限制性內(nèi)切酶小知識(shí)(編輯修改稿)
2025-06-22 22:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 鏈相對(duì)稱的位置。 EcoRⅠ 和 HindⅢ 的識(shí)別序列和切割位置如下： EcoRⅠ G↓AATTC； HindⅢ A↓AGCTT CTTAA↑G TTCGA↑A 有一些限制酶的識(shí)別序列不是對(duì)稱的，如 AccBSⅠ [CCGCTC（ 3/3） ] 和 BssSⅠ [CTCGTG（ 5/1） ]。識(shí)別序列后面括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示在兩條鏈上的切割位置。 AccBSⅠ CCG↓CTC； BssSⅠ C↓TCGTG GGC↑GAG GAGCA↑C 有一些限制酶可識(shí)別多種序列，如 AccⅠ 識(shí)別的序列是 GT↓MKAC ，也就是說可識(shí)別 4 種序列，其中兩種是對(duì)稱的，另兩種是非對(duì)稱的。 HindⅡ 識(shí)別的序列是 GTY↓RAC 。 有一些限制酶識(shí)別的序列呈間斷對(duì)稱，對(duì)稱序列之間含有若干個(gè)任意堿基。如 AlwNⅠ 和 DdeⅠ ，它們的識(shí)別序列如下： AlwNⅠ CAGNNNC↓TG； DdeⅠ C↓TNAG GT↑CNNNGAC GANT↑C 3．限制酶切割的位置 限制酶對(duì) DNA 的切割位置大多數(shù)在內(nèi)部，但也有在外部的。在外部的，又有兩端、兩側(cè)和單側(cè)之別。切點(diǎn)在兩端的有 Sau3AⅠ （ ↓GATC）、NlaⅢ （ CATG↓）和 EcoRⅡ （ ↓CCWGG） 等；在兩側(cè)的有 BcgⅠ [（ 10/12） CGA（ N） 6TGC（ 12/10） ]和 TspRⅠ（ CASTGNN↓）， BcgⅠ 酶的切割特性與其它酶不同，它們?cè)谧R(shí)別位點(diǎn)的兩端各切開一個(gè)斷點(diǎn)，而不是只產(chǎn)生一個(gè)斷點(diǎn)。切點(diǎn)在識(shí)別位點(diǎn)外側(cè)的還有 BbvⅠ [GCAGC（ 8/12） ] 和 BspMⅠ [ACCTGC（ 4/8） ] 等。 BcgⅠ ↓10（ N） CGA（ N） 6TGC（ N） 12↓； ↑12（ N） CGA（ N） 6ACG（ N） 10↑ TspRⅠ NNCAC（ G） TGNN↓ ↑NNGTG（ C） ACNN 1．限制酶產(chǎn)生匹配粘端（ Matched end） 識(shí)別位點(diǎn)為回文對(duì)稱結(jié)構(gòu)的序列經(jīng)限制酶切割后，產(chǎn)生的末端為匹配粘端，亦即粘性末端（ cohesive end），這樣形成的兩個(gè)末端是相同的，也是互補(bǔ)的。若在對(duì)稱軸 5’ 側(cè)切割底物， DNA 雙鏈交錯(cuò)斷開產(chǎn)生 539。 突出粘性末端，如 EcoRⅠ ；若在 3’ 側(cè)切割，則產(chǎn)生 339。 突出粘性末端，如 KpnⅠ 。 EcoRⅠ NNG↓AATTCNN NNCTTAA↑GNN 2．限制酶產(chǎn)生平末端（ Blunt end） 在回文對(duì)稱軸上同時(shí)切割 DNA 的兩條鏈，則產(chǎn)生平末端，如 HaeⅢ（ GG↓CC）， SmaⅠ （ CCC↓GGG）， EcoRV（ GAT↓ATC）。產(chǎn)生平末端的 DNA 可任意連接，但連接效率較粘性末端低。 限制酶產(chǎn)生的末端 3．限制酶產(chǎn)生非對(duì)稱突出端 許多限制酶切割 DNA 產(chǎn)生非對(duì)稱突出端。當(dāng)識(shí)別序列為非對(duì)稱序列時(shí)，切割的 DNA 產(chǎn)物的末端是不同的，如 BbvCⅠ ，它的識(shí)別切割位點(diǎn)如下： CC↓TCAGC GGAGT↑CG 有些限制酶識(shí)別簡(jiǎn)并序列，其識(shí)別的序列中有幾種是非對(duì)稱的。如 AccⅠ ，它的識(shí)別切割位點(diǎn)如下，其中 GTAGAC 和 GTCTAC 為非對(duì)稱： GT↓AT/CGAC CATA/GC↑TG 有些限制酶識(shí)別間隔序列，間隔區(qū)域的序列是任意的，如 DraⅢ 和 EarⅠ ，它們的識(shí)別切割位點(diǎn)分別是 CAC↑NNN↓GTG 和 CTCTTC （ 1/4）。 4．同裂酶（ isoschizomer） 識(shí)別相同序列的限制酶稱同裂酶，但它們的切割位點(diǎn)可能不同。具體可分為以下幾種情況。 ① 同序同切酶
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