種煙草病毒tmvppt課件(編輯修改稿)
2025-06-21 23:57 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 mmol /L TrisHCl( pH8． 8) ， 200 mmol /L ( NH4 ) 2SO4， 0． 1% Tween20］， 2 μL 25 mmol /L MgCl2，2 μL dNTP( 各 2． 5mmol /L) ， 1 μL 上游和下游引物混合物( 各 10μmol /L) ， 0． 2 μL Taq DNA 聚合酶 ( 5 U /μL) 和 2 μL cDNA 模板。 PCR 反應(yīng)循環(huán)參數(shù) : 94℃ 預(yù)變性 3 min。 94℃ 變性30 s， 48℃ 退火 30 s， 72℃ 延伸 1 min，循環(huán) 30 次 。 72℃ 延伸10 min。取 5 μL PCR產(chǎn)物經(jīng) 2%瓊脂糖凝膠電泳分析比較 單重 RTPCR電泳檢測(cè)結(jié)果 以 TMV、 CMV、 TEV、PVY 和 TVBMV 5 種病 毒的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為 PCR 反應(yīng)的模板，經(jīng) PCR 擴(kuò) 增分別得到大小為 2327 34 456 和 547 bp 的 5 條特異性條帶 檢測(cè)步驟 多重 RTPCR 多重 RTPCR 反應(yīng)體系 : 取 TMV、 CMV、 TEV、PVY 和 TVBMV 5 種病毒的混合病株提取總 RNA，反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，將 RT 產(chǎn)物隨機(jī)混合作為多重RTPCR 反應(yīng)的模板，將各病毒特異性引物同時(shí)加入一個(gè)反應(yīng)管進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。 退火溫度分別選擇 42℃ 、 45℃ 、 48℃ 、 51℃ 、54℃ 和 57℃ 。 延伸時(shí)間
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1