【文章內(nèi)容簡介】 1956年，荷蘭學(xué)者范第姆特 (Van Deemter)提出了色譜過程動力學(xué)理論 —— 速率理論。 塔板高度 渦流擴(kuò)散項(xiàng) 縱向擴(kuò)散項(xiàng) 傳質(zhì)阻抗項(xiàng) H = A + B/u + Cu 51 Band Broadening: Eddy Diffusion 渦流擴(kuò)散 52 Band Broadening: Longitudinal Diffusion 縱向擴(kuò)散 53 渦流擴(kuò)散項(xiàng) A(多徑擴(kuò)散 ) A=2?dp 填充不規(guī)則因子 填充物平均直徑 縱向擴(kuò)散項(xiàng) B/u(分子擴(kuò)散 ) B=2?Dg 彎曲因子 ,與填充物有關(guān) 填充柱 ?1,空心毛細(xì)管柱 ?=1 組分在載氣中的分子擴(kuò)散系數(shù) 載體適當(dāng)細(xì)粒度、顆粒均勻 增大載氣分子量或線速度 空心毛細(xì)管柱 A=0 packing irregular average particle diameter obstruction factor diffusion coefficient of solute in the mobile phase 54 Band Broadening: Resistance to Mass Transfer 傳質(zhì)阻抗 55 傳質(zhì)阻力項(xiàng) Cu C=Cg+Cl Cl= 2kdf2 3(1+k)2Dl 固定液液膜厚度 組分在固定液中的擴(kuò)散系數(shù) df小， Dl大， C就小 56 LC中 Giddings 液相色譜速率方程式 H = A + B/u + (Cm + Csm + Cs) u H = A + (Cm + Csm + Cs) u H = A + (Cm + Csm) u 57 58 色譜法的定性定量分析 59 定性分析 1 利用保留值定性 與對照品比較 ① tR(樣 )=tR(對 ) ②增加峰高 ?相對保留值 (相對保留時間 ) r1,2=t’R1/t’R2 未知物 標(biāo)準(zhǔn)物 ?求保留指數(shù)，與文獻(xiàn)值對照 2 兩譜聯(lián)用定性 GCMS， GCFTIR等 60 常用的定量方法 ? 峰面積百分比法 – 常用于有關(guān)物質(zhì)的測定 ? 外標(biāo)法 – 在液相色譜中用的最多 ? 內(nèi)標(biāo)法 – 準(zhǔn)確，但是麻煩 – 在氣相色譜中用的最多 外標(biāo)法定量 ? 配制一系列已知濃度的標(biāo)樣 外標(biāo)法定量 ? 實(shí)際色譜圖 MinutesMinutesMinutes0 50 100 150 200 25001,0002,0003,0004,0005,000樣品濃度響應(yīng)值峰面積 ( )標(biāo)準(zhǔn)曲線 內(nèi)標(biāo)法定量（一） ? 配制一系列濃度的標(biāo)樣，其中加有內(nèi)標(biāo)樣 0 . 0 00 . 2 00 . 4 00 . 6 00 . 8 01 . 0 01 . 2 01 . 4 01 . 6 01 . 8 02 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0v o l t sM i n u t e sM e t h y l P a r a b e nE t h y l P a r a b e nP r o p y l P a r a b e nB u t y l P a r a b e n內(nèi)標(biāo)法定量（二） 0 50 100 150 200 25001020304050樣品濃度標(biāo)樣峰面積內(nèi)標(biāo)樣峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線 特點(diǎn)： 無需各組份都被檢出、洗脫 需要標(biāo)樣，需要內(nèi)標(biāo)樣 結(jié)果與進(jìn)樣體積無關(guān) 66 色譜法的發(fā)展 ? 生物色譜法 ? 中藥色譜指紋圖譜 67 生物色譜法 (Biochromatography) ? 80年代中后期， 生命科學(xué)與色譜分離技術(shù)交叉 ? 將活性生物大分子、活性細(xì)胞膜、甚至活細(xì)胞固著于色譜擔(dān)體上，作為一種 生物活性填料 ，用于液相色譜法，形成一種能夠模仿藥物與生物大分子、靶體或細(xì)胞相互作用的 色譜系統(tǒng) ，表征 藥物與生物大分子、靶體間的相互作用 。 ? 中科院大連化學(xué)物理研究所 鄒漢法、西安交通大學(xué) 賀浪沖、南京中醫(yī)藥大學(xué)國家規(guī)范化中藥藥理實(shí)驗(yàn)室 68 ?