微陣列分析導(dǎo)論ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 03:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 Tissue in situ hybridization） ?反向雜交，基因芯片的前身 探 針 ?探針標記 – 放射性同位素標記， 125I、 32P、 33P和 35S ?非放射性標記 – 熒光法，化學(xué)發(fā)光法，電化學(xué)發(fā)光法，生物發(fā)光，顯色法 ?探針種類（ Probe type） – 基因組探針 – cDNA探針 – 寡聚核苷酸探針（ Oligo） 探針的來源 ? DNA探針根據(jù)其來源有 3種： ?一種來自基因組中有關(guān)的基因本身，稱為基因組探針（genomic probe）； ?另一種是從相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄獲得了 mRNA，再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針，稱為 cDNA 探針（ cDNA probe）。與基因組探針不同的是， cDNA探針不含有內(nèi)含子序列。 ?此外，還可在體外人工合成堿基數(shù)不多的與基因序列互補的 DNA片段，稱為寡核苷酸探針。 微陣列是如何定義的？ ? 微陣列必須符合： ①有規(guī)則的； ②顯微尺度的； ③平面的； ④特異性的 。 吸附在玻璃基片上的靶標 DNA分子。單鏈的靶標 DNA分子和溶液中熒光素標記的探針發(fā)生雜交結(jié)合，使得芯片上的點呈現(xiàn)出熒光信號，信號的強度和對應(yīng)的基因表達水平成正相關(guān)，熒光信號的強度按照彩色模式來賦予不同的顏色，基因的表達情況能夠通過檢測芯片上不同位置的熒光信號來定量。 規(guī)則的微陣列 規(guī)則的陣列是指陣列上待分析的單元按照行和列的方式進行排列的集合 微陣列上的點按照行和列規(guī)則地排列而非無規(guī)則排列；點的大小和點間距均一而非不均一；點的位置明確而非模棱兩可。 微陣列定義 顯微尺度的點 ?顯微尺度（ microscopic):是一個物體若沒有顯微鏡的幫助，不能清楚地被看見。一般以小于 1mm為界。 ?微陣列： ① 光引導(dǎo)原位合成的點： 15～ 30181。m ② 點制的點： 50～ 350181。m ③ 組織芯片的點： 200～ 600181。m 微陣列定義 平面基片 ?平面基片是像玻璃、塑料、硅片一樣平行不能彎曲的基質(zhì)載體。玻片是微陣列中用得最為廣泛的基質(zhì)載體。 ?非平面基片：尼龍膜、硝酸纖維素膜等。 ?平坦的表面優(yōu)點：適合大規(guī)模自動化生產(chǎn)；為光掩膜、接觸式針點樣、噴墨式非接觸點樣和其它制備工序提供了精密的距離，確保制備微陣列的高質(zhì)量；使掃描和成像變得容易。 微陣列定義 特異性吸附 ? 微陣列上的每一個點能與標記好的探針混合物中的一種分子發(fā)生吸附，才能對此基因或基因
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