高二生物多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增dna片段(編輯修改稿)
2025-07-04 23:33 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 RNA合成、蛋白質(zhì)合成。1．3DNA分子復(fù)制的人工控制解開(kāi)螺旋：在80～100℃時(shí)，DNA雙螺旋打開(kāi)，形成兩條DNA單鏈，稱(chēng)為變性?；謴?fù)螺旋：在50℃左右時(shí)，兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱(chēng)為復(fù)性。復(fù)制條件：緩沖液,DNA模板,四種脫氧核苷酸,熱穩(wěn)定DNA聚合酶,兩種引物。反應(yīng)場(chǎng)所：PCR儀（自動(dòng)溫度周期性調(diào)節(jié)）。［思考］緩沖液相當(dāng)細(xì)胞內(nèi)的什么成分？（核基質(zhì)）1．4PCR的反應(yīng)過(guò)程延伸復(fù)性變性變性：在95℃時(shí)DNA解旋復(fù)性：在50℃時(shí)引物與DNA單鏈結(jié)合延伸：在72℃時(shí)合成DNA子鏈（兩個(gè)引物間的序列）2．實(shí)驗(yàn)操作2．1 PCR反應(yīng)體系：緩沖液、DNA模板，四種脫氧核苷酸原料、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種RNA引物，水2．2 實(shí)驗(yàn)操作步驟2．3 按照PCR反應(yīng)體系配方配制反應(yīng)液；（2）將PCR反應(yīng)體系50μL用微量移液器轉(zhuǎn)移到微量離心管（）中；（3）將微量離心管放到PCR儀中；（4）設(shè)置PCR儀的工作參數(shù)。（5）DNA在PCR儀中大量擴(kuò)增。2．4 水浴法：將微型離心管依次在95℃、55℃、72℃的恒溫水浴鍋中循環(huán)處理相應(yīng)時(shí)間。3．實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)3．1避免外源DNA污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。3．2緩沖液和酶分裝成小份，－20℃低溫保存。3．3每添加一種
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