基因工程藥物-概念性問(wèn)題(編輯修改稿)
2025-06-24 01:39 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，才真正使分子的體外切割和連接成為可能。 ? 限制性核酸內(nèi)切酶是一類能夠識(shí)別雙鏈 DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割雙鏈 DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。它們主要是從原核生物中分離純化出來(lái)的。 ? 在核酸內(nèi)切酶的作用下，侵入細(xì)菌的“外源 DNA分子被切割成不同大小的片段，而細(xì)菌本身的 DNA由于修飾酶的保護(hù)作用，可免于自身限制酶的降解。 限制性核酸內(nèi)切酶分類和命名 ? 分類：即 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ 型酶 主要特性 Ⅰ 型 Ⅱ 型 Ⅲ 型 限制和修飾作用 單一多功能的酶 分開(kāi)的核酸內(nèi)切酶和甲基化酶 具有一種共同亞基的雙功能酶 限制酶的蛋白結(jié)構(gòu) 3種不同的酶 單一的成分 2種不同的亞基 限制作用所需輔助因子 ATP、 mg2+、 S 腺苷甲硫氨酸 mg2+ ATP、 mg2+（ S 腺苷甲硫氨酸） 切割位點(diǎn) 可能隨機(jī)切割 位于寄主特異性位點(diǎn)或其附近 距寄主特異性位點(diǎn)339。端 24~26bp 序列特異性的切割 不是 是 是 在 DNA克隆中的用處 無(wú)用 非常有用 有用 限制酶的命名 ? （ 1）用屬名的頭一個(gè)字母和種名的頭兩個(gè)字母，組成的 3個(gè)字母的略語(yǔ)表示寄主菌的物種名稱。例如大腸桿菌（ escherichia coli）用 Eco表示，流感嗜血菌（ haemophilus influenzae）用 Hin表示。 ? （ 2）用一個(gè)寫(xiě)在右下方的標(biāo)注字母代表菌株或型，例如 EcoR。如果限制和修飾體系在遺傳上是由病毒或質(zhì)粒引起的，則在縮寫(xiě)的寄主菌的種名右下方附加一個(gè)標(biāo)注字母，表示為染色體外成分。例如 EcoR I, EcoP I。 ? （ 3）如果一種特殊的寄主菌株，具有幾個(gè)不同的限制與修飾體系，則以羅馬數(shù)字。如流感嗜血菌 Rd菌株的幾個(gè)限制與修飾體系分別表示為 Hind I、 Hind II、 Hind III等。 ? （ 4）原先的命名現(xiàn)在得到簡(jiǎn)化，原則為：把所有略語(yǔ)字寫(xiě)成一行；命名酶名稱不再特別標(biāo)出限制酶或修飾酶，即略去 R與 M字母。 II型限制性核酸內(nèi)切酶的基本特性 ? （ 1）在 DNA分子雙鏈的特異性識(shí)別序列部位，切割 DNA分子形成鏈的斷裂； ? （ 2） 2個(gè)單鏈斷裂部位在 DNA分子上的分布，通常不是彼此直接相對(duì)的； ? （ 3）斷裂的結(jié)果形成的 DNA片段，也往往具有互補(bǔ)的單鏈延伸末端，但平末端例外。 ? 絕大多數(shù)的 II型限制酶都能識(shí)別由
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