按規(guī)定溫度培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。 培養(yǎng)基靈敏度檢查的操作及結(jié)果判定取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，每支接種菌量為lml(含菌小于100cfu)，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種白色念珠菌、黑曲霉各2支，每支接種菌量為lml(含菌小于100cfu)，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5天，逐日觀察結(jié)果?？瞻讓?duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度
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