對于 中藥 等成分復(fù)雜的研究對象 ， 生物色譜法由于 固定相能夠特異性 、 選擇性地與活性成分結(jié)合 ， 可以排除大量非作用雜質(zhì)成分的干擾 ， 是研究中藥等復(fù)雜對象的有效手段 。 ?藥物在生物色譜柱上的 保留行為直接與其活性或與生物大分子 、 靶體 、 細(xì)胞結(jié)合相關(guān) ， 具有一定的藥理學(xué)或生理學(xué)意義； 69 ? 分子生物色譜法 (Molecular Biochromatography) ? 仿生物膜色譜法 (Artificial Biomembrane Chromatography) ? 生物膜色譜法 (Biomembrane chromatography) ? 細(xì)胞生物色譜法 (Cell Biochromatography) 70 例 鄒漢法等以血漿中兩種主要的載體蛋白：人血清白蛋白 (HSA)和 α酸性糖蛋白 (AGP)為固定相，對常用中藥當(dāng)歸、川芍、茵陳、黃芪、赤芍、銀杏葉、丹參等進(jìn)行了分析 ?分子生物色譜指紋圖譜 ， 用于快速鑒別中藥材及其提取物 ?快速篩選中藥活性成分 ?中藥活性成分在 HSA、 AGP柱上的 保留行為直接與各成分的血漿結(jié)合率相關(guān) 71 Separation of four kinds of Chinese tradltional medicine on the HSA column (A)當(dāng)歸 (B)黃芪 (C) 赤芍 (D)川芎 流動相：乙腈： 50 mmol／ L phosphate buffer(pH )15:85 72 例 賀浪沖 研究 細(xì)胞膜色譜法 （ Cell Membrane Chromatography， CMC），以冠狀動脈細(xì)胞膜、心肌細(xì)胞膜、血管細(xì)胞膜、大腦細(xì)胞膜等作為固定相，對常用中藥丹參、人參、白芍及其方藥等中的有效成分進(jìn)行了篩選 . 73 Immobilized liposome chromatography (ILC) is regarded as a powerful tool to study drugmembrane interactions in LC. Liposome formed by phosphatidylcholine, the main ponents found in cell membrane, was noncovalently or covalently immobilized on the silica particles as chromatographic stationary phase. Cell membrane Stationary phase 脂質(zhì)體柱 74 五味子提取物在脂質(zhì)體柱上的分離 75 全二維色譜分離五味子提取物 Threedimensional landscape images Twodimensional contour plot 76 中藥指紋圖譜 ? 技術(shù)水平較低 ， 現(xiàn)代技術(shù)應(yīng)用少 。 ? 參差不齊 ， 許多十幾年未變 。 ? 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無法說明發(fā)揮藥效的化學(xué)成分的數(shù)量和含量 ， 也無法保證每批中藥的成分一致性 （ 穩(wěn)定性 ） ， 國際未接受 。 ? 體系存在缺陷 ， 無法被國際認(rèn)可 ,亟待提高和發(fā)展 77 一、背景 —— 中醫(yī)藥特色與優(yōu)勢 ? 為中華民族的繁衍作出了巨大的作用 。 ? 公共衛(wèi)生資源充分發(fā)揮作用；在國家初級保健系統(tǒng)中的重要地位 。 ? 降低了疾病發(fā)生率 ， 提高了公眾的生命質(zhì)量 ， 特別是在治療慢性病 、 養(yǎng)生保健等有優(yōu)勢 。 ? 新藥研發(fā)費(fèi)用遠(yuǎn)較化學(xué)合成藥物為低。 78 傳統(tǒng)中藥的不足 ? 研究開發(fā)體系不完善 ? 生產(chǎn)不規(guī)范和規(guī)模小 ? 國內(nèi)外認(rèn)可程度不高 79 中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵問題 ? 理念 : 將傳統(tǒng)中藥的優(yōu)勢特色與現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)相結(jié)合 ， 按照國際規(guī)范進(jìn)行研究 、 開發(fā) 、 生產(chǎn) 、 管理和使用 。 ? 原則 ：保持中醫(yī)藥優(yōu)勢特色；與