化驗技術(shù)協(xié)會第八期培訓(xùn)資料-文庫吧在線文庫
【正文】 塞，并采用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，則可以保存時間較長。加入3～5ml ％無菌氯化鈉溶液，用玻棒或白金餌輕輕振搖將孢子洗脫。 新鮮配制的培養(yǎng)基，應(yīng)按中國藥典規(guī)定的處方，對培養(yǎng)基的原材料要進行挑選，化學(xué)藥品均需用CP試劑規(guī)格。 滅菌應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序進行。 培養(yǎng)基的適用性檢查培養(yǎng)基的檢查包括無菌檢查和靈敏度檢查；符合規(guī)定者方可用于供試品的無菌檢查。當建立藥品的無菌檢查法時，應(yīng)進行方法的驗證，以確認供試品在該實驗條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計。取出濾膜接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基中，或?qū)⑴囵B(yǎng)基直接加至濾筒內(nèi)。若采用的是薄膜過濾法，可采用增加沖洗液的用量、改變沖洗液的種類、更換濾膜品種等方法消除供試品的抑菌作用。 培養(yǎng)基用量 除另有規(guī)定外，供試品無菌檢查時，每支培養(yǎng)基的實際裝量及所占容器高度的比例應(yīng)與“驗證試驗”所用的培養(yǎng)基相同。 供試品在移入緩沖間前應(yīng)除去外包裝、消毒外表面并編號，培養(yǎng)基管(瓶)%新潔爾滅或酒精棉擦拭瓶(管)外壁，然后連同其他用具(包括無菌衣、帽、口罩等)移入緩沖間，開啟操作間紫外燈和空氣過濾裝置并使其工作1小時以上。按規(guī)定或需滅活的供試品可用滅活劑溶解，將瓶內(nèi)供試液抽出稀釋至規(guī)定的濃度。應(yīng)根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)，如抑菌性供試品采用低吸附性的濾膜，油性供試品選用疏水性濾膜。%無菌氯化鈉溶液或其他適宜的溶液至具塞的瓶中，混勻。按規(guī)定溫度與時間培養(yǎng)。 直接接種法 操作 用適當滅菌用具，取上述制備妥的供試品在近火焰區(qū)以右手握拳，以小指為主撥開培養(yǎng)基管的塞子，管口通過火焰，移至火焰下側(cè)，沿著培養(yǎng)基管壁分別接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基11管，(其中1管于操作結(jié)束后移至接種室接種金黃色葡萄球菌對照菌液1m1)，改良馬丁培養(yǎng)基10管，輕輕搖動使勻，培養(yǎng)14日。 (4)供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和(或)無菌操作技術(shù)不當引起的。 結(jié)果判定若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判斷供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何1管顯混濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結(jié)果無效即生長的微生物非供試品所含。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。將集菌培養(yǎng)器的排氣孔上膠帽取下，集菌培養(yǎng)器底部的排液管口擰上，將沖洗瓶取下?lián)Q上相應(yīng)的培養(yǎng)基瓶，啟動電源，將培養(yǎng)基泵入指定的培養(yǎng)器內(nèi)，關(guān)閉電源。同時每片濾膜的總過濾量不宜太大，以避免濾膜上的微生物受損傷。如果容器內(nèi)有一定的真空，可用適當?shù)臒o菌器材（如一端帶有除菌過濾器的針頭），向供試品容器內(nèi)導(dǎo)入無菌空氣，再按無菌操作開啟容器取出內(nèi)容物。 將消毒過的安瓿針劑先用碘酒棉球或碘伏棉球?qū)碴惩獠坎潦脺缇?，用砂輪或滅菌銼輕割安瓿頸部（便于折開安瓿），再用75%乙醇棉球?qū)⒒蔷撇羶?，待干? 陰性對照 凡無菌檢查，均應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋劑同法操作作為陰性對照。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品應(yīng)盡量抽取批生產(chǎn)開始和結(jié)束或生產(chǎn)過程出現(xiàn)異常情況下的產(chǎn)品進行檢驗；一般情況下，供試品無菌檢查若采用薄膜過濾，應(yīng)增加1/2的最小檢驗數(shù)量作陽性對照用；若采用直接接種法，應(yīng)增加供試品1支(或瓶)作陽性對照用。每管加菌量小于100cfu。驗證時，按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定及下列要求進行操作試驗。 培養(yǎng)基靈敏度檢查的操作及結(jié)果判定取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2支，每支接種菌量為lml(含菌小于100cfu)，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種白色念珠菌、黑曲霉各2支，每支接種菌量為lml(含菌小于100cfu)，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5天，逐日觀察結(jié)果。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2～25℃避光的環(huán)境，有條件置冰箱4℃～8℃冷藏儲存較好。分裝，裝量不宜超過容器的2／3，以免滅菌時溢出。 培養(yǎng)基的pH值應(yīng)符合規(guī)定，否則必須校正?！媾囵B(yǎng)18～24小時；白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，℃177。對已通過確認鑒定后的菌種可以使用或傳代保藏。并在相應(yīng)的菌種接收登記表上記錄所有關(guān)于菌種的信息。水流量法 將濾膜裝于除菌濾器上，開動真空泵，壓力在700mmHg(93kPa)下，抽濾已濾清的水約500ml，計算出每lmin的濾速。手術(shù)鑷、手術(shù)剪洗凈、擦干。 2 儀器及用具 無菌室內(nèi)應(yīng)準備好盛有消毒用5％甲酚或其他適宜消毒溶液的玻璃缸、乙醇燈、火柴、鑷子、75％乙醇棉、碘伏棉等。 浮游菌檢測方法及標準 用專門的采樣器，宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計和定時器，嚴格按儀器說明書的要求操作并定期校驗，采樣器和培養(yǎng)皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認可的其它培養(yǎng)基。緩沖間和操作間所設(shè)置的紫外線殺菌燈(2～／m3)，應(yīng)定期檢查輻射強度，要求在操作面上達40μW面積一般不超過lOm2，不小于5m2,?！?77?！?，℃177。由1～2個緩沖間、操作間組成(操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對)，操作間與緩沖間之間應(yīng)
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