原位雜交與凋亡檢測技術(編輯修改稿)
2025-06-09 00:53 本頁面
【文章內容簡介】 切片置于 2 SSC中，微波爐加熱 95~ 100℃ 10分鐘；迅速插入冰水 2分鐘； DNA探針于 90 ℃ 水中 10分鐘 ,迅速插入碎冰 3分鐘； 雜交：切片在空氣干燥后，按每張切片加 20μl含地高辛標記的 DNA/RNA探針原位雜交液，將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上，恒溫箱 37 ~ 400C過夜。 雜交后洗滌：揭掉蓋玻片， 30370C 左右水溫的 2 SSC洗滌 5分鐘 3次。 滴加雜交探針穩(wěn)定液 37400C 反應46小時（此步可省略）。 SSC洗滌 5分鐘 3次。 滴加封閉液：室溫 20分鐘，不洗。 滴加兔抗地高辛： 370C ， 60分鐘。 1 PBS洗 5分鐘 3次。 1滴加生物素化羊抗兔 IgG， 370C， 30分鐘。 1 PBS洗 5分鐘 3次。 1滴加 SP試劑 : 370C， 30分鐘。 1 PBS 洗 5分鐘 4次。 1 DAB顯色： 2030分鐘，充分水洗。 1酒精脫水，二甲苯透明，封片。 七、 結果判斷： DNA原位雜交的陽性信號一般存在于細胞核內。 RNA原位雜交的陽性信號位于胞漿內。 生殖細胞瘤 16號染色體 ISH HER2熒光原位雜交 皮膚鱗狀上皮細胞核 HPV DNA（ +） ISH 宮頸粘膜 上皮 HPV16（ +） ISH 宮頸粘膜上皮 HPV16（ +） ISH 宮頸鱗癌 HPV18(+)， ISH 鼻咽癌 EBER(+), ISH 腎小管上皮細胞核 HBVDNA（ +）， ISH 食管粘膜基底層細胞質 Egr1 mRNA（ +）， ISH 食管鱗癌細胞質 Egr1 mRNA（ +）， ISH 食管鱗癌細胞質 CyclinD1mRNA（ +）， ISH 胃腺癌細胞質端粒酶hTR(+), ISH 肝細胞癌 CD44V6 mRNA（ +）， ISH 肝細胞癌 整合素 a5 mRNA（ +）， ISH 乳腺癌細胞質 PR mRNA(+), ISH 腦星形細胞瘤 血小板生長因子 mRNA（ +）， ISH 陽性信號的評定（半定量）： （ 1）陽性細胞數：陽性細胞 ≤10% 、 ≤30% 、 ≤ 70% 和 70%分別為 4分。 （ 2）陽性著色強度：按弱、中、強三 級分別為 3分。 用計算機輔助的圖像分析、顯微分光度計或圖像分析儀對不同類型核酸顯色數量和強度進行檢測。 七、原位雜交結合免疫組織化學雙標記法： 原位分子雜交檢測 DNA或 RNA， 能進行基因定位或在轉錄水平上研究基因表達； 免疫組織化學檢測細胞和組織內蛋白抗原 成分，在翻譯水平上研究基因表達。二者 結合起來，形成一個新的分子檢測系統(tǒng)， 對于深入研究基因擴增、表達的調控與疾 病的發(fā)生機理有廣泛的應用前景。 注意事項： 先做原位雜交（因 mRNA易被降 解），后做免疫組化。 做原位雜交時應適當減低漂洗溫度， 以減少生物活性肽或蛋白的丟失。 原位雜交完成后不顯色，在加堿性磷酸酶標記的抗地高辛抗體時混入免疫組化的第一抗體。 用上述方法必須是雙酶雙標，即分別用鹼性磷酸酶和辣根過氧化物酶。 用不同的顯色液，一般先用 DAB, 后用 CIP/NBT顯色，分別顯成棕黃色和紫藍色。 陽性細胞可為棕或藍單色或為藍棕混合色。 腎小管細胞核 HBVDNA， 細胞質 HBsAg 雙（ +
環(huán)評公示相關推薦
鄂ICP備17016276號-1