工業(yè)中應(yīng)用雙酶法制取葡萄糖生產(chǎn)工藝及生產(chǎn)應(yīng)用畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-07-25 00:38 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ：；實(shí)驗(yàn)步驟如下：①葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取7只干凈的試管，編號(hào)，按表二加入試劑，做兩份平行。表2：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作試劑管號(hào)1234567葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/mL0蒸餾水/mL03，5二硝基水楊酸/mL搖勻，置沸水浴中煮沸5min。取出后冷卻接近室溫，加蒸餾水8mL，即總體積10mL。以1號(hào)管作為空白調(diào)零點(diǎn)，在540nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定光密度。以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，光密度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。②酶活力的測(cè)定取干凈的試管，編號(hào)，按表三進(jìn)行操作。表3：酶活力測(cè)定取樣表操作項(xiàng)目淀粉酶活力測(cè)定123%淀粉酶液/mL預(yù)保溫將各試管和淀粉溶液置于70℃恒溫水浴中保溫10min3,5二硝基水楊酸/mL00添加2%淀粉溶液/mL保溫在70℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min3,5二硝基水楊酸/mL0沸水浴5min定容加入8mL蒸餾水將各試管搖勻，顯色后進(jìn)行540nm比色測(cè)定光密度，記錄測(cè)定結(jié)果。 糖化酶活力的測(cè)定實(shí)驗(yàn)采取的方法是次碘酸鈉法，溫度40℃的情況下每小時(shí)催化可溶性淀粉水解生成1mg葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活力單位。配制實(shí)驗(yàn)試劑如下：①2%可溶性淀粉：稱取絕干可溶性淀粉2g，以少許蒸餾水調(diào)勻，傾入80mL左右的沸水中，繼續(xù)煮沸至透明狀。冷卻至室溫后，加蒸餾水定容至100mL；②，：；③：稱取碘化鉀36g，溶于100mL蒸餾水中，溶解后定容至1000mL；④：稱取4gNaOH，用水溶解后，定容至1000mL；⑤1mol/L硫酸溶液：量取56mL濃硫酸（），換換倒入適量水中，定容至1000mL；⑥：稱取硫代硫酸鈉（Na2S2O35H2O)，溶于1000mL煮沸后冷卻的蒸餾水中，存于棕色瓶?jī)?nèi)；⑦%淀粉指示劑：，用少許水調(diào)勻，傾入80mL沸水中，繼續(xù)煮至透明，冷卻后定容至100mL。具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：①吸取2%可溶性淀粉10mL，混勻后于40℃水浴中預(yù)熱10min；②加入酶液1mL（空白實(shí)驗(yàn)以煮沸失活的酶液代替），于40℃水浴中反應(yīng)10min。反應(yīng)結(jié)束時(shí)，立即于沸水浴中加熱使酶失活；③取上述反應(yīng)液5mL于碘量瓶，搖勻，在暗處放置15min，加入2mol/L硫酸溶液2mL；④%可溶性淀粉為指示劑。；⑤計(jì)算酶活力。在上述條件下每小時(shí)催化可溶性淀粉生成1mg葡萄糖的酶量定義為1個(gè)酶活力單位，即：酶活力=（BA)N16/560/10式中：A加酶液組平均消耗的硫代硫酸鈉溶液的量；B空白組消耗的硫代硫酸鈉溶液的量；N硫代硫酸鈉溶液的當(dāng)量濃度；(1mol/L)相當(dāng)?shù)钠咸烟堑馁|(zhì)量(g/mol)；16反應(yīng)液的總體積（ml）；5吸取反應(yīng)液的體積（ml）；60/10反應(yīng)10min，換算成1h的酶活力系數(shù)。五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與處理 費(fèi)林混合溶液的標(biāo)定%的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行的，目的是在于確定費(fèi)林混合液的濃度，以計(jì)算樣品的還原力。表4：費(fèi)林混合溶液標(biāo)定記錄表123初讀數(shù)/mL預(yù)加后讀數(shù)/mL最終讀數(shù)/mL滴定體積/mL平均/mL故而，V1= 最優(yōu)液化條件的正交實(shí)驗(yàn)液化過(guò)程中，淀粉漿液從最開(kāi)始的白色均勻液體在75℃水浴鍋中慢慢變稠糊化，白色純度進(jìn)一步提高。加入α淀粉酶后置于水浴鍋中繼續(xù)攪拌，料液逐漸變稀變黃，呈黃白色均勻液體。在100℃的水浴鍋滅活，溶液再度變稠變黃，最終得到淡黃色乳狀均勻膠體。在表一條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，得到的料液分別用阿貝折射儀測(cè)量其干物質(zhì)濃度、量筒與電子天平測(cè)量其密度，最后測(cè)定其費(fèi)林滴定消耗體積，測(cè)得數(shù)據(jù)如下（表中滴定用樣品已經(jīng)過(guò)8倍稀釋）：表5：最優(yōu)液化條件正交實(shí)驗(yàn)記錄表 列號(hào)試驗(yàn)號(hào)溫度/℃液化時(shí)間/min酶用量/(g/50g淀粉)料液指標(biāo)滴定體積mlABCD5ml質(zhì)量/g干物質(zhì)含量/%1211（55）1（20）1（）124212（30）2（）2313（40）3（）32342（65）123522316231273（75）132832132393321根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，還原力RP=；葡萄糖當(dāng)量DE=。式中：—混合費(fèi)林試劑在標(biāo)定時(shí)所消耗的D葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；—在測(cè)定時(shí)所消耗的樣品液的體積，mL；—所測(cè)定樣品液的稀釋倍數(shù)；—樣品的密度，g/mL；—樣品的干物質(zhì)含量，%。按以上步驟，整理數(shù)據(jù)，得到如下結(jié)果：表6：最優(yōu)液化條件正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理表 列號(hào)試驗(yàn)號(hào)溫度/℃液化時(shí)間/min酶添加量/(g/50g淀粉)DE值A(chǔ)BCD11（55）1（20）1（）1212（30）2（）2313（40）3（）342（65）123522316231273（75）1328321393321K1K總=K2
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